风疹病毒衣壳蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选及分析

风疹病毒(Rubella virus,RV)的衣壳蛋白(Capsid protein,CP)不仅是病毒颗粒的重要组成部分,而且还可以通过与宿主蛋白之间的相互作用来调控病毒的转录和复制.为了系统研究衣壳蛋白与宿主蛋白之间的相互作用关系,我们从RV基因组中克隆获得衣壳蛋白基因序列,将该序列导入含有eXact-6His串联亲和纯化标签的慢病毒表达载体中,并构建了稳定表达eXact-6His-Capsid融合蛋白的293T细胞系.通过eXact和6His标签的两次亲和纯化获得衣壳蛋白相互作用蛋白复合物,质谱检测并筛选后发现22个可能与衣壳蛋白相互作用的宿主蛋白.随后构建衣壳蛋白的相互作用网络并进行功能学分析,发现其相互作用蛋白主要参与病毒感染、RNA剪切、细胞凋亡及酶相关通路等过程.     

瓜蒌皮激活PI3K/PKB通路减轻柯萨奇病毒感染心肌细胞损伤的实验研究

柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)是引起病毒性心肌炎最常见的病毒株,感染心肌细胞后能够激活细胞凋亡、引起细胞损伤;已有研究证实,瓜萎皮激活磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB)通路减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,但瓜萎皮对CVB3感染引起心肌细胞凋亡的调节作用及机制尚不清楚.因此,本研究将观察瓜蒌皮激活PI3K/PKB通路减轻柯萨奇病毒感染心肌细胞损伤的作用.在培养心肌H9c2细胞后分组,对照组给予不含药物及病毒的培养基,CVB3组给予含有CVB3病毒液的培养基,瓜萎皮组含有CVB3病毒液及瓜萎皮提取物的培养基,瓜萎皮+抑制剂组含有CVB3病毒液、瓜萎皮提取物及抑制剂LY294002的培养基.检测培养基中乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)及磷酸肌酸激酶同工酶(Creatine phosphokinase-isoenzyme-MB,CK-MB)的含量、细胞活力 A490、细胞凋亡率、细胞中 cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、p-PI3K、p-PKB的表达.结果显示,与对照组比较,CVB3组培养基中LDH、CK-MB的含量、细胞凋亡率、细胞中天冬氨酸蛋白水解酶-9(cleaved caspase-9,cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-9)、cleaved caspase-3的表达均增加,A490及细胞中p-PI3K、p-PKB的表达均降低(P＜0.05);与CVB3组比较,瓜萎皮组培养基中LDH、CK-MB的含量、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均降低,A490及细胞中p-PI3K、p-PKB的表达均增加(P＜0.05);与瓜萎皮组比较,瓜萎皮+抑制剂组培养基中LDH、CK-MB的含量、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均增加,A490及细胞中p-PI3K、p-PKB的表达均降低(P＜0.05).以上结果表明,瓜萎皮提取物能够减轻CVB3感染心肌细胞的损伤及凋亡,激活PI3K/PKB通路是可能的分子机制.本研究首次发现瓜萎皮提取物对CVB3感染心肌细胞的损伤和凋亡具有抑制作用;同时,本研究还初步阐明了瓜萎皮提取物发挥心肌保护作用的分子机制、即激活PI3K/PKB通路.     

肠道菌群失调与肝硬化伴SBP患者疾病发展的关系及三联活菌胶囊干预性研究

目的分析肠道菌群失调与肝硬化伴自发性细菌性腹膜炎(SBP)患者疾病发展的关系及三联活菌胶囊的应用价值。方法将我院2017年1月至2019年12月间收治的94例肝硬化伴SBP患者作为观察组研究对象,50例健康者作为本研究对照组,将观察组患者依照随机信封法分为B组及A组,B组采用三联活菌胶囊治疗,A组采用常规方案治疗。采用16S rDNA测序技术检测患者肠道菌群种类和多样性。结果观察组患者诺卡氏菌科、盐单胞菌科、肠杆菌科、链球菌科、韦荣球菌科丰度均高于对照组,拟杆菌科、普雷沃菌科、毛螺菌科均低于对照组,OTUs、Chao、Shannon指数明显低于对照组。肠道菌群种类、OTUs、Chao、Shannon指数是影响肝硬化伴SBP患者疾病发展的影响因素,以上差异均就有统计学意义(P0.05)。治疗后B组患者肠道菌群OTUs、Chao和Shannon明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论肠道菌群失调是影响肝硬化伴SBP患者疾病发展的独立影响因素,采用三联活菌胶囊干预可有效纠正患者体内肠道菌群失调。     

盆底电刺激对大鼠盆底肌肌肉、神经发育的形态学影响研究

目的:探讨与研究盆底电刺激对大鼠盆底肌肌肉、神经发育的形态学影响。方法:36只Wistar产后健康雌性大鼠分为对照组、模型组与刺激组,每组12只。模型组与刺激组都建立了压力性尿失禁模型,对照组不给予任何处理。建模后刺激组给予盆底电刺激,每3 d一次,持续治疗12 d;模型组在建模后不给予任何治疗处理。结果:模型组与刺激组建模后6 d、12 d的膀胱最大容量、肌肉拉长收缩力、血清神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)水平低于对照组(P<0.05),刺激组高于模型组(P<0.05)。对照组可见施万细胞,未见神经元细胞,肌束结构完整,肌纤维上可见明暗相间的周期性横纹;模型组神经元及肌纤维出现缺血性改变,肌纤维肿胀,肌膜核内移;刺激组未见靶状纤维改变,肌纤维粉染,肌纤维肌束结构完整,胞浆着色浅。结论:盆底电刺激在压力性尿失禁大鼠的应用能促进血清NPY的释放,提高盆底肌肌肉与膀胱最大容量,促进大鼠盆底神经发育。     

慢性鼻病中乏氧诱导因子与5-脂加氧酶表达变化及其与疾病严重程度关系研究

摘要 目的：探究慢性鼻病中乏氧诱导因子（HIF-1α）与5-脂加氧酶（5-LOX）表达变化及其与疾病严重程度关系。方法：选取我院2019年7月-2020年11月期间收治的75例慢性鼻病患者作为研究对象;其中鼻息肉25例,变态反应性鼻炎25例,鼻窦炎25例;同期选择30例经鼻中隔偏曲矫正下鼻甲成形术患者的下鼻甲黏膜组织设为对照组。比较四组患者乏氧诱导因子与5-脂加氧酶蛋白及mRNA水平;并分析在不同鼻部疾病中,HIF-1α、5-LOX的相关性。结果：鼻息肉组、变态反应性鼻炎组、鼻窦炎组患者HIF-1α、5-LOX表达水平高于对照组（P<0.05）;鼻息肉组、变态反应性鼻炎组、鼻窦炎组患者HIF-1α、5-LOX表达水平比较无统计学意义（P>0.05）。鼻息肉组、变态反应性鼻炎组、鼻窦炎组患者HIF-1α、5-LOX mRNA表达水平高于对照组（P<0.05）;鼻息肉组、变态反应性鼻炎组、鼻窦炎组患者HIF-1α、5-LOX mRNA表达水平比较无统计学意义（P>0.05）。Parman相关分析,在不同鼻部疾病中,HIF-1α蛋白表达与5-LOX蛋白表达呈正相关（P<0.05）。结论：在慢性鼻病（鼻息肉、变态反应性鼻炎、鼻窦炎）中,HIF-1α、5-LOX表达水平显著升高,且在慢性疾病发展中可能相互促进、互相影响。     

院前急救联合绿色通道模式对急性心肌梗死PPCI术患者救治效果和术后不良心血管事件的影响

摘要 目的：探讨院前急救联合绿色通道模式对行急诊经皮冠状动脉介入术（PPCI）的急性心肌梗死（AMI）患者救治效果和术后不良心血管事件的影响。方法：选取2017年1月~2019年6月期间我院收治的行PPCI术的AMI患者200例,采用随机数字表法将患者分为对照组（n=100）和研究组（n=100）,对照组患者予以传统急诊模式,研究组患者予以院前急救联合绿色通道模式,比较两组患者救治效果、满意度、确诊时间、心肌再灌注治疗时间、住院时间、术后不良心血管事件。结果：研究组抢救时间、急救反应时间、确诊时间、心肌再灌注治疗时间以及住院时间均短于对照组（P<0.05）。研究组治疗后的临床总有效率高于对照组（P<0.05）。研究组的总满意度为91.00%（91/100）,高于对照组的76.00%（76/100）（P<0.05）。研究组术后不良心血管发生事件发生率为2.00%（2/100）,低于对照组的17.00%（17/100）（P<0.05）。结论：行PPCI术的AMI患者给予院前急救联合绿色通道模式,救治效果显著,可有效提高患者满意度,减少术后不良心血管事件的发生率。     

磁共振扩散加权成像联合血清AFP、CA125、CEA、CA199检测在早期原发性肝癌中的诊断价值研究

摘要 目的：研究磁共振扩散加权成像（DWI）联合血清甲胎蛋白（AFP）、糖类抗原125（CA125）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原199（CA199）检测在早期原发性肝癌（PHC）中的诊断价值。方法：选取我院自2017年9月开始至2020年5月收治的63例早期PHC患者纳入研究,记作肝癌组,再取同期我院收治的61例良性肝病患者记作对照组。对所有受试者均实施DWI扫描,比较两组DWI图像信号强度。检测并比较两组血清AFP、CA125、CEA、CA199水平,以受试者工作特征（ROC）曲线分析上述各项血清学指标水平检测和DWI诊断早期PHC的效能。另外,比较PHC淋巴结转移患者和无淋巴结转移患者血清AFP、CA125、CEA、CA199水平。结果：肝癌组DWI信号强度为高信号人数占比高于对照组（均P<0.05）。肝癌组血清AFP、CA125、CEA、CA199水平均高于对照组（均P<0.05）。血清AFP、CA125、CEA、CA199水平联合DWI诊断早期PHC的曲线下面积、灵敏度以及特异度均高于上述各检查方式单独检测。PHC淋巴结转移患者的血清AFP、CA125、CEA、CA199水平均高于无淋巴结转移患者（均P<0.05）。结论：DWI联合血清AFP、CA125、CEA、CA199检测诊断早期PHC的价值较高,且淋巴结转移患者的血清AFP、CA125、CEA、CA199水平明显升高。     

不同孔径CPC材料对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：评价不同大小孔径的磷酸钙骨水泥（Calcium phosphate cement,CPC）材料对大鼠骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）增殖能力的影响。方法：用盐析法制备三种不同孔径的（200-300μm、300-450μm、450-600μm）CPC材料,利用Micro-CT测量三种材料的平均孔径、孔隙率。无菌条件下取新生大鼠BMSCs原代培养并传代;将三组材料分别放置于24孔板内,每个材料接种5×104个细胞后,37℃、饱和湿度环境下静置培养。于接种后第1、4、7、14、21天用picogreen试剂盒测定细胞增值率;并在第14天、21天戊二醛固定材料并干燥喷金,扫描电镜观察材料表面细胞生长情况。结果：micro-CT测量结果显示：三种CPC材料孔径间相互连通,孔隙率均大于68%,平均孔径分别为235μm、422μm、505μm。细胞在三组材料上均呈对数增长趋势,在第14天到达平台期,在第1天三组细胞数量无明显差异,第4天450-600μm组细胞数量明显高于其余两组（P〈0.05）,在第7天细胞数量随孔径的增加而增加,3组间均有统计学差异（P〈0.05）,第14天和第21天200-300μm组细胞数量明显少于其余两组（P〈0.05）,300-450μm组和450-600μm组间无统计学差异（P〉0.05）。结论：孔径大小可影响大鼠BMSCs在多孔CPC材料上的增殖能力,随着孔径增大,细胞增殖力增高。本研究为进一步研究孔径结构对细胞的影响提供了实验依据。     

中药夏枯草对人甲状腺癌细胞系SW579增殖周期及凋亡的影响

目的:探讨夏枯草对人甲状腺癌细胞系SW579细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法:采用甲基噻唑(MTT)比色法和生长曲线测定不同浓度夏枯草在不同作用时间内对在体外培养SW579细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果:夏枯草可在G0/G1期阻滞人甲状腺癌细胞系SW579的增殖,使S期细胞比率降低;在一定范围内,夏枯草的浓度越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高。结论:夏枯草能抑制人甲状腺癌细胞系SW579细胞生长,并诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。