阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的基因克隆及重组酶性质分析

为研究重组阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的活性,从阴道毛滴虫提取RNA,经过RT-PCR克隆蛋氨酸γ-裂解酶基因,与pET-15b质粒连接构建原核表达载体pET-15b-mgl1,并测序。转化宿主菌BL21后进行诱导表达,分离纯化目的蛋白并研究其酶学性质。以L-蛋氨酸、DL-同型半胱氨酸、L-半胱氨酸为底物测定重组酶Km值为0.318、2.14、1.62mmol/L,比活性分别为20.17、318.69、56.96μmol/min/mg protein。MGL最适pH在5.0到6.0之间,在50℃可稳定30min无活性损失。实验结果显示重组酶具有较高的活性和较好的热稳定性,为临床应用研究奠定基础。     

冠心病患者血浆同型半胱氨酸和内皮功能的研究(英文)

目的:探讨冠心病患者血浆中同型半胱氨酸、内皮素、循环内皮细胞水平与冠状动脉粥样硬化性心脏病发生过程的关系。方法:对62例冠心病患者组和50例健康对照组分别采用高效液相色谱分析法和放射免疫分析法测定血浆中同型半胱氨酸水平和内皮素水平,同时测定血浆中循环内皮细胞的数量。结果:冠心病组同型半胱氨酸(21.27±5.73)μmol/L、内皮素(84.30±13.68)ng/L、循环内皮细胞(12.08±5.85)和cells/0.9μl明显高于对照组同型半胱氨酸(9.12±4.87)μmol/L、内皮素(47.65±12.71)ng/L、循环内皮细胞(2.35±1.02)cells/0.9μl,P均小于0.001。同型半胱氨酸与内皮素、循环内皮细胞呈正相关(r=0.601,P0.01;r=0.645,P0.01),且冠心病组血浆循环内皮细胞和内皮素呈正相关(r=0.850,P0.01)。结论:同型半胱氨酸及内皮素对冠状动脉粥样硬化性心脏病的发生发展有促进作用,对其检测有临床实用价值。     

应用多普勒检测糖尿病患者颈动脉粥样硬化斑块并分析其与hs-CRP、HCY的关系

目的:探讨糖尿病患者血C反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(HCY)蛋白与颈动脉粥样硬化的关系.方法:收集58例糖尿病患者和42例体检正常者血浆,测定血hs-CRP、HCY蛋白水平,应用多普勒超声诊断仪检测颈动脉内膜、中层厚度(MT),观察颈动脉粥样斑块,并分析hs-CRP、HCY蛋白水平与颈动脉粥样硬化的关系.结果:糖尿病患者血hs-CRP、HCY含量、颈动脉MT和粥样斑块数较对照组明显增加(P<0.05);血hs-CRP、HCY水平与颈动脉MT及斑块数分别呈正相关(P<0.01).结论:hs-CRP、HCY可能在促进糖尿病及动脉粥样硬化的发生和发展中发挥了重要作用.可作为判断糖尿病患者病情程度和预后的评价指标.     

Hcy、ACA、FA联合检测在预测脑梗死发生中的临床价值

目的:探讨Hcy、ACA、FA联合检测在预测脑梗死发生中的临床价值.方法:采用EILSA及化学发光免疫分析技术,对66例脑梗死患者和30例健康对照者进行血清的ACA、Hcy及FA的检测.结果:脑梗死患者Hey浓度为[(22.68±12.70)μmol/L]明显高于健康对照组[(13.38+2.61)μmol/L],差异非常显著(P<0.01).叶酸[(3.87±2.02)ng/ml]水平明显低于健康对照组[(519.37±437.57)ng/mL](P<0.05);脑梗死患者ACA和高Hey血症的检出率为53.03%和68.18%与健康对照组(16.67%)比较,差异非常显著(P<0.01);ACA、Hcy及FA单独预测脑梗死的敏感性分别为87.50%、90.00%和96.3%;特异性为44.60%、54.40%和37.09%;在预测脑梗死发生中ACA、Hcy及FA联合检测优于单项检测.结论:高Hcy血症和ACA均是脑梗死发病的独立的危险因素.ACA可能参与脑血管病变的发病过程.ACA、Hcy及FA联合检测可较好地预测脑梗死的发生,其中以ACA和Hcy联合检测为最佳,对于预测脑梗死发生具有较高的临床价值.     

脑梗死患者同型半胧氨酸与血脂相关性的研究

目的：研究脑梗死患者空腹血浆总同型半胱氨酸（THCY）水平及其与血脂的关系。方法：观察组（54例）均为我院2002年1月．2006年5月住院脑梗死患者,测定空腹THCY水平及血脂各参数;另有同龄健康者为对照组（39例）,进行比较分析。结果：观察组与对照组比较,空腹THCY水平差异有统计学意义（P〈0．05）,血浆HCY含量与TC、TG、HDL-C、LDL-C含量的相关性均无统计学意义。结论：高HCY血症与血脂无关,是脑梗死的独立危险因素之一。     

硝酸盐对牛粪梭菌甲酸脱氢酶缺失型Wood-Ljungdahl途径固碳的影响

【背景】异于同型产乙酸菌通常利用Wood-Ljungdahl途径将2分子CO₂还原为1分子乙酰辅酶A,Clostridium bovifaecis缺失Wood-Ljungdahl途径甲基支路第1步将CO₂还原为甲酸的甲酸脱氢酶,需甲酸存在时将1分子甲酸和1分子CO₂还原为乙酰辅酶A发生葡萄糖的同型产乙酸型发酵。已有报道显示,硝酸盐也可作为同型产乙酸菌的电子受体,而且对不同同型产乙酸菌的代谢影响有所不同,然而硝酸盐对这种独特的甲酸脱氢酶缺失型Wood-Ljungdahl途径固碳的影响尚不清楚。【目的】探究硝酸盐对C.bovifaecis甲酸脱氢酶缺失型Wood-Ljungdahl途径固碳的影响。【方法】硝酸盐浓度分别为10 mmol/L和30 mmol/L时,以未添加硝酸盐为对照实验,研究C.bovifaecis在葡萄糖+甲酸+CO₂为基质条件下的细菌生长、底物消耗和产物生成情况。【结果】10 mmol/L和30 mmol/L硝酸盐存在时,主要产物乙醇浓度分别为5.80 mmol/L和1.66 mmo...     

HcNPV半胱氨酸蛋白酶,几丁质酶基因失活分析

将含有美国白蛾核型多角体病毒（Ｈｙｐｈａｎｔｒｉａ ｃｕｍｅａ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ,ＨｃＮＰＶ）半胱氨酸蛋白酶基因（ＣＰ）的自然和几丁质酶基因（ＣｈｉＡ）的片段克隆进ＰＣＲⅡ,构建了转移载体ｐＨｃＣＶｄｅｌ;将含有ＨｃＮＰＶ多角体蛋白全基因（ｐｏｌｈ）序列的片段插入到ｐＨｃＣＶｄｅｌ的ＥｃｏＲＩ位点,得到重组转移载体ｐＨｃＣＶｐｏｌｈ。通过重组转移载体与含有家蚕促     

大鼠GCLC基因5’-上游调控区域(-876～+1)的3个E-box元件功能分析

目的:GCLC基因表达调控有助于在分子水平了解GSH变化的机制,对进一步探索机体抗氧化失衡的机制有重要意义。本实验主要研究GCLC基因上游调控区域(-876~+1)三个相邻E-box元件的作用及探讨E-box元件组合的基因转录作用机制。方法:利用PCR定点缺失法构建多种组合的缺失E-box元件的GCLC上游启动子序列的报告基因载体。将所构建的载体在脂质体介导下瞬时转染大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(L2细胞),通过比较转染后细胞的荧光素酶活性,分析E-box元件对GCLC基因转录活性的影响。结果:成功构建出多组定点缺失E-box元件的GCLC-Luc基因。在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞中转染缺失了E-box的GCLC-Luc组较转染GCLC-Luc组均有明显升高(P均0.05)。结论:三个E-box元件(-804~-779,-729~-724,-590~-585)在GCLC基因的基础状态下的转录表达中都起到一定的抑制作用,可能以转录因子及元件复合物形式抑制GCLC基因的转录调控。此结果揭示GCLC基因上其他E-box元件之间也可能存在着相互作用方式,而非简单的单独作用。