一株保存的波瓦生病毒全基因组序列测定及分析

目的：对保存的WJBC株波瓦生病毒进行全基因组序列测定和分析,阐明其与已报道毒株之间的关系。方法：将波瓦生病毒基因组编码区分11段进行RT－PCR扩增,扩增产物直接进行测序,非编码区采用RACE法进行扩增,扩增产物纯化并连接pGEM－Teasy载体后转化大肠杆菌DH5ct感受态细胞,挑取阳性克隆鉴定后进行测序,用DNAstar软件将测序结果拼接得到全基因组序列。下载波瓦生病毒全基因组核苷酸序列,利用MEGA5．0软件构建系统进化发生树。结果与结论：WJBC株波瓦生病毒全基因组共11839nt,编码3415个氨基酸残基,病毒基因组5’端和3’端分别有111、483nt的非编码区;进化树结果显示,WJBC株波瓦生病毒与LB株波瓦生病毒的亲缘性最高,可能为同一病毒株．．     

黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体制备及其ELISA检测方法的建立

目的:制备黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体,建立其酶联免疫吸附分析(ELISA)的检测方法.方法:分别以黄瓜细菌性白枯病菌胞内蛋白和菌体为免疫原,制备两再种抗体,优化间接ELISA检测条件.结果:间接ELISA法测定两种纯化的菌体抗体(J4)和胞内蛋白抗体(P2)效价分别为1:32000和1:4000,二抗的最佳稀释度为1:3000,方阵试验表明J4的工作浓度为1:16000,抗原的最佳包被浓度为10<'6>cfu/ml,P2的工作浓度为1:2000,抗原的最佳包被浓度为10<'7>cfu/ml,两种抗体的灵敏度均为10<'5>cfu/ml,与黄瓜细菌性角斑病菌等26个菌株无交叉反应,特异性强.结论:成功制备了黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体,建立了ELISA检测方法.     

靖江地区宫颈病变患者高危型人乳头瘤病毒感染及其基因型分析

目的:研究靖江地区各组宫颈病变中高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染率及其基因型分布。方法:采用实时荧光PCR检测方法检测334例宫颈脱落细胞标本中高危型HPV及其基因型。结果:高危型HPV在宫颈炎组、湿疣组、低度鳞状上皮细胞内病变(LSIL)组、高度鳞状上皮细胞内病变(HSIL)组中的感染率分别为24.2%、58.2%、49.3%、69.5%;HPV 16、18、33、58型在宫颈病变中是最常见的HPV型别,其中,HPV16型在宫颈炎组、湿疣组、LSIL组、HSIL组中所占比例逐渐增高,分别为17.9%、18.9%、30.8%、41.9%。结论:高危型HPV感染率随着宫颈病变程度的加重而升高,HPV16型是高危型HPV感染中的主要亚型,HPV18、33、52、58也较常见,其余型别很少。     

妇科再造丸联合甲基睾丸素片治疗子宫肌瘤的疗效分析

目的：分析妇科再造丸联合甲基睾丸素片治疗子宫肌瘤的临床疗效和安全性。方法：62例子宫肌瘤患者随机分为治疗组和对照组,治疗组共32人,接受妇科再和联合甲基睾丸素片联合治疗,对照组共30人,单纯接受甲基睾丸素片治疗;免疫组织化学法检测治疗组和对照组患者子宫肌瘤PR表达水平;RT-PCR检测治疗组和对照组患者子宫肌瘤Caspase．3mRNA和PRmRNA表达;BC-5500血球分析仪检测HB、RBC、HCT,分析比较两组患者上述指标的差异。结果：治疗组临床疗效有效率为87．5％,对照组临床疗效有效率为53．3％,两组比较有统计学差异（P〈0．05）。两组在治疗后HB、RBC、HCT均较治疗前改善,且治疗组较对照组改善明显,差异有统计学意义（P〈O．01）。治疗组和对照组治疗后PRmRNA的表达程度与治疗前相比,明显下降,具有统计学意义（P〈0．05）;治疗组治疗后PRmRNA表达水平与对照组治疗后PRmRNA表达水平相比,有明显差异,具有统计学意义（P〈0．05）;治疗组治疗后Caspase-3mKNA的表达程度与治疗前相比,明显增强,具有统计学意义（P〈0．05）;治疗组治疗后Caspase-3mRNA表达水平与对照组治疗后Caspase-3mRNA表达水平相比,有明显差异（P〈0．05）;治疗组和对照组治疗后PR的阳性细胞数目与治疗前相比,显著下降（P〈0．001）;治疗组治疗后PR阳性细胞数目与对照组治疗后PR阳性细胞数目相比,有明显差异（P〈0．05）。结论：妇科再造丸联合甲基睾丸素片优于单独应用甲基睾丸素片治疗子宫肌瘤。     

不同钙-醇溶解体系丝素蛋白的制备及表征研究

采用 ４种中性盐溶液 Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 甲醇、Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 乙醇、ＣａＣｌ２ 甲醇 水和 ＣａＣｌ２ 乙醇 水（摩尔比分别为 １∶２、１∶２、１∶２∶８、１∶２∶８）处理蚕丝纤维,透析后经冷冻干燥制成固体,利用ＳＤＳ ＰＡＧＥ、电镜扫描和红外光谱对制得的固体进行表征。ＳＤＳ ＰＡＧＥ结果表明：Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 醇体系降解丝素蛋白较 ＣａＣｌ２ 醇 水体系降解程度高;电镜扫描的结果表明 Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 甲醇和 ＣａＣｌ２ 乙醇 水溶解体系处理的丝素蛋白溶解比较完全,Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 甲醇处理的丝素蛋白冻干后为颗粒状,而 ＣａＣｌ２ 乙醇 水处理的丝素蛋白冻干后为片状。红外光谱的结果表明：４种溶液处理后的丝素蛋白构象均介于 β折叠和无规则卷曲之间,从而为丝素蛋白在药物缓释载体领域的应用提供了一定的理论依据。     

肠球菌溶血及非溶血菌株对小鼠巨噬细胞表达TNF-α的影响

【目的】探讨肠球菌溶血菌株及非溶血菌株对小鼠巨噬细胞RAW264．7表达TNF-α的影响。【方法】用多粘菌素B抑制排除内毒素污染对实验的影响。肠球菌溶血菌株、非溶血菌株各11株,以菌／细胞比30：1感染RAW264．7细胞1h,加入200gg／mL氨苄青霉素继续培养24h,分别于感染后3、6、9、24h,用ELISA方法检测不同观测点细胞培养液中肿瘤坏死因子TNF-α的含量,并用逆转录-聚合酶链反应方法（RT-PCR）比较肠球菌溶血、非溶血菌株感染6h后TNF-α RNA表达的差异。【结果】未感染的RAW264．7细胞培养液中检测不到TNF-α。肠球菌溶血株感染组细胞培养上清液中各观测点的TNF-α的平均含量（pg／mL）均比非溶血株性组高。经t检验,P〈0．01,差别有显著性。RT-PCR法检测其mRNA的表达也有相同结果：TNF-α RNA在肠球菌溶血株感染细胞中的相对表达量比非溶血株感染的细胞高,经t检验,P〈0．05,差别有统计学意义。【结论】肠球菌溶血株比非溶血株更能促进小鼠巨噬细胞RAW264．7产生TNF-α炎症因子。     

从罗汉果渣中提取水不溶性膳食纤维的研究

采用化学法、酶法、酶与化学结合法从罗汉果渣中提取水不溶性膳食纤维,并且对三种提取方法所得的水不溶性膳食纤维产品特性进行了分析比较。研究结果表明,采用酶与化学结合法提取到的水不溶性膳食纤维产品纯度最高、生理活性最好,产率为87.15％,蛋白质含量为2.03％,持水力与膨胀力分别为3.807 g·g-1和1.69 mL·g-1。但从成本和实用方面考虑,还是以化学法为宜。     

肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体N-糖链结构与功能的变化

探讨肝癌细胞与正常肝细胞 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7LR)N 糖链结构与功能的差异 .采用流式细胞术检测SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞膜表面 6 7LR的表达 ,并分别从这 2株细胞分离纯化到高亲和力的 6 7LR ,利用凝集素结合分析其糖链结构 ,并用肽 N 糖苷酶水解N 糖链 ,观察糖链在与层粘连蛋白结合过程中的作用 .结果发现 ,L 0 2细胞膜表面 6 7LR表达的阳性率为5 5 3% ,而SMMC 772 1细胞为 34.7% ,这两株细胞 6 7LR与伴刀豆素 (ConA)的结合能力无显著差异 ,但SMMC 772 1细胞的 6 7LR与麦胚凝集素的结合能力明显高于L 0 2细胞的 6 7LR ,说明 2株细胞 6 7LR的糖链结构存在显著差异 .当N 糖链被切除后 ,SMMC 772 1细胞的 6 7LR与层粘连蛋白的结合能力明显下降 ,而L 0 2细胞则没有变化 .这些资料表明 ,SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞与层粘连蛋白结合能力的差别 ,以及两株细胞的 6 7LR与层粘连蛋白结合能力的不同 ,很可能是由于这两株细胞的层粘连蛋白受体的N 糖链结构不同所引起     

怎样判别组成雌蕊的心皮数目

在多年的植物学教学实践过程中 ,发现学生在书写植物花程式时 ,感到最困难 ,最容易出错的地方就是对组成雌蕊的基本单位——心皮数目的判别上。为此 ,笔者经过不断探索 ,总结出一套较为有效的判别组成雌蕊的心皮数目的方法。具体作法如下 :1　确定雌蕊的类型在 1朵花中 ,依据雌蕊的数目及组成每个雌蕊的心皮数目的多少 ,将雌蕊分为单雌蕊、离生单雌蕊和复雌蕊等 3种类型。1)在具体观察 1朵花时 ,如花中有两个或两个以上雌蕊时 ,该雌蕊类型为离生单雌蕊 ;如花中只有 1个雌蕊时 ,则要判断该雌蕊是属于单雌蕊还是复雌蕊。2 )如在 1朵花中只有 1…