海伦脑炎微孢子虫分泌蛋白EhPTP4对宿主内质网蛋白降解通路的调控作用

【目的】微孢子虫是一类专性细胞内寄生的真核病原微生物,能够感染人类和几乎所有的动物。本课题以海伦脑炎微孢子虫（Encephalitozoon hellem）为研究对象,探讨其极管蛋白4（EhPTP4）作为一个潜在的分泌性毒力因子在宿主细胞内的定位和功能。【方法】制备EhPTP4的鼠源多克隆抗体,利用间接免疫荧光分析和Western blotting确定EhPTP4在感染细胞中的亚细胞定位;基于序列特征,在HEK293细胞中转染野生型和突变体EhPTP4,分析该蛋白的定位及其对病原增殖的作用;利用RNA-seq对转染EhPTP4的HEK293细胞进行转录组测序,分析EhPTP4引起的宿主基因表达和通路的变化;进一步通过RNAi和细胞转染分析差异表达基因的调控作用,利用RT-qPCR和Western blotting验证调控效果。【结果】EhPTP4的N端具有信号肽,C端具有富含组氨酸的结构域（HRD）和核定位信号序列（NLS）。蛋白定位分析显示,在感染和转染细胞中,EhPTP4均被分泌至宿主细胞核内。在HEK293细胞中过表达EhPTP4显著促进了病原的增殖。RNA-seq和蛋白泛素化分...     

PaP3噬菌体57kD蛋白编码基因的确定

分离鉴定了PaP3噬菌体57 kD蛋白的编码基因并对其功能进行了初步探讨。用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒,通过SDSPAGE分析该噬菌体的衣壳蛋白,转印PVDF膜后,对57 kD蛋白用Edman降解法进行N端氨基酸测序,进而从PaP3全基因组的256个ORFs中确认该蛋白质的编码基因及其对应的氨基酸序列。结果显示噬菌体PaP3有9种结构蛋白分子,其中57 kD蛋白是由ORF34793编码的。57kD蛋白编码基因全长1542bp,G+C百分含量为49.16%,编码514个氨基酸。该蛋白分子量为57.4kD,等电点为5.879。实验表明该蛋白是一种结构性蛋白,很可能是噬菌体衣壳蛋白中的一种壳微粒。     

东灵山地区大步甲属物种分布和季节变化的多样性格局

针对东灵山地区的11种不同生境,利用巴氏罐诱法研究大步甲属（Carabus）种类多样怀及其变化与生境的关系,结果表明：（1）本地区有大步甲10种,其中C.manifestus Kraatz和C.crassesculptus Kraatz为优势种,占总数的70.8％,与C.smaragdinus Fischer、C.vladimirskyi Dejean和C.sculptipennis Chaudoir一起构成本地区的常见种;（2）从物种丰富度和数量看,由高到低依次为小龙门林区（以森林为主）、梨园岭退耕区（以灌丛和萌生丛为主）、东灵山主峰区（高海拔,亚高山植物）;物种多样性指数（H‘）由高到低依次为梨园岭退耕区、小龙门林区、东灵山主峰区;均匀度指数值（E）梨园岭退耕区最高,其次为东灵山主峰区,再次为小龙门地区;（3）利用物种的发生与频度数据,对11种不同生境进行栖息地相似性聚类分析,发现东灵山主峰区的3种生境可归为一类,小龙门林区5种生境可归为另一类,梨园岭退耕区的辽东栎萌生丛单独为一类,梨园岭退耕区的山杏和荆条灌丛构成一类,这反映了大步甲属种类分布的地域及生境特点,特别是生境内的湿度、温度和地表覆盖层等特点;（4）通过物种间的相关分析看出：C.smaragdinus和C.granulatus呈显著的正相关关系,反映了它们对退耕区的选择倾向;C.crassesculptus、C.canaliculatus、C.manifestus和Carabus sp.之间,虽然后两种间未达到显著性,但彼此呈正相关关系,反映了这些物种对森林生境选择倾向;（5）大步甲成虫的季节性活动主要在4-9月份间,高峰期集中在6-8份月,各物种在生境内有不同的季节变化趋势,与该地区季节性气候变化一致。研究表明,大步甲物种分布受生境内的湿度、温度、地表覆盖层等环境因素影响,物种多样性与生境肥干扰程度有关,生态恢复将对物种多样性保护具有重要意义。     

巴西固氮螺菌中吸氢酶基因同源性的分子检测

通过TTC(2 ,3,5 氯化三苯基氮唑 )实验筛选出 12株能产生吸氢酶蛋白 (Hup+ )的巴西固氮螺菌 (Azospir rilumbrasilense)菌株。用Qiagen柱分离提纯含豌豆根瘤菌的hup基因片段的质粒 pHVT10 9和pHVT115 ,并用地高辛标记法标记pHVT115 ,与 12株Hup+ 巴西固氮螺菌的总DNA进行斑点杂交 ,结果显示pHVT115所含的吸氢酶基因 (hup基因 )片段与巴西固氮螺菌的大部分菌株的hup基因同源性不强。这一结果表明hup基因在固氮生物中存在着遗传多样性 ,异源hup基因探针不一定都适宜于探测hup基因。     

四季草莓“赛娃”的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　四季草莓“赛娃”(Ｆｒａｇａｒｉａｖｅｓｃａｃｖ .ｓｅｌｖａ)。2　材料类别　匍匐茎尖。3　培养条件　 (1)芽诱导培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5ｍｇ·Ｌ- 1(单位下同 ) ＮＡＡ 0 .1;(2 )增殖培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 1 ＩＢＡ 0 .0 5 ;(3)生根培养基 :1/2ＭＳ     

四季草莓"赛娃"的组织培养与快速繁殖

1 植物名称　四季草莓"赛娃"(Fragaria vesca cv.selva). 2 材料类别　匍匐茎尖. 3 培养条件 (1)芽诱导培养基:MS+6-BA 0.5 mg·L-1(单位下同)+NAA 0.1;(2)增殖培养基:MS+6-BA 1+IBA 0.05;(3)生根培养基:1/2MS+IBA 0.3.琼脂6.5 g·L-1,蔗糖30 g·L-1,培养基pH值为5.6～5.8,培养温度(25±1)℃,光照度1 500～2 000 lx,光照时间12 h·d-1.     

橡胶树凝集因子hevein基因及其启动子序列的分离与分析

橡胶树 (HeveabrasiliensisMuell._Arg .)凝集因子hevein是引起橡胶粒子凝集的主要因素 ,它是胶乳中黄色体内主要的蛋白质 ,具有几丁结合的功能。通过PCR技术扩增并克隆了橡胶树hevein基因共 6 80bp的序列。继而通过步移法分离启动子区域 130 6bp的序列 ,序列含典型的TATA盒和CAAT盒以及ABA效应元件的同源序列。为证实该基因在乳管中特异表达 ,利用Northernblot分析hevein基因在胶乳和叶片中的表达 ,同时 ,分析乙烯和ABA处理后hevein基因的表达。结果表明 ,hevein基因主要在胶乳中表达 ,乙烯和ABA对基因的表达有诱导作用。     

神经营养因子受体TrkA、TrkB、TrkC和TrkE在参环毛蚓体内的分布

高亲和性神经营养因子受体Trk,广泛存在分布于哺乳神经组织,研究表明：随着动物进化程度的降低,亚型Trk受体的类型有所减少,在低等动物,关于环节动物（Annelida)Trk受体存在与否,分布如何尚未见报道,以我国环节动物门典型代表参环毛蚓（Pheretima aspergillum)为研究对象,运用免疫细胞化学染色技术,在光镜下观察TrkA,TrkB,TrkC和TrkE阳性细胞和纤维的形态与分布,发现Trk存在于参环毛蚓的神经系统和非神经组织,各亚型分布有所差异,TrkA阳性 经细胞存在于咽下神经节和肠神经系,阳性神经纤维存在于腹神经索和肠神经系,TrkB阳性细胞存在于非神经组织的肠上皮,TrkC阳性神经细胞存在于脑,咽下神经节和肠神经细胞,阳性神经纤维存在于围咽神经环,腹神经索和肠神经系,TrkE阳性神经细胞存在于脑,阳性神经纤维存在于咽下神经节和腹神经素,上述研究结果表明：Trk存在于进化程度较的环节动物,Trk在进化上具有悠久的历史,各亚型Trk受体的不同分布提示不同部位的神经细胞受不同神经营养因子的作用。     

植物ASR基因研究进展

ASR(abscisic acid,stress,ripening-induced)基因是近年来从植物中发现的一类受ABA、胁迫和成熟诱导表达的基因,具有保守的ABA/WDS结构域。ASR基因不仅参与植物对干旱、高盐、低温以及脱落酸的胁迫应答,而且参与植物生命活动的许多过程,如果实发育、成熟和糖代谢等。本文综述了近年来国内外ASR基因的研究进展,主要包括ASR基因和蛋白结构特点、ASR基因家族的进化、ASR基因的表达及可能具有的功能,为植物ASR基因研究提供参考。