从米糠中提取降血管紧张素转换酶抑制剂

采用盐析法提取米糠蛋白,分别选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,以从酶解米糠蛋白中分离获得具有血管紧张素转换酶（ACE）抑制活性的短肽组分。经Sephadex G-15凝胶层析和SP—Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分,并检测各组分的ACE抑制活性。结果表明,米糠蛋白的酶解分离产物中含有较强ACE抑制活性的组分,其中经胃蛋白酶和胰蛋白酶共同水解时得到的小分子量寡肽组分的抑制活性最强,为后续对其进行结构分析奠定了基础。     

小鼠脂联素与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达

以绿色荧光蛋白(GFP)基因(gfp)为报告基因,构建小鼠脂联素(mADPN)基因(mAd)与gfp的融合基因mAd/gfp表达载体pCI-neo-apoEHCR-hAATp-mAd-gfp,脂质体法转染体外培养的COS-7细胞,荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达可间接反映mADPN的表达,并通过RT-PCR在核酸水平进一步确证mAd的表达.荧光显微镜观察及RT-PCR结果均证明mADPN在COS-7细胞中获得了高效表达,表明mADPN重组表达载体pCI-neo-apoEHCR-hAATp-mAd可以在真核细胞COS-7中高效表达mADPN,为进一步探讨mAd在小鼠体内的表达提供了可行性依据.     

Protein C信号通路及临床应用进展

Protein C为一种维生素k依赖性的血浆蛋白,常以无活性的酶原状态存在于血浆中。它可以由凝血酶（thrombin）激活为活性蛋白C（Activated Protein C）,作用在内皮细胞上的Protein C通路的主要组成部分是：凝血酶、血栓调节蛋白、内皮细胞Protein C受体、Protein C及蛋白酶激活受体。活性Protein C在缺血性缺氧、中风和感染反应中发挥着重要的作用,它可以抑制凝血,限制感染反应,有效的降低器官的损伤。     

马铃薯Y病毒外壳蛋白基因表达效率影响因素的研究

马铃薯Y病毒(PVY)属病毒大多以经济作物为寄主,是农作物、牧草、园艺和香料作物的主要病害,危害极大。通常,对该属病毒的鉴定和检测使用ELISA法。但由于病毒制备工作繁琐,不易得到很好的抗血清,至使该法不能广泛使用一目前,已有研究表明PVY外壳蛋白具有种属专一性,是该病毒属鉴定和检测的极为有用的指标。通过基因工程生产的PVY外壳蛋白,可以作为制备该病毒属抗血清的最有效抗体。     

小麦面粉Puroindoline蛋白的提取与纯化

Puroindoline蛋白是小麦面粉中一种非常重要的蛋白质,不仅影响和决定了籽粒的硬度,而且有抗G^＋、G^-菌以及抗真菌的作用。用含4％TritonX-114、100mmol／L pH7．8Tris-HCl缓冲液处理小麦面粉来分离Puroindoline蛋白。经处理后得到的蛋白质混合溶液首先用分子筛葡聚糖G-75纯化,每个收集管内的组分经SDS-PAGE分析,分子量小于31kD的蛋白质组分被回收和集中,回收的蛋白质组分经PEG20000浓缩后,再用离子交换柱羧甲基纤维素（CM-23）进行纯化。其洗脱液分别是双蒸水和NaCl,梯度为0．05～0．7mol／L、8mmol／L pH5．5的MES缓冲液,回收只含15kD的蛋白质的组分,接着用PEG20000浓缩。最后冷冻干燥得到Puroindoline蛋白。     

南瓜属4个栽培种种子蛋白质电泳分析

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对南瓜属4个栽培种中国南瓜、印度南瓜、美洲南瓜及黑籽南瓜的12个品种种子蛋白组分进行了分析。结果显示,黑籽南瓜种子以盐溶蛋白条带居多;其它3个栽培种以水溶蛋白条带居多,其次为盐溶蛋白;4个栽培种酸溶蛋白条带均较少;醇溶蛋白未分离得到蛋白谱带。水溶、盐溶、酸溶蛋白电泳图谱显示各栽培种间蛋白谱带差异明显,同一栽培种品种间蛋白谱带较为一致。     

敲除 Sam68 基因导致白血病细胞系细胞生长迟缓和 G2/M 期延长

RNA 结合蛋白 Sam68 是细胞有丝分裂期 Src 酪氨酸磷酸化的靶蛋白 . 尽管确切机制尚不清楚,一些人还是认为 Sam68 可通过调控 RNA 的代谢参与细胞周期调控 . 利用基因打靶技术,在 DT40 细胞分离出 Sam68 基因缺失的细胞系 . 利用该细胞系,进行 Sam68 的功能解析 . 与野生型细胞系相比, Sam68 基因缺失细胞表现出明显的生长速度迟缓 . 通过细胞周期研究揭示 , 这些细胞生长速度延迟是由于细胞周期中的 G2/M 期延长 . 因为参与细胞周期 G2/M 期调控的周期因子 Cdc2 激酶的活性没有改变,所以提示 Sam68 不依赖于 Cdc2 激酶的活性参与细胞周期中 G2/M 期调控 .     

hrpZ基因在大肠杆菌中的高效表达与活性检测

PCR扩增hrpZ基因片段,克隆到pGEM-T载体中,经EcoRI／Xho1酶切、连接将hrpZ基因插人大肠杆菌表达载体pET32b（＋）硫氧还蛋白下游,构建重组表达质粒pET-hrpZ,再将其转化至E．coli BL21（DE3）中,经筛选得到阳性克隆子,IPTG诱导表达HrpZ蛋白。SDS-PAGE显示,目的蛋白在重组菌株中得到了可溶性高效表达。该重组蛋白分子量为55．8kD,与理论值大小相符。采用叶片穿刺法,融合蛋白具有诱导烟草过敏反应的生物功能。     

应用A蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体

应用Protein A亲和层析法,从采集的小鼠腹水中纯化出了抗凝血因子Ⅶ单克隆抗体,用SDS-PAGE和ELISA法分别检测了纯化后单克隆抗体的纯度及效价,结果显示,电泳为两条带,分别为免疫球蛋白G(IgG)的重链和轻链,纯化后的单克隆抗体纯度达到电泳纯,应用间接ELISA法测定腹水效价为1×10-7左右,与未纯化前无差异。结果表明,应用A蛋白亲和层析法能够得到纯度较高的单克隆抗体,适用于高纯度单克隆抗体的制备。     

逆境相关植物锌指蛋白的研究进展

锌是植物必需的营养元素,锌指蛋白因其具有指状结构特征且能结合Zn2 而得名,植物锌指蛋白包含特有的QALGGH保守结构,可能涉及调控植物特有的生物学功能。人们已经从拟南芥(Arabidopsis thaliana)、矮牵牛(Petunia hybrida Vilm)、水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine max)、棉花(Gossypium hirsutum)等植物中克隆了许多编码锌指蛋白的基因,并对其结构及功能进行了研究。利用转基因技术,将一些与逆境胁迫相关的锌指蛋白基因在目标植物中过量表达后,能对植物起到增强抗逆性的作用,说明锌指蛋白在增强植物逆境抗性方面有着广阔的应用前景。