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101.
大腹圆蛛主壶腹腺cDNA文库构建和丝蛋白基因筛选 总被引:2,自引:0,他引:2
首次通过反转录-置换法和使用pUC18质粒成功构建大腹圆蛛(Araneus ventricosus)主壶腹腺(major ampullate gland)cDNA基因文库,并以鸟枪法从中筛选出具有典型重复结构的大腹圆蛛主壶腹丝蛋白cDNA基因AvF1,大小为1744bp,编码区为1572bp,编码氨基酸524个,分子量为42489.55Da,典型的重复结构为(GGP)nGGX。与现有已知的蛛丝蛋白基因中三带金蛛(Argiope trifas-ciata)鞭毛样丝基因(AtfF)有最高的同源性69.3%。大腹圆蛛主壶腹腺cDNA文库的构建和蛛丝蛋白新基因的克隆,为提供大腹圆蛛蛛丝蛋白基因背景和进一步研究蛛丝蛋白奠定了基础。 相似文献
102.
小鼠MPI基因的打靶载体的构建和筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建小鼠MPI基因的基因打靶载体转染ES细胞 ,构建用于同源重组筛选的对照载体。方法根据计算机分析小鼠MPI基因的基因组序列 ,构建用于同源重组载体的长臂和短臂并且转染小鼠ES细胞 ,经抗性筛选后得到阳性克隆 ,抽提基因组DNA后用PCR的方法进行重组子的初步筛选。结果 成功构建了MPI基因的基因打靶载体并且摸索了用PCR的方法进行重组细胞初步筛选的方法。结论 这个载体的构建为MPI基因功能的研究打下了基础 ,同时用PCR方法进行初步筛选大大减少了Southern杂交的工作量 ;利用实验小鼠来研究印迹基因是非常有效的方法 ,它不仅能了解印迹基因在小鼠生长发育过程中的功能 ,而且进而有助于研究人的相应印迹区。 相似文献
103.
根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一 对引物,应用PCR从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF 2全基因(702bp)。将此片段克隆入pGEM-T easy载体,筛选获得重组质粒pTORF2,并对此质 粒中的插入序列进行了测序分析,结果表明本试验克隆的ORF2与美国PCV-2分离株AF264039 的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到100%,与其他PCV-2毒株同源性分别为92.3%~98. 6%和 92.3%~96.6%。重组质粒pTORF2经 Bam H I、Eco R V双酶切,回收ORF2基因,转 移入真 核表达载体pSecTag2/HygroB的相应酶切位点之间,构建成重组质粒pSecTagORF2。此重组表 达载体的构建成功为进一步研究ORF2编码蛋白的生物学活性及建立PCV诊断试剂盒打下基础。 相似文献
104.
生物合成谷胱甘肽种间耦合ATP再生系统的构建 总被引:6,自引:0,他引:6
利用重组大肠杆菌Ⅱ 1中的谷胱甘肽合成酶系和面包酵母WSH J7中的ATP生物合成酶系 ,构建了一个以葡萄糖为能源的种间耦合ATP再生系统。经过通透性处理的酵母细胞几乎不能消耗葡萄糖。在反应体系中添加 1mmol/LAMP和 0 0 5mmol/LNADH ,即可启动酵母的酵解途径。提高耦合系统中的葡萄糖浓度 ,可促进GSH的合成。当葡萄糖浓度为 40 0mmol/L时 ,系统内GSH浓度达到 1 0 4mmol/L(3 2 g/L)。Mg2 +缺乏时 ,耦合系统和外加ATP的非耦合系统均不能合成谷胱甘肽。耦合系统中Mg2 +与ATP形成螯合物 ,可能是导致耦合系统中GSH产量较低的原因。在耦合系统中补加Mg2 +,反应 6h时GSH浓度达到 1 4 3mmol/L(4 4g/L)。 相似文献
105.
106.
本文主要从研究木质部细胞分化常用的实验系统、木质部分化的诱导、木质部细胞的编程性死亡以及次生壁的构建4个方面阐述了木质部细胞分化的研究进展。并对目前研究的热点也是难点问题进行了展望,希望引起同行的兴趣。 相似文献
107.
以本室研制的一株抗肿瘤血管单克隆抗体AA98为基础,采用PCR扩增抗体AA98基因的重链可变区(VH)和轻链(L),以重链恒定区1(CH1)5′端12个氨基酸的序列作为连接肽,并将连接肽中的Lys突变为Ser,构建VH连接肽-L三结构域单链抗体。重组VH/L单链抗体在大肠杆菌中得到了高效表达,其表达量占菌体总蛋白质的20%。表达的蛋白质在菌内形成包含体,经凝胶过滤法复性,获得了有抗原结合活性的VH/L。该三结构域单链抗体的成功构建和复性,为重组抗体片段的研制提供了借鉴。 相似文献
108.
抗肿瘤血管三结构域单链抗体VH/L的构建与表达 总被引:2,自引:1,他引:1
以本室研制的一株抗肿瘤血管单克隆体AA98为基础,采用PCR扩增抗体AA98基因的重链可变区(VH)和轻链(L),以重链恒定区1(CH1)5′端12个氨基酸的序列作为连接肽,并将连接肽中的Lys变为Ser,构建VH-连接肽-L三结构域单链抗体。重组VH/L单链抗体在大肠杆菌中得到了高效表达,其表达量占菌体总蛋白质的20%。,表达的蛋白质在菌内形成包含体,经凝胶过滤法复性,获得了有抗原结合活性的VH/L。该三结构域单链抗体的成功构建和复性,为重组抗体片段的研制提供了借鉴。 相似文献
109.
生物多样性价值的经济学处理:一些理论障碍及其克服 总被引:17,自引:0,他引:17
本文首先对国际生态经济学界围绕“世界生态系统功能价值计量”的方法学论争进行短简的评价,接着阐述了生物多样性价值的新的概念框架,并据此就生物多样性价值计量中尚未得到关注的问题(生物多样性价值的可计算性,价值计量方法的恰当性,价值分量的可加性和可解析性,价值误差测算)提出解决思路,本文最后讨论了两个保护经济学问题方法学构架,其一是生物多样性破坏的经济损失计算,其二是生物多样性保护工程的成本-效益体质与成本-效果分析。 相似文献
110.