猪囊尾蚴疫苗候选基因TSO18在酵母中的高效表达

将猪带绦虫六钩蚴TSO18基因亚克隆至毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K_TSO18,电转化毕赤酵母菌GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,并对表达产物进行SDS_PAGE和Western blot分析、脱糖基化分析、分子筛纯化和小鼠免疫接种等表明,目的蛋白得到了高效表达并进行了适度的糖基化,易于纯化且具有免疫活性。在5L发酵罐中目的蛋白表达量达到2.54mg/mL,为制备基因工程疫苗打下了坚实的基础。     

长期施肥条件下栗褐土磷素积累特征

2010-2012年研究了长期施肥条件下(1988-2012年)栗褐土速效磷、水溶性磷和生物有效磷积累量及三者之间的相关关系,并讨论了水溶性磷与土壤磷饱和度的相关关系.结果表明:长期施用磷肥和有机肥可显著增加栗褐土速效磷、水溶性磷和生物有效磷的含量且以高量有机肥配施化肥处理增加最为显著;P2O5用量为75 kg·hm-2、有机肥用量为45000 kg· hm-2的处理在2012年时,土壤磷饱和度大于25％,这显著增加了栗褐土磷素流失风险;速效磷、水溶性磷和生物有效磷的之间的相关性均达到极显著水平,其中速效磷与水溶性磷之间呈指数关系;磷饱和度与水溶性磷呈极显著指数关系.     

组蛋白去甲基化酶JMJD 及其抑制剂的研究进展

组蛋白去甲基化酶JMJD 家族可通过催化去除组蛋白N 末端赖氨酸残基上甲基,参与表观遗传调控,包括基因表达调控,并与某些疾病,特别是癌症密切相关。因此,该酶已成为令人关注的癌症治疗新靶点,其抑制剂也成为药物研究与开发的热点。综述JMJD 与肿瘤的关联、JMJD 的结构和催化机制及其抑制剂的研究进展。     

以化脓性肝脓肿为初始表现的原发性肝癌的临床特点及诊治体会

目的：探讨以化脓性肝脓肿（PLA）为初始表现的原发性肝癌（PLC）的临床特点,总结诊治体会。方法：回顾性分析哈尔滨医科大学附属第一医院肝脏外科2007年6月至2012年6月收治的10例以PLA为初始表现的PLC患者以及269例同期收入院的PLA患者的临床资料。结果：以PLA为初始表现的PLC患者可表现为发热、寒战、右上腹痛、恶心、呕吐、腹泻、体重减轻以及黄疸等。实验室检查显示以PLA为初始表现的PLC患者甲胎蛋白（AFP）和糖类抗原19-9（CA19—9）升高的比例显著高于PLA患者,但其他实验室检查的差异无统计学意义。患者除静脉抗生素治疗外均接受了有创治疗,生存时间最长为13个月,最短仅为2个月。结论：对于AFP及CA199升高的PLA患者要警惕伴发PLC的可能。肝脏增强CT检查对AFP及CA199正常的此类患者有较大的诊断价值。早期准确诊断,把握手术时机是提高此类患者预后的根本。     

重组白眉蝮蛇去整合素定点突变对其生物活性的影响

RGD为存在于许多糖蛋白配体中的氨基酸序列,对整合素具有识别作用.此序列也发现于许多蛇毒去整合素分子中.采用基因克隆技术从大连产白眉蝮蛇的毒腺中克隆出的去整合素adinbitor是含73个氨基酸残基的去整合素,分子中含有12个半胱氨酸和RGD模体.实验证明,adinbitor作为去整合素的新成员,具有典型的抗ADP诱导的人血小板聚集作用和抗肿瘤血管新生作用.为了将adinbitor的这2种功能分开,采用PCR基因定点突变的方法,将其cDNA序列中RGD模体改变成KGD.重组adinbitor(KGD)在E.coli BL21得到表达,并通过His•Bind亲和层析予以纯化.实验发现,adinbitor对ADP诱导的人血小板聚集具有明显抑制作用,其IC50=85 nmol/L,明显优于adinbitor(RGD) （IC50=150 nmol/L）.然而,与adinbitor(KGD)相比,adinbitor(KGD)则丧失了对血管生成的抑制作用.结果说明,adinbitor(KGD)可作为专一的抗人血小板聚集药具有潜在的开发前景.     

维生素E联合尼莫地平治疗妊娠期高血压综合征的效果观察

目的:研究维生素E联合尼莫地平治疗妊娠期高血压综合征的临床效果和可能机制。方法:选择2016年1月～2018年12月我院收治的200例妊娠期高血压综合征患者并将其随机分为两组。对照组患者口服维生素E治疗,每次50 mg,每天3次;观察组联合口服尼莫地平治疗,每次30 mg,每天2次。检测和比较两组治疗前后的血清肽素、皮质醇、一氧化氮及内皮素、血清C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)、白介素-12(Interleukin-12, IL-12)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)水平的变化,记录患者的妊娠结局:胎盘早剥、产后出血、胎儿窘迫、剖宫产、低体重儿以及新生儿窒息的发生情况。结果:治疗后,观察组的总有效率明显高于对照组(91%vs. 73%,P0.05);两组的血清肽素、皮质醇及内皮素水平均较治疗前明显降低,血清一氧化氮水平较治疗前明显升高,且观察组的以上指标水平均明显优于对照组(均P0.05)。两组治疗后的血清CRP、IL-12和TNF-α水平均较治疗前明显降低,且观察组以上指标均明显低于对照组(均P0.05)。观察组的胎盘早剥率、产后出血率、胎儿窘迫率、剖宫产率、低体重儿率以及新生儿窒息率均明显低于对照组(P0.05)。结论:维生素E联合尼莫地平能明显改善妊娠期高血压综合征的妊娠结局,可能与其降低血清CRP、IL-12、TNF-α、皮质醇及和肽素水平有关。     

敌草快中毒诱导小鼠急性肺损伤对IL-17表达的影响

目的观察敌草快中毒诱导小鼠急性肺损伤对IL17表达的影响。方法取健康雄性SD大鼠120只,按随机数字表法分为空白组、假手术组、中毒组,各40只。中毒组给予一次性腹腔注射20 mg/kg敌草快制备小鼠中毒模型,假手术组给予腹腔注射等剂量磷酸盐缓冲液造模,空白组未作任何处理。观察3组小鼠造模后6 h、24 h及72 h的死亡情况,并检测其肺组织干湿比重及肺泡灌洗液中IL-17表达情况。结果假手术组、空白组6 h、24 h及72 h均无小鼠死亡现象,而中毒组6 h、24 h及72 h小鼠死亡分别为2只、5只、2只,在24 h时死亡率达到高峰。假手术组、空白组6 h、24 h及72 h的小鼠肺组织干湿比重及肺泡灌洗液中IL-17表达均无明显变化;而中毒组小鼠各时段的肺组织干湿比重及肺泡灌洗液中IL-17表达明显增多,均高于空白组、假手术组(均P0.05),且在24 h时达到高峰。结论敌草快诱导小鼠急性肺损伤可促使IL-17分泌增多,因此推测下调IL-17的表达可以减少肺损伤。     

转基因玉米对田间节肢动物群落多样性的影响

通过对转基因耐除草剂(EPSPS)抗虫(Cry1Ab)玉米转化体‘DBN9936’、受体玉米‘DBN318’、常规玉米‘先玉335’和喷施除草剂的转化体‘DBN9936’玉米田中节肢动物种类及数量的调查, 评价转基因玉米对田间节肢动物群落多样性的影响。2015年和2017年我们采用直接观察法、陷阱调查法和剖秆法对田间节肢动物进行调查, 采用聚类分析、物种累积曲线等方法对数据进行分析, 并比较了4个处理玉米田节肢动物群落的Margalef丰富度指数、Shannon-Wiener多样性指数、Simpson多样性指数、Pielou均匀度指数、优势集中性指数和群落相似性指数的差异及其随时间变化的规律。调查期间共记录节肢动物20目80科; 转化体玉米‘DBN9936’ (2015: 10.3 ± 2.6头, 2017: 3.3 ± 1.7头)和喷施除草剂的转化体玉米‘DBN9936’ (2015: 6.0 ± 1.5头, 2017: 17.0 ± 0.6头)上鳞翅目昆虫的数量明显低于受体‘DBN318’ (2015: 20.0 ± 3.2头, 2017: 24.0 ± 6.0头)和‘先玉335’ (2015: 21.0 ± 8.9头, 2017: 26.7 ± 2.0头); 物种累积曲线呈典型的抛物线, 各类玉米田间总体物种丰富度差异较小; 玉米生育期节肢动物调查结果累计数量的功能团组成及其丰富度、多样性、均匀度、优势集中性间均无明显的差异, 各类指数随时间变化的动态趋于一致, 群落间相似性程度较高。转基因玉米‘DBN9936’对鳞翅目害虫有明显的抗性, 对非靶标节肢动物无显著的影响, 对田间节肢动物的群落多样性、均匀度、丰富度、优势集中性等没有明显的影响。     

维生素K2对心血管疾病作用的研究进展

摘要：心血管疾病（CVD）目前是人类面临的重大健康问题之一,也是全球人口死亡的首要原因。近年来,国内外研究发现维生素K2对于防治许多心血管疾病发挥着重要作用。维生素K2主要由人体肠道微生物代谢产生,人类也可以通过细菌发酵类食品如纳豆和奶酪等获得,这反映出细菌与人共生关系的重要性。大量临床试验和基础医学实验表明,维生素K2参与羧化维生素K依赖蛋白（VKDPs）,具有防治骨质疏松症、改善血管钙化、减少炎性因子释放和提高胰岛素敏感性等功能。本综述主要分析维生素K2在心血管疾病的研究进展和前景。     

单增李斯特菌核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对其降解RNA活性的影响

为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响。利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的Rnase Ⅲ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其进行了基因突变;然后将rncS突变基因片段D50A、E122A克隆至表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达;应用SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组蛋白的表达情况及其抗原特异性;通过体外酶活试验研究其对RNA降解活性的影响。结构域分析结果显示,LM-Rnase Ⅲ氨基酸序列含有1个双链RNA结合结构域(DSRM)和1个核酸酶结构域(RIBOc),其中结构域RIBOc含有5个活性位点。SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122 A蛋白相对分子质量均为42.5 kD,与理论值相符;Western blot分析表明重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122A蛋白可与LM阳性血清发生免疫学反应。体外酶活实验表明,Rnase Ⅲ发挥降解活性依赖于Mn2+或Mg2+,将其第50位天冬氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS的降解活性有所降低(P0.001);第122位谷氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS降解活性极显著下降(P0.0001),提示第122位谷氨酸是维持LM Rnase Ⅲ RncS酶活性的关键位点。