慢病毒介导CD36基因沉默细胞株的构建及其对caveolin-1蛋白表达的影响

CD36作为重要的清道夫受体密切参与了巨噬细胞对氧化低密度脂蛋白的摄取作用,为了进一步研究CD36的功能,本文利用慢病毒介导的shRNA干扰技术,构建了CD36基因沉默巨噬细胞(J774A.1)株,并以此为模型分析了CD36在caveolin-1蛋白表达过程中的作用。首先,针对CD36基因序列设计合成5条shRNA片段,并构建得到pLKO.1-CD36-shRNA慢病毒干扰载体,测序鉴定后与psiCHECK-Ⅱ-CD36载体共转染入293T细胞中,筛选出有效的CD36-shRNA。将慢病毒干扰载体与病毒包装质粒共转染入293T细胞,包装得到慢病毒颗粒,之后感染J774A.1细胞,经嘌呤霉素筛选后得到CD36基因沉默稳转细胞株。Western blotting及激光共聚焦检测结果表明CD36基因沉默效率达90%,并且伴随着CD36的基因沉默,与之结合的DiI-oxLDL也随之大幅降低,证明构建成功具有良好生物学活性的CD36基因沉默细胞株。最后,抑制剂处理及oxLDL给药刺激实验结果表明,CD36的基因沉默能够显著降低JNK及ERK的磷酸化水平,进而抑制了caveolin-1的蛋白表达,表明CD36能够经由JNK及EKR信号传导调节caveolin-1的蛋白表达。     

S180腹水癌小鼠体液脂蛋白的探讨

 通过对患S(180)腹水癌小鼠的血清脂蛋白琼脂糖电泳分析,表明患癌小鼠的β蛋白逐渐增多,电泳的迁移率有减慢的趋势。通过对无细胞的腹水研究,发现其中相当于极低密度脂蛋白部分对癌细胞有较高的杀伤活性,而对正常的骨髓细胞无明显作用。该部分脂蛋白电泳迁移率比血清各种脂蛋白的迁移率均快。     

β2糖蛋白Ⅰ第五结构域及其突变体、短肽片段的原核表达及活性分析

β2糖蛋白Ⅰ(beta 2-glycoproteinⅠ,β2GPⅠ)是抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)血清中抗磷脂抗体(antiphospholipid antibody,a PL)的主要抗原。β2GPⅠ通过第五结构域与阴性磷脂ox LDL结合,进而被a PL识别,是APS动脉血栓发生的关键事件。该研究构建了编码β2GPⅠ第五结构域(β2GPⅠ-DⅤ)、β2GPⅠ-DⅤ突变体及β2GPⅠ-DⅤ的Phe280-Ala320片段的原核表达载体,对其进行诱导表达和纯化,解析了β2GPⅠ-DⅤ与阴性磷脂结合的分子机制,结果表明,β2GPⅠ-DⅤ中Cys281-Cys288以及Ser311-Lys317区段在空间上维持一定构型是与CL结合所必须的前提条件,而C245-C296,C288-C326两个二硫键在维持二者空间构型方面起到一定的作用。在此基础上,进一步检测了具有结合CL生物学活性的r DⅤ结合ox LDL以及APS血清中ox LDL的活性,表明r DⅤ具有与天然β2GPⅠ相一致的生物学活性。该研究获得的rβ2GPⅠ-DⅤ,以及与ox LDL结合的方法体系的建立,为APS早期实验室诊断奠定基础。     

低密度脂蛋白受体相关蛋白基因C766T多态性与阿尔茨海默氏病发病风险的Meta-分析

运用Meta分析的方法综合评价低密度脂蛋白受体相关蛋白基因(lowdensitylipoproteinreceptor-relatedprotein1gene,LPR-1)第三外显子C766T多态性与阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease,AD)发病风险的关系。通过检索Medline、Cochrane图书馆和中国生物医学文献数据库(CBM),纳入内容涉及LPR-1基因C766T多态性的基因型频率和(或)等位基因频率的独立病例对照研究。各文献满足研究方法相似,有综合的统计指标。研究年限为1997~2004年,语种不限。应用RevMan4.2软件进行统计分析。在AD组3764例和对照组3647例研究对象中,分别对基因型和等位基因频率做合并统计。各研究之间有显著的异质性,P<0.01,故采用随机效应模型分析合并结果。总体效应检验未发现CC基因型频率在病例对照之间统计学上的差异(Z=1.74,P=0.08,OR=1.17,95%CI:0.98~1.39),C等位基因频率在病例对照之间也未发现差异(Z=1.31,P=0.19,OR=1.11,95%CI:0.95~1.31)。Meta分析结果提示,LPR-1基因C766T多态性不是AD的主要风险因子,但尚不能完全排除其可能在AD发病中具有微弱的作用。     

氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞活性氧/活性氮的动力学

探讨不同条件下在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)对U937源巨噬细胞活性氧/活性氮(ROS/RNS)动力学变化的影响。通过观察Ox-LDL急性和慢性作用下细胞内一氧化氮(NO)、超氧阴离子(O2-·)和ROS等动力学变化,发现Ox-LDL都能显著诱导细胞内NO和O2-·的升高,且在急性刺激时NO的升高显著高于O2-·。此外,还观察到12h时ROS显著升高(P<0.01),而在24h时却明显下降,但仍显著高于对照细胞(P<0.01)。由此表明,在早期泡细胞形成的不同时间,调节相应自由基的代谢有助于减轻早期动脉粥样硬化的炎症反应。     

M41型A群链球菌的Ⅰ型胶原样蛋白与人低密度脂蛋白的相互作用

【目的】检测M41型A群链球菌(GAS)ATCC12373中Ⅰ型胶原样蛋白(Scl1)与人低密度脂蛋白(LDL)的相互作用。【方法】克隆了M41型GAS ATCC12373的Ⅰ型胶原样蛋白(Scl1)及其V区(Scl1-V)基因,并表达、纯化重组蛋白rScl1(C176)和rScl1-V(C176V)。通过重组蛋白与人血浆的亲和色谱层析、Western blot及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测C176、C176V与LDL的相互作用;通过GAS与LDL的ELISA试验和人血浆与GAS的共孵育试验,检测GAS与LDL的相互作用。【结果】结果证明C176和C176V可以与LDL特异性结合;表达Scl1的M41型GAS可以与LDL相结合。【结论】M41型GAS的Scl1可以与LDL特异性结合。     

供浆者多次献浆后sdLDL-C和ox-LDL水平的测定

目的探讨多次献浆后,对供浆者体内血浆小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平变化的影响。方法分别检测100例多次献血浆者和100例初次献血浆者的血浆sdLDL-C和ox-LDL水平,同时检测其血脂及血浆蛋白水平。结果多次献血浆者的血浆sdLDL-C、ox-LDL以及血脂水平略有下降,但与初次献浆者之间无显著性差异;多次献血浆者的血浆总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)与初次献浆者的水平相当,两者之间也无显著性差异。结论多次献血浆是安全的,不会增加动脉粥样硬化性心血管疾病的风险。     

不同剂量阿托伐他汀对稳定性心绞痛患者TNF-α 和LDL-C 水平的影响

目的:观察不同剂量阿托伐他汀对冠心病稳定性心绞痛患者血清肿瘤坏死因子a(TNF-α)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的影响。方法:用酶联免疫吸附法和生化发光分析法测定40例正常对照组和40例阿托伐他汀10mg组及39例阿托伐他汀20mg组冠心病患者治疗前后血清TNF-α和LDL-C水平的变化。结果:阿托伐他汀10mg及20mg组患者治疗12周后血清TNF-α和LDL-C水平明显降低,并且阿托伐他汀20mg组比阿托伐他汀10mg组血清TNF-α下降更明显,差异有显著性(P<0.05),但两组间LDL-C水平降低无显著性差异(P>0.05)。结论:阿托伐他汀可以降低冠心病患者血清LDL-C和TNF-α水平,减轻冠心病的炎症反应,并且这种机制独立于降脂作用以外。     

血清TC、TG和LDL-C水平与老年卵巢良恶性肿瘤的相关性分析

摘要 目的：探讨与分析血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平与老年卵巢良恶性肿瘤的相关性。方法：2018年8月至2021年4月选择在本院诊治的老年卵巢癌患者72例与老年良性卵巢肿瘤患者72例作为恶性组与良性组,同期选择在本院进行健康体检的老年人72例作为正常组。检测三组血清TC、TG、LDL-C水平、血清肿瘤标志物水平并进行相关性分析。结果：恶性组、良性组的血清TC、TG和LDL-C水平高于正常组,恶性组高于良性组（P<0.05）;三组的血脂异常率分别为77.8 %、44.4 %和6.9 %,对比有差异（P<0.05）。恶性组、良性组的血清CA125、CA153和CA199水平高于正常组,恶性组高于良性组（P<0.05）。在老年卵巢肿瘤144例患者中,偏相关分析显示：TC、TG、LDL-C、CA125、CA153、CA199与卵巢癌存在相关性（P<0.05）;Pearson分析显示：TC、TG、LDL-C与CA125、CA153、CA199存在相关性（P<0.05）。二元Logistic回归分析显示：TC、TG、LDL-C均为导致卵巢癌发生的影响因素（P<0.05）。结论：老年卵巢良恶性肿瘤患者多伴随有血清TC、TG和LDL-C水平的异常,与血清肿瘤标志物水平存在相关性,是引发老年卵巢癌发生的重要因素。     

维生素E的功能、吸收与代谢(2)

在VE转运过程中,α-生育酚结合蛋白(α-TBP)对α-生育酚的特异性转运有重要作用。从肝细胞质中分离到2种不同作用的TBP:一种是30×103TBP,只存在肝细胞中,其功能是选择性地将α-生育酚混入刚形成的低密度脂蛋白(VLDL);另一种是15×103TBP,分布在所有的主要组织中,其功能可能是与α-生育酚在细胞间的分布有关。在α-生育酚进入组织器官的过程中,SR-BI(scav-enger receptor class B type I)对α-生育酚从膜蛋白到特定组织的转运具有重要的作用。敲除SR-BI基因大鼠的睾丸、卵巢、肺部和大脑的α-生育酚的浓度显著下降,而细胞膜的α…