三江源地区不同退化程度草地的土壤放线菌区系

用不同分离方法,对三江源地区不同退化程度草地土壤放线菌的数量和多样性进行了比较.从5份土样中共分离放线茵178株,根据表型特征和16S rRNA基因序列分析,分别归入7个已知属:小单孢菌属(Micromonospora)、原小单孢菌属(Promicromonospora)、诺卡氏菌属(Nocardia)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)、游动放线菌属(Actinoplanes)、韩国生工茵属(Kribbella)和链霉菌属(Streptomyces).其中链霉菌属分离菌株可归入7个表型类群.发现轻度退化高寒草原的土壤放线菌数量,丰度和多样性高于重度退化高寒草原;针茅高寒草原的土壤放线菌数量和多样性高于蒿草高寒草甸,而其中链霉菌的种类低于后者.表明高寒草地的退化程度与其中土壤放线茵的数量和多样性呈负相关.     

外源p21~(WAF1)转染对人成纤维细胞凋亡的影响

构建了有义和反义ｐ２１ＷＡＦ１ 逆转录病毒表达载体, 分别经脂质体包裹后转染人胚肺二倍体成纤维细胞（２ＢＳ）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交证实转染细胞中外源ｐ２１ ＷＡＦ１ｃＤＮＡ 已整合入基因组中。与空载体转染细胞相比, 有义转染细胞的ｐ２１ＷＡＦ１ ｍ ＲＮＡ 表达上升; 细胞增殖速度明显减慢; 对丁酸钠诱导凋亡的敏感性降低, 表现在细胞存活率升高, 核ＤＮＡ 梯状断裂片段出现的时间滞后, 断裂片段浓度下降, 流式细胞计检测的凋亡峰面积缩小。而反义转染细胞的ｐ２１ＷＡＦ１ ｍ ＲＮＡ表达下降; 细胞增殖速度较快; 对丁酸钠诱导凋亡的敏感性上升, 有关表现与有义转染细胞相反。说明２ＢＳ细胞内ｐ２１ＷＡＦ１ 的表达量与其被丁酸钠诱导凋亡的能力呈负相关。     

非编码RNA与X脆性综合征

X脆性综合征（fragile X syndrome,FXS）是由X脆性智力低下1（FMR1）基因5＇端非翻译区CGG重复序列的异常扩增,导致X脆性智力低下蛋白（FMRP）缺失引起的.非编码RNA是除编码蛋白质的mRNAs以外的其他所有RNA分子,已被发现在中枢神经系统中具有重要的作用,如微RNA与BC1/BC200 RNA参与了X脆性智力低下蛋白的翻译抑制.认识非编码RNA与X脆性综合征的关系不但能加深对X脆性综合征的分子机制的理解,而且有助于揭示学习与记忆的奥秘.     

川金丝猴粪样内3种类固醇激素保存时效分析

川金丝猴(Rhinopithecus roxellanae)是中国特有的灵长类物种,生存于海拔1 400～3 300 m的山地森林地带。采用拾取新鲜粪便的非损伤性途径研究该物种野生种群生理状态,必须首先确定其新鲜粪便在特定保存方法下的保存时效。本项研究探讨在川金丝猴自然分布区夏季可获得的低温(4±1)℃、在95%乙醇中保存条件下,该物种新鲜粪便内3种类固醇激素(睾酮、雌二醇、孕酮)在8个设定天数:0(标准对照)、5、6、7、8、10、20、30 d的保存时效。结果表明,雌性川金丝猴粪样内睾酮和雌二醇在30 d内可稳定保存,孕酮含量在保存10 d时的平均值显著性低于标准参照值(P0.05);雄性川金丝猴粪样中睾酮含量在保存6 d时的平均值显著低于标准参照值(P0.05)。本研究说明,在野生川金丝猴新鲜粪便保存条件一致的情况下,该物种新鲜粪样内睾酮、孕酮、雌二醇3种激素保存时效并不一致,实际运用时需要结合研究目的区别对待。     

DNA的凝胶原位杂交法在性别分化异常中的应用

在国内,Y染色体特异的重复顺序作探针 进行DNA杂交用于妊娠早期鉴定性别已获 成功〔a。上海市儿童医院遗传研究室又进一步 改进、建立DNA 的凝胶原位杂交法鉴定性 别〔刀。本文应用此方法对性分化异常的患者进 行研究。     

玫瑰链霉菌海藻糖合成酶基因克隆、表达及功能鉴定

目的:克隆玫瑰链霉菌海藻糖合成酶基因(Srt)使其在大肠杆菌XL10-Gold中高效表达,并对重组酶的酶学特性进行研究。方法:利用PCR技术从玫瑰链霉菌中克隆到一段长1 704bp的海藻糖合成酶基因(Srt),构建重组表达质粒pSE380-Srt-treS,将其转化大肠杆菌XL10-Gold中诱导表达,对重组纯酶进行SDS-PAGE分析及酶学特性测定。结果:SDS-PAGE显示在65kDa处有明显单一蛋白条带。该酶可催化麦芽糖和海藻糖之间的可逆反应,海藻糖得率达82%,且含有很低的副产物葡萄糖(5%左右)。最适反应温度和pH分别为30℃、7.5,Cu2+、Zn2+和Tris能明显抑制酶活力。该酶还可催化蔗糖生成一种无龋齿,适合糖尿病患者食用的糖类-海藻酮糖。结论:成功克隆表达了一个海藻糖合成酶基因,该酶转化率高,副产物较少,为工业酶法生产海藻糖奠定基础。     

晚期非小细胞肺癌组织中BRCA1、STMN1、RRM1的表达及其临床意义

目的：探讨晚期非小细胞肺癌（NSCLC）组织中DNA修复基因家族成员BRCA1、STMN1、RRM1的表达及其临床意义。方法：回顾性分析本院2009年1月至2012年1月86例经组织学或细胞学证实的IIIB／IV期非小细胞肺癌患者,以分支DNA-液相芯片法检测肿瘤标本的BRCA1、STMN1、RRM1基因mRNA表达,并对检测结果应用SPSS13．0进行统计分析。结果：BRCA1中高表达与患者的性别无明显相关性（x毫0．1003,P=0．7514）,STMN1中高表达与肿瘤的分化程度相关（卡方=18．3002,P=0．000）。分析基因mRNA的表达情况与患者的化疗有效率,提示BRCA1中高表达患者完全缓解0例、部分缓解23例、稳定17例、进展16例,低表达患者分别为0例、12例、14例、4例（P〉0．05）,而STMN1表达阳性患者与阴性患者的临床疗效分别为0例、14例、21例、16例和0例、21例、10例、4例（P〈0．05）;RRM1表达阳性患者与阴性患者的临床疗效分别为0例、17例、19例、20例和0例、18例、12例、0例（P〈0．05）。结论：通过对BRCA1、STMN1、RRM1基因mRNA表达的个体化治疗靶标检测,对患者的预后以及化疗疗效有一定的预测价值。     

茎杆的第一节间离体再生空心菜

以空心菜（Ipomoea aquatica Forsk.）品种‘白骨柳叶’为材料,通过筛选植物外植体和调整培养基激素配比等方法,首次建立了茎秆第一节间为外植体的空心菜离体再生体系。结果表明,在MS基本培养上添加0.05% 的植物组织培养抗菌剂PPM可获得大量空心菜无菌苗;植株子叶和下胚轴的切段均未诱导出不定芽,而茎秆第一节间为外植体能成功诱导出不定芽,诱导成功率为20%,最佳培养基配方为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA;不定芽诱导生根的最佳培养基配方为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,生根率为100%。诱导成功后,将完整的再生苗移栽至基质土中,成活率可达100%。     

人凝血IX因子基因乳腺组织特异性表达载体的构建及其在奶山羊乳腺中的分泌性表达

血友病B(Hernophilia B)是由于人凝血IX因子(hFIX)缺乏所致的一种严重出血性疾病。常规治疗方法是通过输血或输入人浓缩凝血IX园子来实现的,因此患者很容易被肝炎病毒甚至爱滋病毒感染。近年来,人们期望通过转基因动物乳腺表达并从乳汁中分离生产hFIX蛋白,以解除血友病患者的痛苦。以转基因动物的乳腺组织即乳腺生物反应器生产外源蛋白具有原核生物,酵母以及离俸真核细胞生产系统所不具备的优点：生产的外源蛋白经过体内加工和修饰,特别是真核蛋白的转译后加工(如糖基化和羧基化)．其生化特性、生物学活性与天然蛋白完全相同^[1];另外从乳汁中生产外源蛋白不需要复杂的工厂设备。因此开展人凝血IX因子乳腺生物反应器的研究具有重要的经济意义和临床应用价值。转基因动物乳腺生物反应器的关键在于外源基因乳腺组织特异性表达载体的构建。我们利用小鼠MAR元件(Matrix attachment regions)．牛的β-casein基因调控顺序,hFIX mini-gene和hFIX cDNA分别建成两种乳腺组织特异性表达载体pMCIXm和pMCIX,经SA脂质体包埋载体DNA后直接转染奶山 羊乳腺小叶,hFIX蛋白在奶山革乳汁中获得瞬间分泌性表达,最高表达量为13.7ng/ml乳汁。其中含hFIX mini-gene的表达载体在奶山羊乳汁中的表达量高于含hFIX cDNA的表达载体．表明hFIX的in-tronl能够提高该基因在活体奶山羊乳腺中的表达。A7单抗和柠檬酸钡吸附检测表明乳汁中的hFIX 蛋白羧基化和活性比率都在90％以上。以上结果肯定了载体构建的正确性．不但为研制hFIX蛋白乳腺生物反应器提供了有效的表达载体,同时也表明利用阳离子SA脂质体包埋质粒DNA直接转染活体物乳腺可以作为验证乳腺表达载体构建正确性的快速检测手段。