SMB-S15细胞中朊病毒PMCA方法的建立及对白藜芦醇抗朊病毒作用的评价

朊病毒是一类能引起人或动物神经退行性疾病的感染因子。蛋白质错误折叠循环扩增(Protein misfolding cy-clic amplification,PMCA)是一种常见的朊病毒体外扩增技术。白藜芦醇是一种具有较高研究价值的植物抗菌素。为了建立SMB-S15细胞中朊病毒的PMCA体系,并探索PMCA技术在评价白藜芦醇抗朊病毒作用的意义,本研究以朊病毒感染细胞系SMB-S15细胞匀浆为种子,健康小鼠脑组织匀浆为底物,建立PMCA技术平台。将不同浓度的白藜芦醇导入PMCA体系,通过Western Blot方法检测PMCA产物中异常朊蛋白(PrPSc)的生成和变化。结果显示:SMB-S15细胞中PrPSc可以在建立的PMCA体系有效地复制。新生成的PrPSc分子的糖基化特征与原始细胞中的PrPSc不同,其双糖基化分子比例明显增加。同时也有别于羊瘙痒因子139A和ME7感染小鼠脑组织中的PrPSc分子。加入白藜芦醇后,PrPSc在PMCA体系中的复制明显被抑制,呈现出剂量依赖效应,其EC50约为4.616μM。这些结果表明:SMB-S15细胞中的PrPSc可以通过PMCA大量扩增,建立的PMCA技术可有效地反映白藜芦醇对PrPSc在体外复制的抑制作用。     

不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖产量的影响

目的 探索不同酸水解酪蛋白对W135群与Y群脑膜炎奈瑟菌(脑膜炎球菌)荚膜多糖产量的影响。方法 分别以NaCl质量分数为37%和14%的酸水解酪蛋白作为有机氮源配制改良半综合高盐培养基和低盐培养基,利用全自动细菌发酵罐分别在两种培养基里培养W135群和Y群脑膜炎球菌,比较这两种菌株在两种培养基中的生长时间、收获液菌密度( A 600 nm 值)、收获液去菌体后与去复合多糖后上清中的荚膜多糖含量,以及纯化后的精糖产量;比较高盐培养基收获液及其2倍稀释液中不同终含量的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)溶液对多糖沉淀效果的影响。结果 W135群与Y群脑膜炎球菌在两种培养基中的培养时间差异无统计学意义( P >0.05),但高盐培养基收获液的菌密度、收获液去菌体后上清液中的多糖含量均高于低盐培养基收获液,差异有统计学意义( P < 0.05),而高盐培养基收获液纯化后的精糖产量低于低盐培养基,差异有统计学意义( P <0.05)。高盐培养液2倍稀释后,在CTAB终体积分数为0.04%时,W135群与Y群脑膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀释高盐培养液即使CTAB终体积分数提高到0.14%,依然也不能完全沉淀 W135群与Y群脑膜炎球菌多糖。结论 不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎球菌的生长密度和荚膜多糖产量有影响,用CTAB溶液沉淀荚膜多糖时需控制收获液盐含量。     

塞内卡病毒A结构蛋白VP2诱导PK-15细胞自噬的研究

本研究在塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)诱导自噬的基础上,着重探究VP2蛋白在细胞自噬过程中的作用。构建VP2基因真核表达载体pcDNA3.1-VP2,将其转染至PK-15细胞,通过检测自噬蛋白和相关基因的表达情况,明确VP2蛋白对细胞自噬的影响。结果显示,本研究成功构建了pcDNA3.1-VP2真核表达载体,且SVA VP2基因在PK-15细胞中正常表达;与对照组相比,VP2蛋白显著上调LC3蛋白的表达水平（P<0.01）;同时,自噬基因LC3、Beclin-1和ATG5转录水平均显著提高（P<0.01）。综上所述,本研究证实SVA VP2蛋白可诱导PK-15细胞自噬,且VP2蛋白与自噬蛋白和基因表达水平呈正相关,为进一步研究病毒感染与致病机制打下基础。     

生命早期益生菌干预预防儿童过敏性疾病的Meta分析CSCD

目的 系统评价生命早期益生菌干预预防儿童过敏性疾病的疗效。方法 采用计算机检索万方、中国知网、CBM、PubMed、Cochrane library、Embase和Web of science数据库有关生命早期益生菌干预对儿童过敏性疾病预防作用的随机对照试验研究,检索时间为建库至2020年9月,应用Stata 11.0软件对纳入研究进行Meta分析。结果 最终纳入36篇随机对照试验文献。Meta分析结果显示,生命早期益生菌干预对预防湿疹(RR=0.84,95%CI:0.73~0.98,P=0.022)和食物过敏(RR=0.82,95%CI:0.68~0.98,P=0.028)作用显著,但对预防哮喘(RR=0.92,95%CI:0.80~1.06,P=0.231)、喘息(RR=0.98,95%CI:0.89~1.07,P=0.635)、过敏性鼻炎(RR=0.99,95%CI:0.78~1.26,P=0.945)和过敏性鼻结膜炎(RR=1.13,95%CI:0.86~1.49,P=0.376)无显著作用。结论 生命早期益生菌干预对儿童湿疹、食物过敏具有预防作用,但对哮喘、喘息、过敏性鼻炎和过敏性鼻结膜炎无预防作用,对于其机制仍需进一步研究。     

p66ShcA蛋白与机体衰老关系

p66ShcA蛋白是哺乳动物原癌基因Shc家族成员中的一员,除具有该家族特有的保守结构域（PTB和SH2）外,在N端具有特有的CH2结构域。当细胞在外界压力（H2O2、UV）刺激条件下,p66ShcA蛋白CH2结构域中36位的苏氨酸磷酸化,参与p53介导的凋亡信号通路,促进细胞凋亡。近年的研究阐明了氧应激引起的细胞凋亡和机体衰老之间的关系,因此,p66ShcA蛋白是联系细胞凋亡和衰老的交汇点。目前通过对p66ShcA蛋白转录方式的研究发现,p66ShcA蛋白启动子甲基化和p66ShcA蛋白的表达有负调控作用,所以对p66ShcA蛋白表达的调控,为延缓机体衰老及治疗由衰老引起的各种疾病带来新的思路。     

甘肃宝积山盆地中侏罗世植物群地质时代及植物区系探讨*

湘西–鄂西地区具有中–晚奥陶世连续过渡、出露良好的地层序列, 并产出大量头足类化石。我们选择了位于该地区的湖北宜昌陈家河剖面和湖南桃源茅草铺剖面开展头足类研究工作, 采集化石标本1000余块, 鉴定出了24属46种。本文描述了其中6个新种, 归属于3目3科5属。在中–晚奥陶世头足类动物群研究基础上, 本文在湖北宜昌陈家河剖面宝塔组和临湘组自下而上识别出Sinoceras chinense带和Richardsonoceras simplex带两个头足类化石带; 在湖南桃源茅草铺剖面牯牛潭组、大田坝组和宝塔组下部识别出4个头足类化石带, 自下而上分别是Proterovaginoceras incognitum带、Ancistroceras undulatum带、Cyclolituites带以及Sinoceras chinense带。在此基础上, 结合前人已发表的数据, 本文厘定了中扬子地区牯牛潭组到宝塔组的5个头足类化石带, 自下而上分别是: Proterovaginoceras incognitum带、Meitanoceras-Ancistroceras带、Lituites–Cyclolituites带、Sinoceras chinense 带和Richardsonoceras simplex带, 为该地区生物地层划分对比提供了头足类信息。     

转BT+ CPTI基因抗虫棉的种植对土壤根际反硝化菌丰度和多样性影响

摘要:【目的】为评价转基因棉花的种植对根际土壤反硝化细菌丰度和多样性的影响,【方法】以转Bt + CpTI 基因抗虫棉(SGK321)及非转基因亲本棉花石远321(SY321)根际土壤反硝化细菌为研究对象,分别在种植前和棉花的不同生长时期(蕾期、花期、铃期和絮期)取样。采用实时荧光定量PCR方法和末端标记限制性片段多态性(T-RFLP)技术对土壤中反硝化细菌的功能基因nosZ基因进行定量和多样性分析。【结果】结果发现随棉花不同生长时期两种棉花根际土壤中的反硝化细菌丰度均发生显著变化,但变化趋势不同。转基因棉花根际土壤反硝化细菌从种植前的3.12×106 copies/g dry soil一直增加到铃期的2.81×107 copies/g dry soil,增加了8倍。非转基因棉花根际土壤反硝化细菌丰度变化受生长周期影响更为显著,表现为蕾期增加,花期降低,铃期又增加的趋势。典范相关及部分典范相关分析反硝化细菌多样性结果表明其多样性受环境因素pH、硝酸根浓度以及棉花生长时期(蕾期和花期)影响最为显著,但此外棉花品种也起到了非常重要的作用,【结论】反硝化细菌的丰度和多样性既受棉花生长时期的影响,同时也受棉花品种的影响,转基因棉花通过调节根际土壤中的pH 和硝酸根浓度,来影响其多样性和丰度。转Bt + CpTI基因抗虫棉的种植增加了土壤pH,从而导致根际土壤反硝化细菌的多样性和丰度增加。     

血钙对老年肺炎患者的严重程度及预后的影响

目的：研究血清钙离子浓度与老年肺炎患者的严重程度及预后的关系。方法：按照脓毒症的诊断标准将入住急诊ICU的老年肺炎患者206例,分为脓毒症组（155例）和非脓毒症组（51例）,脓毒症组又按照预后分为存活组（91例）和死亡组（64例）。分别测定血清钙离子浓度、血浆白蛋白、C-反应蛋白（CRP）、血白细胞计数等有关的实验室指标,比较2组指标的差别。结果：脓毒症组中血清钙离子浓度较非脓毒症组降低,CRP、血白细胞计数较非脓毒症组升高（P〈0．01）;亚组分析中,死亡组中血清钙离子浓度较存活组降低（P〈0．01）,CRP较存活组升高（P〈0．05）,血白细胞计数两组比较无明显差异（P〉0．05）;血清钙离子浓度与血浆白蛋白的浓度呈高度正相关。结论：血清钙离子浓度对判断老年肺炎患者的预后有一定的临床意义。     

维吾尔药神香草调节哮喘大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱的实验研究

目的：观察维吾尔药（维药）神香草对哮喘大鼠模型神经内分泌免疫网络若干组分的影响。方法：取雄性健康Wistar大鼠50只,随机分为正常对照组,哮喘模型组,神香草低、中、高剂量治疗组。采用致敏和雾化的方法制备哮喘模型。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清中白介素-4（IL^4）、白介素-6（IL-6）、干扰素-γ（IFN-γ）、皮质酮（CORT）水平;放免法检测血浆中促肾上腺皮质激素（ACTH）的含量;采用实时定量-聚合酶链反应（RT—PCR）法测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）mRNA表达水平。结果：哮喘反复发作时,大鼠下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴紊乱,哮喘大鼠下丘脑CRHmRNA表达和血浆ACTH无明显变化,实验各组血清CORT水平升高（P〈0．05）,神香草高剂量组血清CORT含量高于低剂量组（P〈0．05）。细胞因子IFN-γ无明显变化,IL-6、IL-4有下降趋势（P〈0．05）。结论：哮喘反复发作的大鼠存在NEI网络的紊乱;神香草可以增强下丘脑．垂体．肾上腺皮质（HPA）轴的功能,改善细胞因子的平衡。这些可能是其治疗哮喘的机制之一。     

乳酸和APACHE II 评分在评估老年脓毒症患者预后中的应用

目的:研究乳酸和急性生理学及慢性健康状况评分(APACHE Ⅱ评分)对老年脓毒症患者预后的评估作用。方法:老年脓毒症患者96例,按照入院时血乳酸值分成升高者60例,乳酸正常者36例,比较两组的病死率、休克、机械通气和MODS发生率、APACHE Ⅱ评分的区别;根据APACHE Ⅱ评分(<15、15～24、≥25)分为3组,比较每组患者的病情和预后区别。结果:乳酸升高组老年脓毒症患者的机械通气、休克发生率、MODS发生率、APACHE Ⅱ评分明显大于乳酸正常组(P<0.05),病死率明显上升(28.3%vs 2.7%),(P=0.005);随着APACHE Ⅱ评分增高,患者病情逐渐加重,休克发生率和住院病死率明显升高,(P<0.05),患者乳酸水平也明显增高(P<0.05)。结论:血乳酸和APACHE Ⅱ评分都可以评估老年脓毒症患者病情严重和预后,两者升高提示预后差。