一个与非小细胞肺癌转移相关的基因--RAB5A基因

采用mRNA差异展示技术(mRNA DD)研究具有相同细胞来源,但转移能力高低不同的人肺腺癌细胞系AGZY83-a(低转移)和Anip973(高转移),分析在两个细胞系中基因差异表达的情况,发现在高转移细胞系中有RAB5A基因的表达.该基因为蛋白质入胞信号的调控者,为RAS超家族成员.为进一步证实其转录表达的调控改变情况,以及RAB5A高表达的临床意义,进一步采用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测了50例临床非小细胞肺癌的手术标本,结果表明,RAB5A的表达有随转移发生而增强的趋势,而RAB5A的蛋白表达程度在有转移的病例中明显增强(P<0.05).     

基于高通量测序的极小种群野生植物长梗杜鹃转录组分析

为加强特有濒危植物长梗杜鹃资源的评价、保护和鉴定工作,及为今后遗传育种和改善其农艺性状提供有益参考。本研究采用新一代高通量测序平台Illumina HiSeq 4000对其转录组测序,得到的数据过滤后进行de novo组装并聚类去冗余,获得74 092个Unigenes,平均长度、N₅₀、Q₂₀、Q₃₀以及GC含量分别为938 nt、1 616 nt、98.22%、95.20%和43.24%,其中1 Kb以上的Unigenes有23 879条。通过与七大功能数据库比对,分别有39 876（NR：53.82%）、38 065（NT：51.38%）、27 384（Swissprot：36.96%）、16 099（COG：21.73%）、30 401（KEGG：41.03%）、17 518（GO：23.64%）以及29 676（Interpro：40.05%）条Unigenes获得功能注释。长梗杜鹃转录组中的Unigenes根据GO功能大致可分为生物学过程、细胞组分和分子功能3大类56亚类,其中执行生物学过程的基因最多,占41.53%;与COG数据库比对,根据其功能大致可分为25类;以KEGG数据库为参考,可归为6个代谢通路大类、32类代谢途径,并发掘出176条与人类疾病相关的Unigenes,包括内分泌及代谢疾病（167条）和抗药性（9条）。根据注释结果共检测出39 418个CDS,未注释上的Unigenes使用ESTScan预测后获得3 194个CDS。同时,预出到1 488个编码TF的Unigenes,以及检测到57 927个SNP多态位点。该转录组分析为今后长梗杜鹃乃至杜鹃属植物功能基因挖掘与利用、基因克隆、抗性机理分析、遗传资源分类和进化、分子标记开发以及分子辅助育种等研究提供了基础数据和重要参考。     

宫颈癌p16基因甲基化及表达的研究

为了探讨p16基因甲基化及异常表达在宫颈癌中的意义,分别采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测不同病理类型和临床分期的60例宫颈癌组织中p16基因启动子区域5´CpG岛甲基化状态;采用PCR方法检测p16基因外显子1（E1)和外显子2(E2)纯合缺失情况;采用免疫组化的方法分析p16蛋白的表达缺失和减弱情况。结果显示正常对照组织及癌旁p16基因无甲基化,且无E1和E2缺失和p16蛋白表达异常。60例宫颈癌标本的甲基化率为21.67%（13/60）;p16 基因缺失率为15.00%（9/60）;p16蛋白表达下降或无表达为51.67%（31/60）。可见p16基因蛋白的阳性表达率随着临床分期升高呈明显下降趋势。结果提示p16基因失活在宫颈癌中多见且与病理分级密切相关。p16 基因甲基化在宫颈癌发生中起着一定作用。Abstract： To detect hypermethylation and aberrant expression of the p16 gene in cervical carcinoma (CC), methylation-specific PCR (MSP) was used to determine the methylation status of 5´CpG islands of the p16 gene, loss or decrease of p16 expression was analyzed by immunohistochemistry (IHC), and homozygous deletion of exon 1 (E1) and/or exon 2 (E2) was determined by PCR. in 60 cases of CC at different pathological grades and clinical stages. The results showed absence of methylation and presence of normal expression of the p16 gene in the control and adjacent tissues of CC. Hypermethylation, loss or decrease of expression and deletion of the p16 gene were detected in 21.67%(13/60), 51.67%(31/60) and 15.00%(9/60) of the tumor tissues, respectively. The rate of p16 expression markedly reduced with the increase of clinical stages. Our data suggested that inactivation of the p16 gene was a frequent event and positively correlated with pathological grades in CC, and that methylation of the p16 gene was an important event in carcinogenesis of CC.     

地衣芽孢杆菌类细菌素的分离、鉴定及其原核表达

目前,我国饲料中全面禁止添加抗生素,寻找新型的抗生素替代物成为科学研究的热点之一。为获得新的细菌素,本研究以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特氏菌为指示菌,通过牛津杯扩散法从羊驼粪便中筛选到高产抑菌物质的芽孢杆菌。基于菌落特征、革兰氏染色和16S rRNA的鉴定结果,将分离到的产抑菌物质菌株命名为地衣芽孢杆菌SXAU06株。采用硫酸铵沉淀、氯仿抽提、分子截留和SDS-PAGE等技术对所产抑菌物质进行分离纯化,经LC-MS/MS和生物信息学分析发现,抑菌物质为分子量约14 kDa的类细菌素,将其命名为BLIS_SXAU06。耐受性试验结果显示,BLIS_SXAU06具有耐高温、耐酸碱和耐蛋白酶K的特性。利用大肠杆菌表达系统对BLIS_SXAU06进行重组表达,所获得的重组BLIS_SXAU06具有抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特氏菌生长的活性。综上所述,BLIS_SXAU06具有优良的特性,可进一步在农业生产、生物医药和食品加工领域开展研究。     

RAB5A蛋白G81R位点突变对其功能的影响

为探讨G81R位点突变对RAB5A蛋白功能的影响,将RAB5A G81R突变体和正常RAB5A反义RNA分别插入pcDNA3．1／V5-His TOPO真核表达载体,并转染到Anip973细胞。用Western blot方法检测稳定转染后细胞RAB5A蛋白的表达水平,通过血清饥饿法使Anip973和转染后的细胞同步化,停滞于G0～G1期,再恢复血清培养使细胞从G0～G1期释放,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分比。结果显示RAB5A G81R突变体的反义RNA可完全封闭Anip973细胞中RAB5A的表达,正常RAB5A反义RNA部分封闭RAB5A表达。并且,Anip973细胞周期的长短与RAB5A的表达程度成反比。RAB5A G81R反义RNA能够有效地阻断Anip973细胞中RAB5A蛋白的表达。阻断或降低RAB5A的表达可延长细胞周期。     

HIV感染导致MT4细胞蛋白表达差异的初步研究

为了比较MT4细胞株感染H1V-1的IIIB株前后的蛋白质表达差异,我们分别提取MT4细胞及感染了人类免疫缺陷病毒(HrV)的MT4细胞的总蛋白质,通过双向电泳分离,使用Image Master 2D Elite 3．10图像分析软件分析获得的凝胶图谱,寻找差异点,使用质谱仪鉴定获得的差异点蛋白质。结果表明感染HIV和未感染HIV的MT4细胞有40个蛋白质点差异,HIV感染后减少的蛋白质点有12个,增多的有28个,通过质谱分析,29个蛋白质得到鉴定。其中HIV感染后下调的蛋白质有能量代谢相关蛋白、肌动蛋白相关蛋白及假想蛋白等;上调的蛋白有肌动蛋白、酶类蛋白、免疫蛋白及假想蛋白等。通过研究我们可以看出宿主细胞感染HIV病毒后有多个蛋白发生变化,可能和HIV与宿主细胞的相互作用有关。为了研究HIV感染的机制必须去除高丰度蛋白,针对特定功能的蛋白质进行具体研究。     

一个在肺腺癌细胞系中差异表达cDNA片段的定位及表达分析

为了研究和克隆肺癌转移相关候选基因,探讨肺癌发生及转移的分子基础,应用细胞培养,cDNA克隆,Noorthern印记杂交和生物信息学技术分析了在细胞来源相同,但转移能力不同的肺腺癌细胞系AGZY83－a和Anip973中差异表达片段OPB7－1在人不同组织中和不同人肺癌细胞系中的表达情况,并应用RH定位技术对该片段进行了基因定位。表明OPB7－1与已知基因同源性差,该基因在正常人多种组织中有表达,心肌和骨骼肌中高表达,转录本均为3.0kb左右。在不同人肺癌细胞系中存在该基因的表达差异,高转移潜能,低分化及高浸润的细胞系中呈高表达趋势,且表达的片段大小略有差别。提示OPB7－1是一个具有广泛表达为的基因,可能是与肺癌的发生发展相关的新基因。     

氧和二氧化碳对番茄后熟的影响

贮藏番茄的气体中,氧分压低于1%时,产生生理损伤。在13—27℃的温度下,7%的氧分压是不能抑制番茄后熟的临界值。在12—14℃的温度下,2—4%的氧分压是长期贮藏番茄的最适条件,可以推迟呼吸高峰的到来。氧分压高到40—50%有一定的催熟作用。乙烯利在27℃和氧分压为0—1%的条件下,没有催熟作用。当氧分压高于2%时,有催熟作用,并可诱导呼吸高峰的提前出现。适当浓度的 CO_2对番茄的后熟有抑制作用,浓度过大则产生毒害作用。CO_2抑制后熟的作用和对番茄的毒害作用与 O_2分压有拮抗。在一定浓度的 CO_2条件下,提高氧分压可减弱CO_2对后熟的抑制和减轻 CO_2对番茄的生理毒害。     

Rab5a研究进展

Rab5a是Rab蛋白家族成员之一,属于小GTP酶。Rab5a是早期胞吞途径中一个重要的限速成分,主要负责调控胞吞中胞吞泡与早期内体的融合。近年来国内外对其研究非常活跃。现对Rab5a的结构、相互作用蛋白及功能的最新研究进展进行综述。     

cDNA表达文库转染NIH3T3-从高转移人肺腺癌细胞系Anip973中克隆新肿瘤转移相关基因

培养人高转移肺腺癌细胞系Anip973,构建其cDNA表达文库并转染小鼠成纤维细胞NIH3T3,将经药物筛选后的转染细胞克隆消化为单细胞,接种到软琼脂中培养2周,根据细胞明显的形态学变化挑选出有意义的细胞克隆,扩增再培养,提取DNA,PCR扩增插入片段并进行测序分析。结果表明:软琼脂中挑选出克隆100多个,PCR测序后,得到3个已知基因包括人类核糖体蛋白L23、人类假定蛋白FLJ22104和人类丝氨酸蛋白酶抑制因子6亚型以及一些氨基末端截短的核酸序列。进一步的研究表明转染人类核糖体蛋白L23的细胞与转染空载体细胞相比具有较高的侵袭能力(P<0.02)。利用cDNA文库在NIH3T3细胞中的表达,随后筛查鉴定在软琼脂中发生形态学变化的细胞,是一种寻找恶性转化和癌转移相关基因的有效方法。人类核糖体蛋白L23基因在细胞的运动和转移中发挥重要作用。