外泌体在病毒感染诊断和治疗中的作用研究 *

外泌体是多泡体与细胞质膜融合后释放的细胞外囊泡.它们携带有源自分泌细胞的功能性蛋白质,脂质和核酸,能够介导细胞间通信,并在生物体的致病过程中发挥重要作用.当前,对外泌体在病毒感染中的作用机制研究,以及外泌体作为病毒感染诊断和治疗的潜在标志物研究仍处于初级阶段.首先阐述了外泌体的组成和生物学发生机制;然后重点阐述了外泌体在病毒感染中的作用机制,尤其是其在免疫调节中的作用;最后探讨了外泌体作为病毒感染诊断和治疗的潜在标志物的可能性及其应用前景.     

利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除TrxR1基因的HCT-116细胞株北大核心CSCD

为更好地研究靶向硫氧还蛋白还原酶1的小分子化合物的细胞内靶点选择性,利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除TrxR1基因(编码硫氧还蛋白还原酶1)的HCT-116细胞株。首先根据TrxR1基因序列和CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计并选择合适的敲除位点,再根据敲除位点序列设计敲除TrxR1基因的sgRNA干扰序列,以pCasCMV-Puro-U6空质粒载体为骨架构建能表达该sgRNA干扰序列的重组质粒。质粒共转染至HCT-116细胞后,利用嘌呤霉素筛选TrxR1敲除的HCT-116细胞,通过DNA测序、免疫蛋白印迹、TRFS-green荧光探针和细胞内TrxR1酶活力检测等方法鉴定和验证HCT-116细胞的TrxR1基因敲除效果。进一步通过CCK-8实验初步研究靶向TrxR1小分子化合物对细胞内TrxR1酶活力和细胞增殖力抑制的相关性。结果显示,表达sgRNA干扰序列的重组质粒可以敲除HCT-116细胞中TrxR1基因,筛选获得的稳定敲除细胞HCT116-TrxR1-KO中无TrxR1蛋白表达,而靶向TrxR1小分子抑制剂对该细胞无TrxR1酶活力和细胞增殖力抑制效果。本研究利用CRISPR/Cas9系统成功构建了HCT-116的TrxR1基因敲除的稳定细胞株,为进一步研究TrxR1在相关疾病的发生机制和治疗中的作用奠定了基础。     

固定化青霉素酰化酶的研究

将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键连接到醋酸纤维素载体上,制成的固定化青霉素酰化酶的表观活力达2000 u／g左右(PDAB法)。水解lO％(w／v)的青霉素G钾盐落液,使用30批,保留活力70％以上。6-氨基青毒烷酸(6-APA)总收率平均达88．37％。固定化青霉素酰化酶水解青霉素G的最适pH为9．95,最适温度为55℃,表观米氏常数为1.093×10-2mol／L,在pH 5．8-10．7,温度45℃以下酶的活力稳定。     

黏土矿物中重金属离子的吸附规律及竞争吸附

采用等温吸附法,研究了重金属铜、铅、镉、镍在膨润土中的吸附特征,发现膨润土对铜、铅的吸附明显强于镉、镍,吸附强度大小顺序为Pb2 >Cu2 >Ni2 >Cd2 。Langmuir和Freundlich方程对这4种金属离子等温吸附的拟合均呈极显著关系。Pb2 、Cd2 、Ni2 分别与Cu2 的双组分竞争吸附表明,黏土矿物对4种离子具有"选择性吸附"。在Pb2 、Ni2 、Cd2 的存在条件下,黏土矿物对Cu2 的吸附产生不同程度的下降;100mg/LCu2 对Pb2 的影响不大,但可完全抑制Ni2 、Cd2 的吸附。建立了IAS和LCA模型来预测Pb2 与Cu2 的双组分竞争吸附,并对LCA模型进行修正,提出了更符合实际情况的竞争吸附模型。文章最后用LCA修正模型对Pb2 与Cu2 的双组分竞争吸附进行了模拟。     

四川卧龙三江保护区珙桐群落边缘效应的研究

通过对珙桐(Davidia involucrata)群落中心及边缘的调查研究,采用Margalef丰富度指数、Simpson物种多样性指数、Shannon-Weiner物种多样性指数、Pielou均匀度指数等多样性指数及物种数个体数分析了群落乔木层、灌木层、草本层及总体的物种多样性。得出以下结果:样地1,从几个指标看除Simpson指数中心<南边缘<北边缘外,其余都各指标均是南边缘<北边缘<中心。样地2,珙桐群落多样性变化,从计算的几个多样性指数看物种丰富度和均匀度的变化趋势相同,都是东边缘<中心<南边缘。而物种的多样性指数是东边缘<南边缘<中心。南边缘在各个指数上都比东边缘高。     

大白鼠年龄变化的形态学观察

年龄变化是生物学领域中的一个重大问题,它广泛地引起人们的关心和注意。年龄的形态学指标则是防治衰老,寻找衰老机制不可缺少的环节,以往在国内外也曾做过相当的工作,但终由于取材不一,实验条件有所差异,对于全面概括衰老过程,总结年龄变化规律存在一定困难,而且既有资料比较零星,为此我们决定以大白鼠作为实验对象,分别在内分泌腺——甲状腺、     

miR-939-5p对糖尿病视性网膜病变和视网膜微血管内皮细胞的调控作用

摘要 目的：探究miR-939-5p对糖尿病性视网膜病变和人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）的调控作用。方法：将miR-939-5p模拟物（miR-939-5p-mimic）或miR-939-5p抑制剂（miR-939-5p-inhibitor）转染到HRMEC中,并将细胞用高糖（HG组,25 mM）或低糖（LG组,5 mM）处理24 h。通过细胞计数试剂盒8（CCK-8）来检测细胞活力,EdU法检测细胞DNA的复制能力,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,使用双荧光素酶试剂盒E2920验证miR-939-5p与NOS2 3''-UTR之间的结合关系。对大鼠腹腔注射65 mg/kg的链脲佐菌素（STZ）诱导DR模型,通过RT-qPCR检测miR-939-5p水平,Western Blot检测诱导型一氧化氮合酶（NOS2）水平,苏木精伊红（HE）染色检查大鼠视网膜形态,免疫组织化学染色检测视网膜Claudin-5和Occludin的表达,伊文思蓝染色检测大鼠血视网膜屏障（BRB）通透性,ELISA法检测大鼠房水中白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平。结果：与LG组的HRMEC相比,HG组的miR-939-5p显著降低,而NOS2蛋白水平显著升高（P<0.05）。荧光素酶活性测定显示,与NC-mimic组相比,miR-939-5p-mimic与pGL3-NOS2-WT共转染组的荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。与HG+NC-mimic组相比,HG+miR-939-5p-mimic组的miR-939-5p水平和细胞活力显著升高,而NOS2蛋白水平和细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。与DR组相比,miR-939-5p-Agomir组大鼠视网膜组织病变减轻,Claudin-5和Occludin的表达水平明显升高,伊文思蓝浓度显著降低（P<0.05）;与DR组相比,miR-939-5p-Agomir组大鼠房水中IL-1β和TNF-α的水平均显著降低（P<0.05）。结论：在高糖培养的HRMEC中和DR大鼠视网膜中,miR-939-5p为低表达模式,NOS2为高表达模式。上调miR-939-5p通过靶向抑制NOS2对DR大鼠视网膜和HRMEC提供保护作用。     

转基因抗虫作物对捕食性瓢虫的安全性研究进展

转基因抗虫作物的商业化种植带来了显著的经济、生态和社会效益,对转基因抗虫作物的安全性评价也一直是国内外学者研究的热点。对生物非靶标效应的研究是转基因抗虫作物安全性评价的重要组成部分,农田天敌类生物是其中的重点内容之一。瓢虫是农田生态系统重要的捕食性天敌,评价其在转基因抗虫作物田间是否能通过捕食猎物或取食花粉而接触到杀虫蛋白并富集于体内,进而对自身产生一定的非靶标效应,这对捕食性瓢虫的安全性研究具有重要的意义。本文从捕食性天敌瓢虫的生命表参数、行为功能参数、田间群落参数及体内微环境指标等方面综述了转基因抗虫作物对瓢虫的安全性研究进展,并对后期转基因抗虫作物对田间捕食性天敌的研究方向提出了建议,以期为转基因抗虫作物的环境安全性研究提供理论指导和为进一步完善转基因抗虫作物对瓢虫安全性评价的技术体系提供系统的数据资料。     

同域分布的几种斧蛤的细胞耐热性与生境温度的关系

多细胞变温动物对高温的适应性,是通过机体和细胞的反应来实现的。整体动物对环境增温的适应,体现在动物日间或季节的活动变化,向最适宜环境迁移的现象,和生物周期性变化等。当某些动物不能避免环境温度变化的影响时,它们就在机体耐热性方面反应出改变。     

基于功能性状评价5种植物对热带珊瑚岛环境的适应性

植被新建是保护和改善热带珊瑚岛生态系统的关键环节,热带珊瑚岛极端干旱生境是影响植物存活和定居的主要限制因子之一,因此选取适生植物对热带珊瑚岛植被新建至关重要。通过测定在海南省文昌市苗圃和热带珊瑚岛上的草海桐(Scaevola taccada)、厚藤(Ipomoea pescaprae)、木麻黄(Casuarina equisetifolia)、花生(Arachis hypogaea)、椰子(Cocos nucifera)5种植物的光合/水力相关功能性状,探讨植物对热带珊瑚岛生境的适应性。研究发现:与对照(文昌苗圃)相比,热带珊瑚岛上的草海桐、厚藤、木麻黄最大光合速率(A_(max))均显著升高;除椰子外,其余4种植物的比叶面积(SLA)降低,长期水分利用效率升高(其中木麻黄和花生升高显著);5种植物的叶片碳含量(LC)均有不同程度降低。此外,厚藤、木麻黄、椰子的叶片导水率(K_(leaf))显著升高;厚藤和花生的叶片膨压丧失点(Ψ_(tlp))显著降低;厚藤和木麻黄的气孔导度(g_s)显著升高。研究结果表明草海桐、椰子、花生主要通过非气孔调节方式(提高K_(leaf),降低Ψ_(tlp)、SLA等)适应热带珊瑚岛干旱环境;而厚藤和木麻黄同时通过气孔调节(降低g_s)及非气孔调节(提高K_(leaf),降低Ψ_(tlp)、SLA等)两种方式促进植物碳同化和水分利用。综上所述,草海桐、厚藤、木麻黄具有更高的光合能力和水分利用效率,能有效协调碳同化和水分利用,表现出良好的适应能力,适合用于热带珊瑚岛的植被新建。