金黄色葡萄球菌CHIPS基因克隆及原核表达

趋化抑制蛋白(Chemotaxis Inhibitory Protein ofStaphylococcus aureus,CHIPS)是由金黄色葡萄球菌分泌到菌体外的一种蛋白。在感染早期,它能特异性地与中性粒细胞和单核细胞上的C5a受体(C5aR)和fMLP受体(FPR)结合,从而阻止中性粒细胞和单核细胞对C5a和fMLP的结合作用,导致对病原吞噬作用的延迟。人们可以利用CHIPS对C5a-C5aR的阻止作用来研制治疗由C5a诱发的炎症性疾病的药物。将CHIPS作为免疫原防治疾病也将成为新的研究课题。实验成功构建了CHIPS蛋白的原核表达系统,为CHIPS免疫原性研究及蛋白的其他功能研究奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌重组GapC蛋白的GAPDH活性及免疫原性分析

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表面GapC蛋白的GAPDH活性、免疫原性及免疫保护作用, 应用PCR方法扩增出S. aureus的gapC基因, 插入到pQE-30载体相应位点, 构建重组质粒pQE/gapC。将其导入宿主菌E.coli M15(pREP4)后, IPTG诱导表达。重组蛋白纯化后进行GAPDH活性检测, 并与灭活全菌体分别免疫健康家兔。然后, 应用ELISA方法检测血清中IgG抗体水平及IFN-g、IL-4细胞因子浓度, 并用1.0×108CFU/mL S. aureus菌株Wood46对免疫家兔攻毒。SDS-PAGE结果显示, GapC蛋白在E. coli M15(pREP4)中获得表达; 经GAPDH活性检测及Western Blot检测, 重组蛋白具有较高的GAPDH活性和抗原特异性; 经ELISA检测, GapC蛋白及全菌体组兔血清中IgG抗体水平迅速升高, 并在加强免疫后第28天达到最高(1:64 000), 加强免疫后第14 d, 血清中细胞因子IFN-g和IL-4浓度与对照组相比, 显著升高(P<0.05), 而全菌体免疫组升高不明显(P>0.05); 攻毒结果为蛋白免疫组家兔获得一定的免疫保护(4/5)。以上结果表明, 表达的重组GapC蛋白具有GAPDH活性、较好的免疫原性及免疫保护力, 可作为深入研究S. aureus基因工程疫苗的良好靶向。     

流式细胞仪原理及其在奶牛性别控制上的应用

流式细胞仪分离得到的定性奶牛精子,借助人工授精技术或其他相关技术已经生产出许多预知性别的后代奶牛。流式细胞仪分离精子的原理是基于携带有X或Y性染色体精子的DNA含量不同。高性能的流式细胞仪可以达到每小时分离1.5～2×108个精子,并且准确率可达到90%。该项技术的应用使得奶牛的人工授精和低温保存技术更为便利,并且该项技术也可以用于其他养殖动物X、Y精子的分离。     

过氧化物酶V在顺铂诱导HepG2肝癌细胞凋亡过程中的调控作用

过氧化物酶V(peroxiredoxin V, Prx V)是过氧化物酶家族(peroxiredoxins, Prxs)中的一员,具有清除细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)的功能。该文主要阐明了Prx V在顺铂(cisplatin, CDDP)诱导Hep G2人肝癌细胞凋亡过程中的调控作用。该研究利用顺铂处理Hep G2肝癌细胞,通过荧光显微照相、流式细胞术、蛋白质免疫印迹分析等方法检测细胞内活性氧(ROS)水平、细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白水平。研究结果表明,顺铂可引起细胞内的ROS水平升高导致细胞凋亡,同时造成细胞内Prx V蛋白质表达水平下降。利用慢病毒载体过量表达Prx V基因后,顺铂诱导的Prx V过量表达型HepG2细胞凋亡率明显低于Mock组,同时促凋亡蛋白cleavage-Caspase-3、Bad、cleavage-PARP表达水平也明显被下调,说明Prx V在顺铂诱导HepG2细胞凋亡过程中具有一定的抑制作用。该研究初步探究了Prx V在顺铂诱导的HepG2肝癌细胞凋亡过程中的调控作用,为肝癌的治疗研究提供了新的思路和治疗靶点。     

Peroxiredoxin V保护HT22小鼠海马神经细胞抵抗NO诱导的细胞凋亡

Peroxiredoxin V(Prx V)是过氧化物酶peroxiredoxins家族中的一员,在神经细胞中含量丰富,具有通过清除细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和过氧亚硝酸盐抑制氧化应激诱导的细胞凋亡的作用。过量的一氧化氮(nitric oxide,NO)具有较强的神经毒性,可引起小胶质细胞炎性反应,诱导神经细胞凋亡从而引发神经退行性疾病,而且可诱导神经小胶质细胞Prx V的表达,参与小胶质细胞的活性调控过程。但是,NO诱导的海马神经细胞凋亡过程中Prx V的作用尚不清楚。该研究利用硝普化钠(sodium nitroprusside dihydrate,SNP)作为NO供体,检测了NO诱导的HT22小鼠海马神经细胞的凋亡及对Prx V蛋白表达的影响。结果显示,SNP诱导的HT22细胞凋亡呈现时间、浓度依赖性;并特异性地抑制了Prx V的表达,致使细胞内ROS水平升高,激活线粒体依赖的经典凋亡途径,导致HT22细胞的凋亡。该研究结果揭示,NO通过抑制细胞内Prx V的表达导致细胞内ROS水平升高,最终诱导HT22细胞发生凋亡的机制,为保护NO诱导的神经细胞凋亡提供了新的理论依据。     

金黄色葡萄球菌凝集因子A的免疫原性

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)凝集因子A(ClfA)免疫原性及免疫保护作用,应用PCR方法扩增出金黄色葡萄球菌Newman、Wood46和HLJ23-1株的clfa基因并进行序列分析,再将Newman株的clfa基因插入到pQE-30载体上,导入宿主菌Escherichia coli M15(pREP4)并诱导表达和纯化ClfA重组蛋白。用纯化的ClfA免疫小鼠,检测血清中抗体和细胞因子水平,首次免疫后35 d时用金黄色葡萄球菌Wood46、HLJ23-1、Newman株对小鼠攻毒。结果发现:clfa基因序列高度保守;ClfA重组蛋白在E.coli M15中获得表达;在首次免疫后35 d时血清抗体效价和细胞因子浓度与对照组相比,均显著升高(P<0.05);攻毒结果为蛋白免疫组小鼠获得一定的免疫保护。由此表明,ClfA重组蛋白有较好的免疫原性和免疫保护力。     

致病性弧菌主要毒力相关因子的研究进展

弧菌(Vibrio)是一种革兰氏阴性短杆菌,其广泛分布于自然界,以水中最多.弧菌是引起人类、水生动物细菌性疾病的重要病原之一.弧菌的致病性与各个毒力基因的协同作用密切相关.弧菌的毒力因子主要可分为粘附素、内毒素、外毒素等.本文主要对致病性较强的毒力因子粘附素和外毒素进行阐述,以期为弧菌致病机理的研究及弧菌病的防治提供参考和借鉴.     

联合使用低剂量环磷酰胺有效增强热休克蛋白gp96免疫佐剂功能

前期研究发现热休克蛋白gp96作为分子伴侣,能特异结合乙肝病毒(HBV)表位肽,并将结合的多肽交叉呈递给MHCⅠ类分子,从而激活病毒特异性CD8+ T细胞(CTL).在此基础上,研究BALB/c小鼠模型联合低剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对热休克蛋白gp96免疫佐剂功能的影响.以gp96或其N端片段(N355)与H-2Kd限制的乙肝病毒核心蛋白表位HBcAg87-95作为佐剂联合低剂量CTX免疫BALB/c小鼠.联合使用低剂量CTX的试验组CD8+T细胞、IFN-γ+CD8+T细胞、乙肝抗原特异T细胞比例显著高于未使用CTX的对照组(P＜0.05),且联合使用CTX的试验组CD4+CD25+调节性T细胞(T Regulatory Cells ,Treg)比例显著低于单独使用gp96和N355试验组(P＜0.05),说明低剂量的CTX能特异性抑制Treg从而导致T细胞的增加.以上研究表明联合使用低剂量的环磷酰胺能有效增强gp96免疫佐剂功能,这为进一步优化gp96佐剂疫苗的使用提供了依据.     

从表型到功能--p38α基因敲除小鼠的表型分析新进展

基因敲除技术的广泛应用,极大地推动了后基因组时代对于基因功能研究的进程.近年来,对于有丝分裂原激活的蛋白激酶家族成员之一--p38t的基因敲除小鼠的研究,在过滤"噪音",真实、清晰地揭示敲除基因的体内功能等方面极具典型意义.对于其有关表型分析最新研究进展的回顾说明:在精心设计及其表型的周密分析前提下,基因敲除技术的合理运用,对于全面阐释重要信号分子的体内功能,推动功能基因的研究进程具有极其重要的意义.     

在fMLP刺激的HL-60细胞中PI3-K介导的肌动蛋白聚合

趋化肽fMLP能够诱导中性粒细胞粘附、游走和吞噬.为了澄清这种趋化反应的发生机理,将HL-60细胞诱导分化为中性粒细胞样细胞,然后利用激酶特异性抑制剂研究了在fMLP刺激下细胞内PI3-K、p38和ERK激酶在肌动蛋白聚合中的作用.结果0.1 μmol/L的PI3-K抑制物Wortmannin抑制fMLP诱导的肌动蛋白聚合;而50 μmol/L的p38激酶抑制物SB203580和50 μmol/L的ERK激酶抑制物PD098059对fMLP诱导的肌动蛋白聚合没有影响, 但p38和ERK在不同程度上受到PI3-K的调节.这说明PI3-K介导的肌动蛋白聚合信号传导途径不同于PI3-K介导的p38和ERK激活途径.