基于转录组数据的意大利蝗微卫星位点分析与分子标记开发

【目的】意大利蝗Calliptamus italicus (L.)是新疆荒漠半荒漠草原重要害虫。本研究利用已获得的意大利蝗转录组数据,鉴定其微卫星位点。【方法】使用MISA筛选SSR位点,利用Primer Premier 5设计引物,通过PCR扩增对引物进行验证。【结果】在意大利蝗转录组数据库中,共检测出156500个SSR位点,分布在126369条unigene中。其中,单核苷酸重复为60.88%,二核苷酸重复为23.58%,三核苷酸重复和四核苷酸重复分别为12.99%和2.04%。单核苷酸重复主要为A/T(44.38%),二核苷酸重复主要为AC/GT(12.99%)和AG/CT(8.05%)。基于筛选的SSR位点设计引物,随机挑选24对引物,对10个不同地理种群意大利蝗成虫DNA样品进行PCR扩增,共有6对引物扩增成功。【结论】本研究利用转录组数据发掘意大利蝗SSR位点,为意大利蝗分子标记、种群遗传及功能基因等研究奠定基础。     

短时高温暴露下东亚飞蝗雌虫血淋巴蛋白表达分析及质谱鉴定

为研究短时高温对东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis Meyen血淋巴蛋白的影响,采用Bradford法、SDSPAGE电泳和质谱等方法,对东亚飞蝗雌虫血淋巴样品进行检测。结果表明:短时高温对血淋巴蛋白含量有显著影响(P0.01),36℃-42℃范围内,随温度升高,血淋巴蛋白浓度亦升高,其中39℃、42℃处理组与对照组差异显著(P0.01);短时高温对血淋巴蛋白种类存在一定影响,对照组雌虫血淋巴中存在11种蛋白,高温处理后,4种蛋白含量逐渐增加,6种蛋白含量没有明显变化,1种蛋白消失;经质谱检测,鉴定了5种蛋白,分别为载脂蛋白前体、酚氧化酶原、2个储存蛋白和19 kDa血淋巴蛋白,另外6条蛋白未被鉴定。推测载脂蛋白前体、酚氧化酶原、储存蛋白在东亚飞蝗应对高温胁迫过程中发挥重要作用。     

周期蛋白D1参与香烟烟雾提取物促进人肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移

本文旨在探讨周期蛋白D1(cyclin D1)在香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)所致人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)增殖和迁移中的作用。构建反义cyclin D1基因真核表达载体(pIRES2-EGFP-ascyclin D1),采用脂质体介导基因转染法将空载体(pIRES2-EGFP)和pIRES2-EGFP-ascyclin D1导入正常HPASMCs后,分别进行CSE干预。细胞随机分为6组:对照组、空载体组、反义cyclin D1组、5%CSE组、空载体+5%CSE组、反义cyclin D1+5%CSE组。用实时荧光RT-PCR和Western blot法分别检测cyclin D1mRNA和蛋白的表达,采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、增殖细胞核抗原(PCNA)染色法测定细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移能力。结果显示,反义cyclin D1基因真核表达载体pIRES2-EGFP-ascyclin D1成功构建,并成功转染入HPASMCs,转染后HPASMCs中cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平较对照组均显著下降(P0.05)。与对照组比较,5%CSE组cyclinD1的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P0.05),细胞增殖和迁移能力显著增强(P0.05)。与5%CSE组比较,反义cyclinD1+5%CSE组cyclin D1mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P0.05),细胞增殖和迁移能力显著降低(P0.05)。上述结果提示,CSE可通过上调cyclin D1表达促进HPASMCs增殖和迁移,反义cyclin D1基因真核表达载体可抑制CSE介导的HPASMCs增殖和迁移,提示cyclin D1在CSE所致HPASMCs增殖和迁移中发挥重要调控作用。     

冻干高活力纳豆芽胞杆菌菌粉保护剂的筛选和优化

【目的】对冻干高活力纳豆芽胞杆菌菌粉保护剂进行筛选和优化研究,提高菌粉活菌存活率。【方法】采用单因素实验和正交实验设计,通过测定活菌存活率,筛选出最佳保护剂的配方;并研究采用优化后冻干保护剂制备的菌粉在20°C、4°C、25°C下的保存稳定性。【结果】纳豆芽胞杆菌的有效保护剂是:脱脂乳粉、甘露醇、L-抗坏血酸钠。最佳冷冻干燥保护剂配方是:脱脂乳粉10%+甘露醇4%+L-抗坏血酸钠1%,存活率达到91.63%。菌粉在20°C、4°C、25°C下保存12个月后,存活率分别为:88.79%、70.16%和10.52%,说明菌粉在20°C和4°C下保存稳定性较好,25°C下稳定性比较差。【结论】对纳豆芽胞杆菌冻干菌粉保护剂的优化,对纳豆芽胞杆菌的应用、活菌产品的质量稳定及新产品的研发均有一定的指导意义。     

纳豆芽胞杆菌对AA肉鸡生产性能以及免疫功能的影响

目的探讨纳豆芽胞杆菌作为饲料添加剂对AA肉鸡生产性能和免疫功能的影响。方法将300只1日龄的AA健康肉鸡,随机分为5组,对照组饲喂基础日粮,实验组在基础日粮中分别添加50、100、150和200mg/kg纳豆芽胞杆菌(处理组Ⅰ~Ⅳ),检测其对AA肉鸡增重、饲料转化率、新城疫疫苗免疫后的抗体水平和免疫器官指数的影响。结果在21d时,处理4个组肉鸡的体重分别较对照组高0.23%、6.16%、8.29%和7.82%,其中处理组Ⅱ、Ⅲ与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);处理组Ⅰ、Ⅳ与对照组相比差异无统计学意义(P0.05);在7~28d时处理4个组肉鸡的饲料转化率均稍高于对照组,但差异无统计学意义(P0.05);当21d时,处理组Ⅱ、Ⅲ的效价水平与对照组、处理组Ⅰ及Ⅳ相比差异有统计学意义(P0.05)。处理组Ⅰ~Ⅳ的胸腺、脾脏以及法氏囊三项指数均显著优于对照组,尤其是处理组Ⅱ和Ⅲ的免疫器官指数提升最为显著(P0.05)。结论在AA肉鸡基础日粮中添加100、150mg/kg的纳豆芽胞杆菌对于其生产性能的改善和免疫功能的提高有显著效果。     

Asia I口蹄疫vp2蛋白单克隆抗体的制备及单抗竞争ELISA方法的建立

制备Asia I口蹄疫病毒vp2单克隆抗体(mAb)并建立了单抗竞争ELISA方法。用纯化的Asia I型口蹄疫病毒vp2重组蛋白免疫BALB/c小鼠, 将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合, 采用间接ELISA和有限稀释法筛选杂交瘤细胞。分别用ELISA、Western blotting检测mAb腹水的效价及其特异性。筛选到杂交瘤细胞2株, 腹水效价均在100×29以上; 以纯化后的Asia I型口蹄疫病毒vp2重组蛋白作为抗原, 利用Asia I型口蹄疫病毒vp2单抗酶标物建立了竞争ELISA方法用来检测Asia I型口蹄疫抗体。临床应用表明, 该方法与UBI公司的口蹄疫全病毒抗体检测试剂盒总符合率达89.0%, 和荷兰赛迪公司的口蹄疫病毒LPB-ELISA抗体检测试剂盒总符合率达86.5%。     

干扰素在中枢神经系统退行性疾病中的作用

干扰素(Interferons,IFNs)在神经系统退行性疾病中作用机制复杂。IFNs受体在神经元与胶质细胞中广泛表达,提示IFNs在神经系统中发挥重要作用。然而,IFNs在中枢神经系统中的功能,特别是在相关疾病中的作用机制仍不清楚。近年来,越来越多的研究关注IFNs在中枢神经系统中的作用以及对神经元和胶质细胞的调控机制。本文主要就IFNs的结构、功能和疾病的关系进行综述。     

引进红树拉关木和两种乡土红树离子平衡及光合作用的比较研究

为了比较引进红树与乡土红树的耐盐性差异,该研究以引进红树植物拉关木(Laguncularia racemosa)和乡土红树植物木榄(Bruguiera gymnorrhiza)与秋茄(Kandelia obovata)幼苗作为实验材料,分析其在不同Na Cl浓度(100、200、300、400 mmol·L~(-1))处理下各器官离子浓度(Na~+、Cl~–、K~+、Ca~(2+)和Mg~(2+))和叶光合作用的变化。结果表明:(1)高盐胁迫(400 mmol·L~(-1)Na Cl,28 d)处理下,拉关木根系Na~+增幅较小,秋茄根、叶Cl~–含量增幅均高于木榄和拉关木,说明拉关木在较高的盐浓度时能限制根系对Na~+、Cl~–的吸收,减少向地上部分运输。(2)高盐胁迫均增加3种红树根、叶的K~+浓度(木榄叶K~+略有降低,差异不显著),表明3种红树均可吸收K~+,来限制Na~+对植物的伤害;同时,降低3种红树根Ca~(2+)浓度,但拉关木根Ca~(2+)下降幅度小于秋茄和木榄,说明拉关木具有更强的防止Ca~(2+)流失的能力。(3)拉关木根维持Na~+/K~+、Na~+/Ca~(2+)平衡的能力强于秋茄和木榄。(4)高盐胁迫引起秋茄与木榄光合速率均降低,而拉关木光合速率却增加了54.1%。综上所述,拉关木能限制根系对Na Cl的吸收,有效维持Na~+/K~+、Na~+/Ca~(2+)的平衡,并保持较高的光合速率,这表明拉关木与木榄和秋茄相比具有更高的耐盐性。