锂和三尖杉酯碱对HL—60细胞增殖,分化和c—myc表达的影响

本研究利用细胞培养技术观察了氯化锂和三尖杉酯碱（ＨＴ）对ＨＬ－６０细胞增殖的影响,不同浓度的氯化锂对ＨＬ－６０细胞的集落形成和３Ｈ－ＴｄＲ参入均呈剂量依赖式抑制;三尖杉酯碱亦有类似的作用。在培养体系中加氯化锂和三尖杉酯碱时,对ＨＬ－６０细胞数及集落形成抑制作用与单用二者相比较有明显增加。用ＮＢＴ还原试验,氯化锂和三尖杉酯碱均促进ＨＬ－６０细胞的分化,小剂量氯化锂还能加强三尖杉酯碱对ＨＬ－６０细胞诱导分化作用。从氯化锂和三尖杉酯碱处理的ＨＬ－６０细胞中提取总ＲＮＡ,应用ＲＴ／ＰＣＲ检测ｃ－ｍｙｃ的表达,结果表明经氯化锂和三尖杉酯碱处理的ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ表达均降低,与未处理的ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ比较,说明氯化锂和三尖杉酯碱均能抑制ｃ－ｍｙｃ的表达,提示ｃ－ｍｙｃ很可能在白血病细胞增殖、分化中起调控作用。     

Analysis of Tax-Expressing Cell Lines Generated from HTLV-ITax-Transgenic Mice: Correlation between c-mycOverexpression and Neoplastic Potential

Human T-cell leukemia/lymphotropic virus type I (HTLV-I) infection causes a variety of human diseases, including adult T-cell leukemia/lymphoma. The viral transactivator Tax has been implicated as a key factor in the HTLV-I-induced transformation pathway. To investigate the components of this pathway, we derived fibroblast-like cell lines, designated T6 and T9, from tail biopsies oftax-transgenic C57BL/6 mice that do not develop tumors. Phenotypic characterization of T6 and T9 cells and T6-derived subclones revealed that they differ in their abilities to form fociin vitroand tumorsin vivo.The observed differences in the levels of Tax expression did not correlate with their degree of neoplastic potential. However, a control cell line derived from a nontransgenic C57BL/6 mouse did not form fociin vitroor tumorsin vivo,indicating that Tax was required for the transformation process. Results of Northern analyses showed that the T9 cells and the highly malignant derivatives of T6 cells expressed elevated levels of c-mycmRNA. These findings suggest that progression of thetax-transgenic cells toward a more malignant phenotype might involve c-mycderegulation.     

c-myc表达对顺铂诱导人胶质瘤细胞系BT_(325)凋亡的影响

研究 c- m yc在化疗药物顺铂诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。在原有已构建好 c- myc反义表达载体 pc DNA3- MYC并成功转染 BT32 5 细胞的基础上 ,用顺铂诱导细胞凋亡。采用 TUNEL技术并从光镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜水平观察 BT32 5 细胞凋亡的形态学特征 ;流式细胞仪检测实验组 (即 pc DNA3- MYC转染的细胞 )及对照组 (包括未转染或仅转染空载体 pc DNA 3的细胞 )凋亡率的异同。结果显示 :与转染空载体 pc DNA3及未转染组的细胞相比 ,在转染 pc DNA 3-MYC的 BT32 5 细胞中 ,顺铂诱导的细胞凋亡作用明显受阻 ,结果表明 :肿瘤细胞内异常表达的 c- myc在顺铂诱导肿瘤细胞凋亡的过程中有重要作用。     

新型真核表达质粒pcDNA6/myc-his-EGFP B 的构建及其在重组基因表达中的应用

增强型绿色荧光蛋白（EGFP, enhanced green fluorescent protein）、myc抗原和6×His已在众多真核表达载体中用作重组蛋白的表达标记,EGFP能发出的绿色荧光,myc抗原能用相应的抗体检测,6×His能被相应的树脂特异吸附。但目前为止,没有一个质粒表达载体能够同时整合三者的功能。本研究构建了一个能够同时整合EGFP、myc抗原和6×His功能的新型真核质粒表达载体,我们将其命名为pcDNA6/myc-his-EGFP B。值得注意的是,为确保目的基因与EGFP基因融合表达后,融合表达产物各组成部分能够保持原有的生物活性,我们运用LINKER程序在EGFP基因的5'端设计了一段编码八肽的连接DNA序列。将一段含有人白细胞介素2（IL-2, human interleukin 2）信号肽编码序列的基因亚克隆进pcDNA6/myc-his-EGFP B的多克隆位点中,使之与EGFP、myc抗原和6×His融合表达,构建成质粒pMHES。用pcDNA6/myc-his-EGFP B和pMHES转染2.2.15细胞,48 h后成功观察到绿色荧光;用pcDNA6/myc-his-EGFP B尾静脉注射Balb/c小鼠,8 h后在小鼠肝脏冰冻切片中同样观察到绿色荧光。用同源建模软件Modeller8V2模拟IL-2与EGFP、myc抗原和6×His融合表达产物的三维结构,结果表明：IL-2、EGFP、myc和6×His各部分互不干扰,连接八肽具有一定的柔性。以上结果表明pcDNA6/myc-his-EGFP B可望作为外源基因在哺乳动物细胞中表达研究和基因治疗的新型载体。     

Smad7基因的克隆、表达及对c-myc基因的调控

Smad7是TGr-β家族信号转导通路的抑制分子,可反馈调节TGF-β／Smads信号转导通路,从功能推测,Smad7表达紊乱,可影响细胞对TGF-β的应答,从而促进细胞的恶性化进展,为了深入探讨Smad7基因功能,通过设计引物,用Touchdown巢式．PCR法从人胎脑文库中扩增Smad7基因编码区全长,回收产物,克隆并构建真核表达载体,同融合有报告基因的c-myc顺式增强子元件共转染BEP2D细胞,结果表明：TGF—p可抑制c．myc报告基因的活性,Smad7基因可正调控c．myc报告基因的表达,并拮抗TGF．B对该基因的抑制作用．由此得出结论：Smad7基因通过桔抗TGF．B来调控c．myc基因、