当归饮片蛋白质的提取与活性分析

当归是传统的补血中药,其所含的多糖与小分子已有大量的研究,然而当归中的蛋白质组成与功效仍无人知晓。该研究通过0.05 mol·L-1 Tris-HCl( pH＝8.0)缓冲液浸提和组织匀浆得到当归饮片粗提液,结合硫酸铵沉淀和透析法去除粗提液中的多糖及还原糖等小分子成分,得到当归饮片总蛋白质,并首次对其组成和生物活性进行了研究。结果表明：当归饮片蛋白含量较高,分子量为17.5~90.7 kDa,其中17.5 kDa的蛋白含量最高,达47％。饮片蛋白在pH 5~11范围内较为稳定,pH为3时,仅余少量17.5 kDa的蛋白。当归饮片蛋白质中至少有3种蛋白在80℃内稳定存在,其中热稳定性最好的是17.5 kDa的蛋白,在热处理温度达到100℃时,仍然稳定存在,但随着处理时间的延长,该蛋白有部分单体发生了交联反应。当归饮片蛋白质具有清除DPPH自由基的能力,且该能力随着热处理温度及热处理时间的增加而增加,pH处理会影响该能力,pH为5.0时,清除能力最高,5.0两侧清除能力均下降。此外,当归饮片蛋白质对细胞有很强的选择性,表现为对正常肝细胞L-02有显著的增殖作用(1.0~4.0 mg·mL-1,P<0.01),对白血病细胞K562则表现出显著的抑制作用(0.5~1.5 mg·mL-1,P<0.01),当归饮片蛋白浓度为1.0 mg·mL-1时,可使L-02细胞增值率达550％(P<0.01),而K562细胞的抑制率达18.3％( P<0.01)。综上所述,当归饮片饮片蛋白具有重要的生物活性,可望从中开发出具有保肝作用的药物蛋白。     

Decoction of heat-clearing,detoxifying and blood stasis removing relieves acute soft tissue injury via modulating miR-26b-5p/COX2 axis to inhibit inflammation

Traditional Chinese medicine (TCM), such as Huanglian-Jie-Du-Tang, a heat-clearing and detoxifying decoction is beneficial for alleviation of inflammation-related diseases. The objective of the present study is to uncover the effect and mechanism of heat-clearing, detoxifying and blood stasis removing decoction (HDBD) on the treatment of acute soft tissue injury (STI) which is characterized with excessive inflammatory cascade at the onset. Male Sprague–Dawley (SD) rats with hammer beating served as the in vivo models of acute STI. Hematoxylin–Eosin (HE) staining was used for histopathology assessment. The levels of inflammatory factors, including prostaglandin E2 (PGE2), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin (IL)-1t and IL-6 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Human dermal microvascular endothelium cell line HMEC-1 and rat vascular endothelium cell line RAOEC were used to explore the mechanism in vitro. Luciferase gene reporter assay was applied to determine the relationship between miR-26b-5p and Cyclo-oxygenase 2 (COX2). The results showed that HDBD intervention significantly reduced the temperature difference between the healthy side and affected side of rats with hammer beating, together with the decreased levels of COX2, PGE2, TNF-α, IL-6 and IL-1β, and the increased level of miR-26b-5p. In mechanism, miR-26b-5p targeted COX2 and decreased its expression, leading to significant decreases in the levels of PGE2, TNF-α and IL-6 in RAOEC and HMEC-1 cells. In addition, miR-26b-5p inhibition impaired the effects of HDBD on the suppression of PGE2, TNF-α, IL-6 and IL-1β in vitro. In conclusion, the present study revealed that HDBD relieved acute STI via modulating miR-26b-5p/COX2 axis to inhibit inflammation.     

黄连解毒汤对快速老化小鼠海马基因表达的影响

目的：研究黄连解毒汤（HL）对快速老化小鼠亚系SAMP8海马差异表达基因的影响,揭示HL改善认知功能障碍的分子机制。方法：应用快速老化小鼠亚系SAMP8和SAMR1海马差异表达cDNA芯片,比较了SAMP8和SAMR1、石杉碱甲处理的SAMP8和SAMP8对照,以及HL处理的SAMP8和SAMP8对照的基因表达谱,并对HL的药物反应基因进行了比较;采用实时荧光定量PCR技术对芯片结果进行了验证。结果：给予SAMP8HL后,对SAMP8海马基因表达具有明显的调节作用。差异表达基因包括信号转导基因Dusp12、Rps6ka1、Penk1、Nope,Leng8,蛋白质代谢相关基因Ttc3、Amfr、Prr6、Ube2以,核酸代谢基因Fhit、Itm2c、Cstf2t、Ddx3x、Ercc5、Pcgfr6,能量代谢基因Stubl,免疫反应相关基因Clqb,转录调节基因Dlertdl6le、Gcn512、Ssu72,细胞生长相关基因Ngrn、Anln,递质转运相关基因Slc17a7,以及功能未知基因12个。结论：提示HL对于认知功能的改善可能是通过调节信号转导、突触传递、蛋白质和能量代谢、细胞增殖分化等途径发挥作用的;研究中发现的HL作用基因可能是改善学习记忆的潜在靶标。     

黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对白假丝酵母菌黏附作用的影响

目的探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物（ethyl acetateextract of Huanglianjiedu decoction,EAHD）对白假丝酵母菌黏附作用的影响。方法XTT法检测白假丝酵母菌黏附力;平板法计数导管上黏附的白假丝酵母菌CFU;倒置显微镜观察黏附的白假丝酵母菌;qRT—PCR法定量检测黏附相关基因EAP1、HWP1、ALS1、ALS3、MP65的表达。结果312μg/mL EDHA可显著抑制白假丝酵母菌在聚苯乙烯和聚酯导管上的黏附;白假丝酵母菌生长早期在EDHA作用下,菌细胞出芽数均呈现剂量依赖性降低;EDHA作用后,EAP1、HWP1均下调,ALS3、MP65均上调,ALS1几乎未变化。结论EAHD可显著抑制白假丝酵母菌的黏附作用。     

大小承气汤制作大鼠脾虚肝癌模型的比较

目的探索大小承气汤为基础的多因素大鼠脾虚模型和脾虚肝癌模型的制作方法和成模差别。方法采用苦寒泻下、寒湿环境、劳累、隔天禁食的方法制作脾虚大鼠模型,其中苦寒泻下因素采用大承气汤和小承气汤分别干预;Walker256大鼠肝癌细胞经裸鼠皮下增殖后移植入大鼠肝脏,制作肝癌模型。大鼠随机分为正常组、空白肝癌组、大承气汤组、小承气汤组,每组15只3周龄Wistar雄性大鼠,脾虚因素干预30 d后恢复7d制作肝癌模型并观察35 d。实验过程中观察动物脾虚程度、体重变化、成瘤情况、生存时间等。结果大、小承气汤组动物在脾虚造模过程中相对于对照组(P0.01),体重增长受到明显抑制,脾虚造模前20 d大承气汤组动物体重均高于小承气汤组(P0.05),之后二者无差别(P0.05)。大、小承气汤组动物平均脾虚积分高于空白肝癌组,小承气汤组最高(P0.01)。肝癌模型总成瘤率91.1%,空白肝癌组为80%,大、小承气汤组均为93.3%。小承气汤组大鼠平均生存天数小于肝癌组和大承气汤组(P0.01和0.05)。生存分析提示脾虚积分高的肝癌模型和小承气汤组肝癌模型的生存能力明显下降(P0.05)。结论小承气汤在多因素制作脾虚模型过程中致脾虚作用比大承气汤强,脾虚明显是肝癌模型预后不良的重要因素。     

麻黄附子细辛汤配合缪刺法治疗腰椎间盘突出伴坐骨神经痛疗效及对VAS评分、JOA评分及炎症因子的影响

摘要 目的：探讨麻黄附子细辛汤配合缪刺法治疗腰椎间盘突出伴坐骨神经痛疗效及对视觉模拟评分（VAS）评分、日本骨科协会评估治疗分数（JOA）评分及炎症因子的影响。方法：2018年1月到2021年12月选择在本院诊治的腰椎间盘突出伴坐骨神经痛患者86例作为研究对象,据1:1随机分配数字表法把患者分为缪刺组与对照组各43例。对照组给予麻黄附子细辛汤治疗,缪刺组在对照组治疗的基础上给予缪刺治疗,所有患者都治疗观察1个月,在治疗前后进行VAS疼痛评分与JOA腰椎功能评分并分析炎症因子的表达情况。结果：治疗后缪刺组的总有效率为97.7 %,高于对照组的86.0 %（P<0.05）。两组治疗后的VAS评分与JOA评分低于治疗前,缪刺组低于对照组（P<0.05）。两组治疗后的腰屈曲范围高于治疗前,缪刺组高于对照组（P<0.05）。缪刺组治疗期间的腰大肌挛、恶心呕吐、低血压、眩晕等不良反应发生率为4.6 %,低于对照组的30.2 %（P<0.05）。两组治疗后的血清IL-1?琢、IL-6含量低于治疗前,缪刺组低于对照组（P<0.05）。结论：麻黄附子细辛汤配合缪刺法治疗腰椎间盘突出伴坐骨神经痛能降低患者的VAS评分与JOA评分,可减少不良反应的发生,还可抑制炎症因子的表达,提高患者的腰屈曲范围。     

补阳还五汤联合针灸对糖尿病周围神经病变患者血糖代谢、神经传导速度和血液流变学的影响

摘要 目的：探讨补阳还五汤联合针灸对糖尿病周围神经病变（DPN）患者血糖代谢、神经传导速度和血液流变学的影响。方法：选取我院2018年4月-2021年4月期间收治的100例DPN患者,按照双色球法将患者分为对照组（50例,常规西医治疗）和研究组（50例,对照组基础上接受补阳还五汤联合针灸治疗）。均治疗4周,对比两组临床疗效、血糖代谢水平、神经传导速度和血液流变学。结果：治疗后研究组临床总有效率（94.00%）,高于对照组（72.00%）（P<0.05）。治疗后研究组的空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）水平均低于对照组（P<0.05）。治疗后研究组的腓总神经和正中神经感觉神经传导速度（SNCV）、运动神经传导速度（MNCV）均较对照组高（P<0.05）。治疗后研究组的红细胞比积、纤维蛋白原、全血粘度（高切）及全血粘度（低切）水平均低于对照组（P<0.05）。结论：补阳还五汤联合针灸治疗DPN患者疗效显著,有效提高其神经传导速度,改善其血糖代谢和血液流变学。     

加味四君子汤对脾虚胃溃疡大鼠细胞外信号调节激酶信号传递分子的影响

目的探讨加味四君子汤治疗脾虚证的机理。方法运用HE染色显示胃组织结构,运用免疫组织化学方法显示下颌下腺EGF含量的变化,运用免疫印迹法显示胃黏膜ERK2含量的变化。结果经过加味四君子汤治疗后,脾虚胃溃疡大鼠下颌下腺颗粒曲管细胞内EGF阳性反映产物的含量减少,胃黏膜磷酸化的ERK2增加,胃溃疡愈合加快;而自然恢复组上述变化不明显。结论加味四君子汤可能通过影响分裂原激活的蛋白激酶信号传递途径而发挥治疗作用。     

栀子豉汤及拆方对六种人肠道菌的影响

目的研究栀子豉汤及栀子、淡豆豉对6种人肠道菌的影响。方法从特定人的粪便中分离培养肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳杆菌、产气荚膜梭菌和脆弱拟杆菌。分别将高、中、低浓度的栀子、淡豆豉及栀子豉汤药液加入选择性培养基中,以不加药液的培养基作为空白对照,将实验菌分别于厌氧或有氧条件下培养,计数菌落。结果不同浓度的栀子对肠杆菌的抑制率均为100.0%,淡豆豉在20%、50%、70%浓度分别使肠杆菌数量下调100.00%、53.83%和22.11%,而栀子豉汤可使肠杆菌数量维持在一定水平(104～106 CFU/g);两味药单独都表现了对肠球菌较强的抑制作用,而低、中浓度栀子豉汤则使肠球菌保持较稳定的数量;单味药及复方对产气荚膜梭菌和双歧杆菌敏感性较弱;栀子对脆弱拟杆菌抑制作用最强,而淡豆豉和栀子豉汤则可使其数量上调约20.00%;淡豆豉、栀子豉汤和高浓度栀子对乳杆菌非常敏感,低、中浓度栀子对乳杆菌数量仅有轻微下调作用。结论栀子豉汤比单独的栀子和淡豆豉更能维持肠道菌群的相对平衡。