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71.
人白细胞介素-3(humanInterleukin3,hIL-3)是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用PCR方法从人T淋巴细胞cDNA文库中扩增出0.44kb的DNA片段,并克隆入pUC19载体中。经DNA序列测定,确定0.44kb的PCR产物合完整的编码人白细胞介素-3成熟蛋白cDNA序列,并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ATG起始密码。构建的PL启动子控制下的hIL-3cDNA表达质粒,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导,获得hIL-3的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为15kd,约占细菌总蛋白的15%。表达产物经ELISA和Western-blot验证。hIL-3表达产物在细胞内形成包涵体,纯化包涵体,使产物纯度提高到70.8%,产物复性后,能明显促进hIL-3依赖细胞株生长,具有明显的生物活性。产物转移到PVDF膜后进行N端序列分析,N端16个氨基酸正确。 相似文献
72.
73.
丙型肝炎病毒RNA打点杂交检测方法同RT-PCR方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
采用HCV基因组结构区C区cDNA探针和非结构区NS3-4区cDNA探针,建立了用打点杂交(dotblothybridization)检测血清中HCVRNA的方法,同采用HCV基因组5’端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测血清中HCVRNA的方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异地检出血清中HCVRNA,但RT-PCR法敏感性优于RNA打点杂交法。对于无血清学指标的慢性NANB肝炎病人的诊断,可采用这两种方法。这两种方法的敏感性在很大程度上依赖于引物和探针的敏感性,以及RNA提取方法。RT-PCR法适用于诊断病毒血症和复制,打点杂交法适用于研究HCVRNA量的变化,对治疗的评价,以及为实验筛选较高滴度的HCVRNA阳性样本。 相似文献
74.
75.
76.
采用聚合酶链式反应(PCR)技术,对HPV-18序列中引物HP_1、HP_2之间的片段(F)进行扩增,通过两组阴、阳性对照实验证明扩增片段的特异性。用不同Mg浓度的缓冲系统进行PCR反应发现,缓冲系统中Mg浓度高低是影响HPV-18/HP_1、HP_2特异扩增的重要因素,高浓度Mg导致扩增特异性降低。对17例宫颈癌组织DNA进行PCR检测,有9例检出F片段,其检出率是53%,为HPV-18与宫颈癌的相关性提供证据。 相似文献
77.
PCR和生物素探针对HFRSV的检测和分型的探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
分析比较肾综合征出血热病毒(HFRSV)76/118株和R_(22)株的核苷酸序列,根据引物设计原则及检测分型的目的,设计并合成了3对引物。1对引物取于两毒株间的高同源区段,作为共同引物和外引物;另两对引物取于两毒株间的低同源区段,分别作为野鼠型引物、家鼠型引物和内引物。建立了DNA聚合酶链反应(PCR)和NestPCR方法,并用NcstPCR合成了两种型特异的生物素探针。PCR检测76/118、A_9、陈、R_2、R_225个毒株,用外引物时均扩增出1条约300bp的条带;用内引物的野鼠型引物时,除R_(22)株之外,其余4株均扩增出1条约70bp的条带。斑点杂交试验证实了PCR检测分型的准确性。NestPCR和生物素探针斑点杂交试验可以测出1-10bg的目的cDNA。 相似文献
78.
双裂解法提取血清HBV DNA技术的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
为进行PCR实验建立了一种两步裂解血清HBV提取其DNA的方法。该法首先用SDS及蛋白酶消化裂解病毒,随后再进行碱裂解,操作较酚提取法大为简化,而PCR实验进行的两法的灵敏性比较,说明双裂解法至少不低于酚法。 相似文献
79.
用DNA重组法表达丙肝病毒部分NS_4-NS_5基因祁自柏,谷金莲,李河民(中国药品生物制品检定所,北京100050)丙型肝炎病毒(HCV)是一种RNA病毒,为研究其复制机理,制备检测丙肝抗体的诊断试剂,需大量纯化的各种丙肝病毒蛋白,我们在国内首次用D... 相似文献
80.
Takashi Ninomiya Masumi Hirabayashi Junko Sagara Atsushi Yuki 《Molecular reproduction and development》1994,37(3):276-283
Fragments containing 5′ flanking regions of four bovine milk protein genes—alpha lactalbumin (bαLA), alpha S1 casein (bαS1CN), beta casein (bβCN), kappa casein (bkCN)—and mouse whey acidic protein (mWAP) gene were prepared by PCR and ligated to human growth hormone (hGH) gene. These recombinant DNAs were microinjected into rat embryos to produce transgenic rats, and the functions of the 5′ regions to direct secretion of hGH in the milk were tested. Although milk was obtained only in 5 of 19 mWAP/hGH rat lines, more than two-thirds of the rats carrying the other four DNAs produced milk. More than 80% of the lactated rats carrying bαLA/, bβCN/, and mWAP/hGH, and 33% of the laclated bαS1CN/hGH rats secreted detectable amounts of hGH (> 0.05 μg/ml) in the milk. In some rats, the hGH concentrations in the milk were comparable to or more than that of the corresponding milk protein in bovine milk. The ranges of hGH concentrations in the milk of bαLA/, bβCN/, bαS1CN/, and mWAP/hGH rats were 1.13–4,360 μg/ml, 0.11–10,900 μg/ml, 86.8–6,480 μg/ml, and 6.87–151 μg/ml, respectively. HGH was also detected in the sera of these rats, and some abnormalities of growth and reproduction were observed. All but one virgin mWAP/hGH rat secreted up to 0.0722 μg/ml of hGH in the serum, and more than half of them showed abnormal fat accumulations at their abdomen. None of the bαCN/hGH rats secreted detectable amount of hGH into their milk, whereas 8 of the 11 lines secreted hGH into their sera. For the production of hGH in transgenic rat milk, the 5′ region of bαS1CN was shown most suitable, because the bαS1CN/hGH rat secreted > 6,000 μg/ml of hGH into the milk and could be reproduced. © 1994 Wiley-Liss, Inc. 相似文献