华重楼内生菌抗菌肽的分离纯化及其特性

摘要：【目的】华重楼内生菌PCE45具有较强的抗菌活性,本文将对PCE45产生的抗菌物质进行分离纯化和性质分析报道。【方法】PCE45发酵液经硫酸铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG75柱、DE52纤维素柱和SephadexG25凝胶柱纯化分离得到抗菌肽PCP-1。【结果】稳定性测试表明该抗菌肽对蛋白酶不敏感,对高温、强酸、强碱有较好的耐受性,可造成稻瘟病菌菌丝畸形并抑制孢子萌发。抑菌谱表明该抗菌肽对玉米弯胞病菌等真菌和大肠杆菌等细菌有较强的抑菌效果。质谱测得其分子量为1058.3D。氨基酸组成分析表明该     

滇重楼内生真菌Aspergillus fumigatus代谢产物的研究

为研究滇重楼内生真菌Aspergillus fumigatus的代谢产物,采用多种色谱分离技术对其菌丝体和发酵液进行分离纯化,得到31个化合物。根据理化性质及波谱数据,结构分别鉴定为tryprostatin B (1)、tryprostatin A (2)、12,13-dihydroxyfumitre- morgin C (3)、cyclotryprostatin B (4)、14-norpseurotin A (5)、pseurotine F1 (6)、pseurotine F2 (7)、azaspirofuran A (8)、pseurotin D (9)、spirotryprostatin K (10)、6-methoxyspirotryprostatin B (11)、deacetylpyripyropene A (12)、烟曲霉素 (13)、fuma- gillene A (14)、5,9-dihydroxy-β-trans-bergamotene (15)、对羟基苯乙酸 (16)、demethoxyfumitremorgin C (17)、fumiquinazoline J (18)、烟曲霉酸 (19)、麦角甾醇 (20)、过氧麦角甾醇 (21)、4,4-dimethyl-5α-ergosta-8,24(28)-dien-3β-ol (22)、羊毛甾醇 (23)、亚油酸 (24)、油酸 (25) 、烟曲霉毒素C (26)、烟曲霉毒素B (27)、震颤真菌毒素 (28)、pseurotin A (29)、fumiquinazoline C (30)和questin (31)。其中,化合物1~16仅从发酵液中分离得到;化合物17~25仅从菌丝体中分离得到;其余化合物在发酵液和菌丝体中均分离得到。化合物15和23为首次从烟曲霉属真菌中分离得到。此外,化合物26~29的乙酰胆碱酯酶抑制活性和烟草黑胫病菌抑制活性评价表明,化合物26和27对烟草黑胫病菌具有微弱的抑制作用,抑菌率分别为19.64%和17.86%。     

不同海拔下滇重楼叶片与花萼光合特性

2013年7月对云南省昆明(海拔2100 m)和者竜(海拔985 m)2个不同海拔地区人工荫棚种植下滇重楼叶片和花萼的光合特性进行了比较研究。结果表明:不同海拔下滇重楼叶片与花萼净光合速率(Pn)日变化曲线均呈不明显的"双峰"曲线,光合午休出现在14:00左右,叶片与花萼Pn最高峰值分别出现在10:00和12:00,空气温度(Ta)偏高和相对湿度(RH)偏低分别是导致者竜和昆明地区滇重楼"午降"的主要因素;昆明地区滇重楼叶片和花萼日均Pn、Pnmax、LSP和初始量子效率较高,LCP、Rd较低,光合能力更高;昆明地区滇重楼花萼具有同叶片相似的光合特性,对光强的适应范围较大;但者竜地区滇重楼花萼Pnmax和LSP显著低于叶片,初始量子效率显著高于叶片(P0.05),对光强的适应范围较小,对弱光的利用能力更高;去除花萼后,滇重楼果实干重显著降低,且者竜地区果实干重减少量显著低于昆明地区(P0.05)。     

多叶重楼遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记对多叶重楼种下3个变种的8个居群共208份样品的遗传多样性进行了分析。l4条引物共检测到251个清晰的扩增位点,其中多态位点235个。在物种水平上,多态位点百分率(PPB)达93.63%,Nei′s基因多样性指数(HE)为0.2204、Shannon′s信息指数(HO)为0.3532。在居群水平上,多态位点百分率(PPB)为50.45%,Nei′s基因多样性指数(HE)为0.1405,Shannon′s信息指数(HO)为0.2194,这些均表明多叶重楼的遗传多样性水平较高。此外,还用NTSYS软件对样品进行了UPGMA聚类分析,结果显示滇重楼的6个居群聚为一支,滇重楼与狭叶重楼有较近的亲缘关系,而与长药隔重楼之间的遗传分化较大。本研究提出了合理保护重楼植物资源的若干措施,为进一步开展滇重楼优质种质引种驯化,实现种质资源多样性的合理保护和可持续利用提供参考。     

解有机磷细菌对滇重楼根茎、须根及根际土壤重金属元素的影响CSCD

探究接种不同解有机磷细菌后滇重楼根茎、须根及根际土壤中重金属残留量的变化规律,为滇重楼人工种植过程中重金属污染修复提供参考。通过室内盆栽接种试验,研究了在灭菌土壤接种不同解有机磷细菌对滇重楼根茎、须根及根际土壤中汞(Hg)、镉(Cd)、铅(Pb)、铬(Cr)、砷(As)5种重金属残留量的影响。与对照组(CK组)相比,接种不同解有机磷细菌对滇重楼根茎及须根中5种重金属残留量影响各不相同,对重金属Pb的修复效果最明显,其中三种菌(Bacillus mycoides、B.wiedmannii、B.proteolyticus)混合处理组(S7组)对滇重楼重金属的修复效果最佳。此外,单项污染指数和内梅罗污染指数表明,除B.mycoides处理组的土壤存在污染风险以外,其余处理组均达到清洁水平。同时,5种重金属元素在滇重楼根茎和须根中的富集能力各不相同,富集系数最大为Cd,最小为Cr, S7组滇重楼根茎中的富集能力相对较小。相关性分析表明,滇重楼根茎和须根中的Hg和Pb元素呈显著正相关(P<0.05),相关系数分别为0.761、0.811。综上,接种解有机磷细菌能够有效降低滇重楼根茎及须根中Hg、Pb和Cr元素的含量,其中S7组接种处理的效果最佳。     

云南重楼ITS序列单核苷酸多态性与甾体皂苷特征的相关性分析

为了解云南重楼(Paris polyphylla var. yunnanensis) ITS序列的单核苷酸多态性(SNP)特征与其甾体皂苷构成特征的相关性,并探讨其对药材质量稳定性的影响,利用MegAlign软件对37份云南重楼样本的ITS序列进行对比,根据SNP位点进行分型;采用HPLC法测定7种甾体皂苷成分(重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H和薯蓣皂苷);用SPSS 25.0软件和SIMCA-P 15.0软件对各基因型甾体皂苷构成特征进行统计分析。结果表明,云南重楼ITS序列存在40个双等位多态性位点,其中碱基转换32个,碱基颠换8个,根据SNP特征可划分为2类基因型YN-I和YN-II。6种甾体皂苷(重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、H、薯蓣皂苷)在云南重楼广泛分布,而重楼皂苷Ⅴ稀少。YN-I和YN-II的药典指标成分总含量分别为1.070%和0.93%,样本合格率分别为68.42%和77.78%;YN-I的甾体皂苷总含量为1.65%,YN-II为1.32%。方差分析表明,2类基因型的甾体皂苷特征存在一定程度的区别,但药典指标成分无显著差异,药材应该具有等效性。聚类分析和主成分分析表明,YN-Ⅰ的离散度更高,YN-Ⅱ的聚集度更好,表明YN-II的药材质量更加稳定,植株个体的甾体皂苷合成和累积差异更小,YN-II的SNP特征对云南重楼良种选育的分子遗传标记筛选具有重要意义。     

峨眉山2种重楼属植物同域分化的分子遗传学及其形态学证据初探

对峨眉山2种重楼-小重楼（Paris polyphylla Smith vat．minora S．F．Wang）、黑籽重楼（P．thibetica Franch）DNA进行了AFLP（扩增的限制性片段长度多态性）分析和形态上的差异分析。AFLP分析可知小重楼和黑籽重楼在DNA分子水平上表现出极为丰富的遗传多样性,每个种内个体间的相似性很大,但有明显种间的遗传差异。形态对比分析可知小重楼和黑籽重楼在花部性状上有明显的差异。AFLP和形态分析结果表明小重楼和黑籽重楼无论是在形态还是遗传上均有明显差异。它们之间已经有了明显的分化。     

滇重楼和毛重楼花粉活力和柱头可授性的研究

用TTC法测定了滇重楼和毛重楼花粉的活力,用联苯胺—过氧化氢法测定了其柱头的可授性。结果表明滇重楼的花粉活力在散粉后第1天活力较高以后则逐渐下降,在第2天和第19天花粉活力则急剧下降,但能维持20～23d,在整个花期中基本都具有活力。毛重楼的花粉寿命约为4d,第2天花粉活力达到最大值,第3天后花粉活力急剧下降,总体活力较低。滇重楼和毛重楼的柱头在整个花期中几乎都具可授性,但滇重楼在11～13d时柱头可授性最强,毛重楼在第5天可授性最强。两种重楼植物花粉活力较高的时期与柱头可授性较强的时期不一致,但柱头可授性较强的时间与分泌黏液较多的时间基本一致。     

云南重楼野生驯化及栽培技术研究初探

云南重楼是一种常用名贵中药,近年由于野生资源受到无节制的采挖,药源趋于枯竭,云南重楼多生长在海拔2000m以上的冷凉高山菁沟林荫下,人工驯化以无性繁殖为主,在林下、遮荫网下或用蔓生植物作上层遮荫种植为宜。     

出自深山的良药—重楼

重楼,又称七叶一枝花,是延龄草科（Trillia－ceae）重楼属（Paris）（亦有学者将其置于百合科内）植物的泛称。本属植物形态独特,都是一株植物一个茎,茎上只长一轮叶,在此轮叶上再生出一轮叶状萼片,形如楼台重叠,故有重楼之称,又因为本属植物多数个体的一轮叶为七片（一般为４—１６片）,在这一轮叶之上再长出一枝花,因此又称七叶一枝花。重楼属植物是一类极具药用价值的植物,我国人民对此属植物药用价值的认识已有几千年的历史,在我国古代中草药典籍中,常称之为重楼、重台、重楼金线、重楼一枝箭、虫蒌、三层草、蚤休、蚩休…