重楼法定基原与其同属近缘种的多重PCR鉴别体系研究

本研究通过分析重楼法定基原(七叶一枝花和云南重楼)与其同属近缘种ITS序列的差异设计了3对特异性引物。利用多重聚合酶链反应(PCR)原理建立了一套能快速、准确鉴别重楼法定基原与其同属近缘种的方法。最终,七叶一枝花样本可扩增出片段大小为210 bp的特异性片段,云南重楼种下的两类基因型(YN-I、YN-II)样本可分别扩增出248 bp和149 bp的特异性片段。在法定基原得到阳性鉴定的同时,其他同属近缘种无任何片段,避免了干扰。该方法首次实现了,在一套多重PCR反应体系中同时鉴别重楼药典法定基原与其同属近缘种,对于提升中药重楼的质量控制技术水平具有重要意义。     

云南重楼ITS序列单核苷酸多态性与甾体皂苷特征的相关性分析

为了解云南重楼(Paris polyphylla var. yunnanensis) ITS序列的单核苷酸多态性(SNP)特征与其甾体皂苷构成特征的相关性,并探讨其对药材质量稳定性的影响,利用MegAlign软件对37份云南重楼样本的ITS序列进行对比,根据SNP位点进行分型;采用HPLC法测定7种甾体皂苷成分(重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H和薯蓣皂苷);用SPSS 25.0软件和SIMCA-P 15.0软件对各基因型甾体皂苷构成特征进行统计分析。结果表明,云南重楼ITS序列存在40个双等位多态性位点,其中碱基转换32个,碱基颠换8个,根据SNP特征可划分为2类基因型YN-I和YN-II。6种甾体皂苷(重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、H、薯蓣皂苷)在云南重楼广泛分布,而重楼皂苷Ⅴ稀少。YN-I和YN-II的药典指标成分总含量分别为1.070%和0.93%,样本合格率分别为68.42%和77.78%;YN-I的甾体皂苷总含量为1.65%,YN-II为1.32%。方差分析表明,2类基因型的甾体皂苷特征存在一定程度的区别,但药典指标成分无显著差异,药材应该具有等效性。聚类分析和主成分分析表明,YN-Ⅰ的离散度更高,YN-Ⅱ的聚集度更好,表明YN-II的药材质量更加稳定,植株个体的甾体皂苷合成和累积差异更小,YN-II的SNP特征对云南重楼良种选育的分子遗传标记筛选具有重要意义。     

云南重楼植物内生真菌的分离及抗菌活性筛选

从云南重楼[Paris polyphylla Smithvar.yunnnanensis(Franch.)Hand.Mazz.]块状茎中分离出166株内生真菌,对其进行形态分类鉴定归于4目,6科,20个属,体现了云南重楼植物内生真菌的生物多样性特征。同时,选择与人类和植物相关的37株病原微生物作为抗菌活性筛选指示菌,进行了云南重楼植物内生真菌抗菌活性的初步研究。结果表明,4株内生真菌对细菌、植物致病真菌、皮肤致病真菌多种病原微生物具有显著抑制生长的作用。     

滇重楼可持续采收方法初探

滇重楼是云南传统的道地药材。由于种苗繁育困难和生长周期长,重楼的推广种植多年来未能取得突破。滇重楼的"多年栽培,分期采收"技术是将滇重楼根茎按用途分为药用部分与种苗部分,采收时,仅采收药用部分,种苗部分(带顶芽的根茎)继续生长发育,而不是将整个根茎全部采收作为商品药材。通过考察滇重楼须根比率的月度变化规律及3年的根茎生长量,进行采收时间和经济效益分析。结果表明:实施滇重楼"多年栽培,分期采收"技术间隔时间以3年为宜,每年每公顷收益为11.25万～33.0万元,采收时间以12月至翌年3月份为宜。     

重楼属两个新种的染色体组型分析

五指莲(Paris axialis H.Li)和绿劝花叶重楼(Paris luquaensis H.Li)是新近发现的两个重楼属新种,分布于云南奕良和绿劝。这两个新种分别属重楼属的两个亚属,前者属中轴亚属,后者属侧膜亚属。这两个种的染色体组型结构与国内外已报道过的重楼属一些种的结构大体相似。五指莲是由3对中部着丝点型和两对端着丝点型的染色体组成;绿劝花叶重楼是由3对中部着丝点型、1对近中着丝点型和1对端着丝点型的染色体组成,这两个种的组型结构存在着明显差异。现将这两个新种的染色体组型报道如下。     

重楼属二新种

五指莲重楼 新种 图1 五指(子)莲(云南彝良)、绥江);小重楼(四川荥经),九道箍(江津),铁灯台(峨眉)。 Paris axialis H.Li sp.nov. Species habitu affinis P.fargesii Fr.sed ovario 4—6-lopculari placentisaxilibus,rhizomate saepissime ramoso,perianthii segmentis interioribus longio-ribus 5.5—6cm longis,exteriora multo superantibus,staminibus numero segmen-tis,exterioribus triplo aequalibus,patentibus,longioribus quam pistillo,ad 1.3     

重楼属植物遗传多样性的SCOT标记

为评估重楼属植物的基因资源开发前景,初步探讨了SCOT标记技术在重楼属植物遗传多样性研究上的应用。采用目标起始密码子多态性(Start codon targeted polymorphism,SCOT)技术,对重楼属9个种40份材料进行基因组DNA多态性分析。结果表明:四川地区重楼属植物具有丰富的遗传多样性,40份供试材料可聚为4类:狭叶重楼单独聚为第一类;球药隔重楼、卵叶重楼、金线重楼及滇重楼聚为第二类;黑籽重楼与七叶一枝花聚为第三类;五指莲与毛重楼聚为第四类。说明SCOT标记能够对重楼属植物进行准确的分子鉴定,为重楼属植物的种类鉴定和种间的分类地位提供分子生物学依据,同时也为深入探究重楼皂苷合成关键酶基因定位研究提供重要参考。     

峨眉山2种重楼属植物同域分化的分子遗传学及其形态学证据初探

对峨眉山2种重楼-小重楼（Paris polyphylla Smith vat．minora S．F．Wang）、黑籽重楼（P．thibetica Franch）DNA进行了AFLP（扩增的限制性片段长度多态性）分析和形态上的差异分析。AFLP分析可知小重楼和黑籽重楼在DNA分子水平上表现出极为丰富的遗传多样性,每个种内个体间的相似性很大,但有明显种间的遗传差异。形态对比分析可知小重楼和黑籽重楼在花部性状上有明显的差异。AFLP和形态分析结果表明小重楼和黑籽重楼无论是在形态还是遗传上均有明显差异。它们之间已经有了明显的分化。     

峨眉山2种重楼属植物同域分化的分子遗传学及其形态学证据初探

对峨眉山2种重楼－小重楼（Paris polyphylla Smith var. minora S.F.Wang）、黒籽重楼（P. thibetica Franch）DNA进行了AFLP (扩增的限制性片段长度多态性)分析和形态上的差异分析。AFLP分析可知小重楼和黑籽重楼在DNA分子水平上表现出极为丰富的遗传多样性,每个种内个体间的相似性很大,但有明显种间的遗传差异。形态对比分析可知小重楼和黑籽重楼在花部性状上有明显的差异。AFLP和形态分析结果表明小重楼和黑籽重楼无论是在形态还是遗传上均有明显差异。它们之间已经有了明显的分化。     

滇重楼的栽培与合理利用

总结介绍滇重楼栽培技术,明确提出滇重楼种苗繁育以种子繁殖为主,带顶芽切块繁殖为辅;针对滇重楼原料稀缺状态,提出了合理利用滇重楼资源的几点建议,并阐述完善的滇重楼"三段栽培法" ,以解决滇重楼栽培周期长的问题.     

Brachyptera Group. Sp.32. C. Brachyptera. Sp.33. C.c RUFA. Sp.34. C. Troglodytes. Sp.35. C. Fulvicapilla.

A part from considerations as to where it is best wedged into the linear sequence, the brachyptera group is defined in general terms as a compact group of four small or very small species which resemble one another in many important specific characters and the other thirty-six species classified here as Cisticola in so many ways of form, coloration and behaviour as to make them best understood by classifying them also under that generic name.