自身肽结合于HLA-A2分子上能够在体外诱导抗原肽特异性的同种T细胞

在同种反应性T细胞(同种T细胞)识别的配体中, 抗原肽的作用是免疫学长期争论的问题, 即同种T细胞识别是否具有抗原肽特异性. 为了证实通过长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)方法能够诱生抗原肽/MHC复合物(pMHC)特异性的同种T细胞, 本研究利用仅表达HLA-A2, TAP缺陷的T2细胞, 将酪氨酸激酶来源的自身抗原肽(Tyr_369-377)和EB病毒来源的病毒抗原肽(LMP2A_426-434)分别加载到T2细胞上, 使T2细胞提呈单一的T细胞抗原识别表位, 并且选择4个HLA-A2阳性(HLA-A2+ve)与4个HLA-A2阴性(HLA-A2-ve)个体的PBL样本, 与加载上述抗原肽的T2细胞混合培养. 在此实验系统中, HLA-A2+ve PBL与加载病毒抗原肽的T2细胞(T2/LMP)混合培养代表T细胞对普通抗原的反应, 而HLA-A2-ve PBL与加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)混合培养则为T细胞对同种抗原的反应. 利用特异性pMHC四聚体染色与特异性细胞毒试验检测LTMLC诱生CTL的特异性, 其中利用HIV抗原肽(Gag_77-85)作为对照. 结果显示: (ⅰ) T2/LMP与HLA-A2+ve个体的PBL混合培养产生CTL(CTL-T2/LMP), CTL-T2/LMP对T2/LMP的杀伤显著高于对照T2/HIV的杀伤(26.52%±3.72% vs 7.01%±0.87%, P<0.001); LMP四聚体对CTL-T2/LMP染色的阳性细胞数显著高于对照HIV四聚体 (0.98%±0.33% vs 0.05%±0.01%, P=0.0014); (ⅱ) 加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)可诱导HLA-A2-ve个体的PBL产生CTL(CTL-T2/Tyr), CTL-T2/Tyr对T2/Tyr的杀伤显著高于对T2/HIV的杀伤(28.07%±2.58% vs 6.87±1.01%, P<0.001); Tyr四聚体对CTL-T2/Tyr染色的阳性细胞数显著高于HIV四聚体(0.88%±0.3% vs 0.06±0.03%, P=0.0018). 结果说明: 结合于自身MHC分子上的病毒抗原肽与结合于同种MHC分子上的自身抗原肽都能诱导产生抗原肽特异性的CTL; 在LTMLC诱生的同种CTL中, 有相当数量的CTL具有pMHC特异性, 这些同种CTL的识别机制与普通抗原反应性CTL一样, 识别的对象也是特异性的pMHC. 支持了同种抗原的pMHC种类繁多造成同种T细胞反应强度极高的假说. 利用LTMLC诱生抗原肽特异性同种T细胞方法对于T细胞过继治疗具有潜在的应用价值.     

昆虫抗菌肽研究和应用现状

昆虫在受到刺激或感染之后,在其血淋巴中会产生一种抗菌类物质,称抗菌肽。抗菌肽具有分子小、稳定性好、广谱抗菌、无毒副作用等特点,在农业、医药、食品等领域有广泛的应用前景。简要综述了昆虫抗菌肽的基础研究和应用现状。     

细胞毒T淋巴细胞抗原-4的研究进展

细胞毒T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)是激活的T细胞表达的一种膜蛋白,属免疫球蛋白超家族成员,它通过与B7分子的结合来阻止共刺激信号的传递,抑制抗原特异性T淋巴细胞的增殖活化,起到抑制免疫反应及诱导免疫耐受的作用。CTLA-4在自身免疫病、过敏性疾病、感染、肿瘤及抗移植排斥等领域具有广阔的应用前景。简要综述了CTLA-4的基因、分子结构,及其与T细胞应答的关系。     

Ⅲ型固有淋巴细胞在炎症性疾病中的作用

Ⅲ型固有淋巴细胞(group 3 innate lymphoid cells, ILC3)是近十年才被定义的一群新型免疫细胞,属于固有淋巴细胞家族。ILC3包括多种表型和功能差异的细胞亚群,主要分布于肠道、肺及皮肤等屏障组织,在机体免疫调节、组织修复和淋巴组织形成中起重要作用。然而,在多种炎症性疾病中,ILC3出现数量和功能异常,可通过分泌白介素(interleukin, IL)-17、IL-22、γ-干扰素(interferon γ, IFN-γ)及粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)等致炎性细胞因子调控其他免疫细胞和诱导异位淋巴结构形成,从而促进疾病的发生和进展。因此,深入探究ILC3的表型及功能对拓展炎症性疾病的认识和寻找新的治疗靶点具有重要意义。本文就ILC3的表型特点、生物学功能及其在炎症性疾病中的研究进展进行综述。     

2008-2012年昆明市儿童医院50199例患儿血培养结果的变迁及耐药状况分析

目的分析近5年(2008-2012年)本院儿童血培养结果,了解儿童血培养病原菌分布及耐药情况,为临床合理用药提供参考。方法采用BD BACTEC9240全自动血培养仪及其配套的树脂儿童血培养瓶,对5年来50 199份患儿静脉血样本进行培养,采用Sensititre Aris2X全自动微生物分析系统,对细菌进行鉴定及药敏试验。结果近5年共检测血培养50 199例,分离出1 713株病原菌,阳性检出率为3.41%。其中革兰阳性球菌1 209株,占70.58%;革兰阴性菌492株,占28.72%;真菌12例,占0.70%。其中检出频次最高的5种病原菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌属、大肠埃希菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯杆菌及洋葱伯克霍尔德菌。革兰阴性菌检出率有逐年增高趋势,而革兰阳性球菌检出率则呈现逐年下降趋势。凝固酶阴性葡萄球菌属对青霉素、苯唑西林、红霉素和头孢唑林敏感性低,对万古霉素敏感,未发现耐万古霉素的葡萄球菌及肠球菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对第3、4代头孢菌素耐药率高,对亚胺培南、美洛培南敏感。结论凝固酶阴性葡萄球菌属是引起儿童菌血症或败血症的首要病原菌,并且耐药率高;但据该研究发现,近年来革兰阴性菌感染率逐年升高,并且对3、4代头孢菌素耐药率高。因此,临床治疗用药需参考药敏试验结果及儿科用药毒副作用合理选择抗菌药物。     

恩替卡韦对CHB患者外周血T淋巴细胞PD-1水平及

摘要：目的 探讨恩替卡韦对慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血T淋巴细胞程序性死亡受体1（PD-1）水平及肝功能的影响。方法 将128例CHB患者随机分为观察组及对照组各64例,对照组患者给予拉米夫定治疗,观察组在对照组基础上给予恩替卡韦治疗。分别于治疗前、治疗后1个月、3个月、6个月、12个月抽取静脉血5 mL,采用荧光定量PCR检测患者血清HBV DNA载量,流式细胞术检测T淋巴细胞PD-1表达水平,全自动化生化分析仪测定患者血清谷草转氨酶（ALT）水平。结果 两组组患者治疗1个月、3个月、6个月、12个月HBV DNA载量、ALT水平、CD4+T细胞PD-1、CD8+ T细胞PD-1水平均低于治疗前（P<0.05）。观察组治疗后1个月、3个月、6个月、12个月HBV DNA载量、ALT水平、CD4+ T细胞PD-1、CD8+ T细胞PD-1水平低于对照组（P<0.05）。结论 恩替卡韦能有效抑制CHB患者外周血CD4+、CD8+ T细胞表面PD-1表达水平,进而抑制HBV DNA复制,改善患者肝功能。     

诱发血管瘤型J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆与表达

2007年7月至11月,中国开产前后的商品海兰褐蛋鸡群大面积暴发血管瘤,造成巨大经济损失。将病料接种DF1细胞,通过PCR和间接免疫荧光(IFA)确定此次暴发的血管瘤为J亚群白血病病毒(ALV-J)感染引起。从患病鸡群中分离到5株ALV-J(前4株已经报道),将第5株病毒命名为WS0705。为研究该毒株抗原性的特点,用PCR方法扩增出gp85基因,并克隆进pMD18-T载体进行测序。氨基酸系统进化树分析显示WS0705与英国ALV-J原型毒株HPRS-103同源性最高。从已构建的质粒pMD18-T-WS0705gp85中酶切回收gp85基因,构建重组转移载体pFastBacH Tb-WS0705gp85。利用Bac-to-Bac表达系统获得了重组杆状病毒rBac-WS0705gp85。间接免疫荧光和Western blot检测WS0705gp85基因的表达产物。间接免疫荧光显示,构建的重组杆状病毒感染的Sf9细胞呈现明显的强阳性反应;Western blot分析,重组病毒感染的Sf9细胞蛋白显示出约35kD的阳性条带。结果表明,WS0705gp85基因在Sf9细胞中得到良好的表达,并且其编码产物完全可以被外源性ALV-J的特异性单抗JE9识别,进一步证明本次暴发血管瘤的病原为ALV-J,并为进一步开发ALV-J相关诊断产品奠定了基础。     

SHIV1157ipd3N4细胞适应株的制备及其生物特性

目的体外制备SHIV1157ipd3N4病毒中国恒河猴细胞适应株,在细胞水平和中国恒河猴体内评价其生物学特性。方法用SHIV1157ipd3N4病毒阴道感染中国恒河猴,在血浆病毒载量高峰期采血分离外周血单核淋巴细胞（PBMCs）,与正常中国恒河猴PBMCs共培养。定期测定培养液中的P24抗原水平。当病毒复制达高峰期时收集培养上清,分装并冻存。测定病毒RNA载量、P24抗原浓度和TCID50。静脉感染中国恒河猴,研究该批次SHIV1157ipd3N4在体内的病毒学、免疫学指标变化及变异情况,分析其基本的生物学特性。结果本研究共制备了243 mL SHIV1157ipd3N4病毒原液,gp120序列分析表明病毒未发生变异,CCR5的嗜性也未发生改变。病毒载量为1.586×108 copies/mL,P24抗原水平为1.16×103 pg/mL,TZM-bl细胞测定病毒的TCID50为3.16×103/mL。1 mL SHIV1157ipd3N4静脉成功感染中国恒河猴G1004V,高峰期病毒载量达到1.0×106 copies/mL以上。结论此次制备的SHIV1157ipd3N4细胞适应株生物学特性稳定,适合作为毒种库构建SHIV1157ipd3N4/中国恒河猴模型。     

环磷酰胺对雄性大鼠生殖免疫功能的影响

目的观察环磷酰胺对大鼠睾丸及其细胞免疫的影响,探讨抗肿瘤药物在生殖免疫功能中的机制。方法选用16只15周龄SD大鼠,随机分为对照组和实验组,每组8只;实验组腹腔注射环磷酰胺20mg/kg/d,连续5天,用药两个月后,应用HE染色法研究大鼠睾丸远期组织学变化,用原位缺口末端标记法（TUNEL方法）检测生精小管中生殖细胞凋亡,放射免疫法检测血清睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）,流式细胞术进行血液T淋巴细胞亚群分析。结果实验组睾丸生精小管直径缩小、间距增宽、生精上皮变薄、生殖细胞层次和数量减少、生精小管腔多未见精子形成,实验组睾丸生精小管直径、面积、生殖细胞数均显著低于对照组（P〈0.01）;实验组与对照组比较生殖细胞凋亡增多,差异显著（P〈0.01）;实验组与对照组比较血清T明显降低,差异显著（P〈0.01）,血清FSH、LH水平两组间差异无显著性;血液T淋巴细胞亚群分析,实验组与对照组比较CD3＋CD4＋、CD4＋/CD8＋明显降低（P〈0.01）,CD3＋CD8＋明显升高（P〈0.01）。结论环磷酰胺对大鼠睾丸远期损害明显,促进生殖细胞凋亡,降低睾酮的分泌,并抑制T淋巴细胞的免疫功能。     

乌司他丁联合血必净治疗重症脓毒症的研究

目的：评估乌司他丁联合血必净注射液治疗重症脓毒症的临床疗效。方法：将符合入选标准的脓毒症患者40例,按照随机分组原则分为观察组和对照组,每组20例。所有患者给予常规抗感染治疗（根据培养结果给予敏感抗生素）和必要的对症支持治疗。观察组患者加用血必净注射液50ml静脉滴注,1次／12h,乌司他丁60万u静脉滴注,1次／12h,连用7d。记录治疗前后所有患者的体温、脉搏、呼吸、血白细胞（W33C）、降钙素原（PCT）、c反应蛋白（CRP）、急性生理学与慢性健康状况评分（APACHEII）、7天病死率。结果：疗程结束时观察组脉搏、呼吸、WBC、PCT、CRP、APACHEII评分、7天病死率均较治疗前明显下降,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：血必净注射液联合乌司他丁对重症脓毒症有明确疗效,改善临床症状,降低病死率。