肉苁蓉苯乙醇苷对慢性高原病模型大鼠的治疗作用及机制研究CSCD

通过测定血液红细胞数、血红蛋白含量、红细胞比容、肺组织匀浆液中内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(nitric oxide,NO)含量、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活力以及过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPAR-α)、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA水平和蛋白表达的变化,探究肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from cistanche,PhGCs)对慢性高原病(chronic mountain sickness,CMS)模型大鼠的治疗作用及作用机制。结果显示,与模型组大鼠相比,PhGCs和大花红景天能降低CMS大鼠右心室肥厚和ET-1含量、升高NO含量和总一氧化氮合酶(total nitric oxide synthase,T-NOS)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)酶活力,下调肺组织HIF-1α及VEGF蛋白的表达,上调PPAR-α蛋白的表达,同时降低肺组织中HIF-1α的mRNA水平;此外,大鼠血液红细胞数、血红蛋白含量及红细胞比容无明显变化。该研究表明PhGCs可能是通过抑制HIF通路、激活NO通路发挥作用。     

苦粉孢牛肝菌菌丝及其发酵液对黄山岩石的风化作用

苦粉孢牛肝菌可与黄山松形成外生菌根。通过X射线衍射、扫描电镜观察,分析了被苦粉孢牛肝菌菌丝作用前后的黄山岩石,研究了苦粉孢牛肝菌菌丝及其发酵液对黄山岩石的风化作用。结果表明,黄山岩石表面有明显的菌丝作用痕迹,如菌丝隧道及松散的岩石结构。含岩石的发酵液中多糖含量显著高于不含岩石的发酵液,多糖含量最高为对照组的1.44倍;含岩石与不含岩石的发酵液中有机酸(乳酸、乙酸、草酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸)含量变化无明显规律。电子能谱扫描表明：苦粉孢牛肝菌菌丝发酵液作用黄山岩石后,岩石表面的Al、Si、K、Fe原子百分比分别从8.2、16.62、3.49、7.43降至0.38、1.75、0.1、0.03;接种苦粉孢牛肝菌活菌的发酵液中各离子含量也显著高于接种苦粉孢牛肝菌灭活菌种的发酵液(对照组),Fe³⁺、K⁺、Si_ws、Ca²⁺、Al³⁺、P_ws浓度最高分别是对照组的39.95、8.37、15.97、12.53、13.71、10倍。结果揭示苦粉孢牛肝菌菌丝及其发酵液可...     

神经革苷脂GM3对肌质网Ca^2＋—ATP酶活力的调节

研究了神经节苷脂ＧＭ３参入肌质网膜后Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活力的变化。结果表明：ＧＭ３参入肌质网膜后,对肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性（ＡＴＰ水解活力与转运活力）有明显的激活作用。当参入的ＧＭ３浓度为８μｍｏｌ／Ｌ、参入时间为１２０ｍｉｎ、温度为３０℃时,对Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的激活作用最大。     

GM_3对小鼠腹腔巨噬细胞磷脂代谢转换率的影响

神经节苷脂ＧＭ_３对小鼠腹腔常驻巨噬细胞（Ｒ－Ｍ）和Ｇｅ－１３２体内激活的巨噬细胞（Ｇｅ－１３２－Ｍ）的磷脂代谢转换有显著的影响,当这两种Ｍ在体外用ＧＭ_３处理时,表现出［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇参入ＰＩ降低,参入ＰＩＰ、ＰＩＰ_２增加;但在［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］胆碱参入ＰＣ上,Ｒ－Ｍ与Ｇｅ－１３２－Ｍ不同,即ＧＭ_３促进同位素前体参入Ｒ－Ｍ的ＰＣ,抑制它们参入Ｇｅ－１３２－Ｍ的ＰＣ．以上结果表明ＧＭ３可能提高了ＰＩ或ＰＩＰ的磷酸激酶的活性,致使［￣（３２）Ｐ］ＰＩＰ和［￣（３２）Ｐ］ＰＩＰ_２增多,［￣（３２）Ｐ］ＰＩ减少．激活的Ｍ（Ｇｅ－１３２－Ｍ）本身ＰＣ代谢转换率较Ｒ－Ｍ高,当Ｇｅ－１３２－Ｍ再受ＧＭ_３刺激,ＰＣ代谢转换率降低,这提示ＧＭ_３对激活的Ｍ的ＰＣ代谢转换有调节作用．     

柚苷酶产生菌的选育及发酵条件研究

根据柚皮苷的物理及化学特性,设计和试验了一种新的柚苷酶产生菌筛选模型。在１５３株曲霉中筛选到一株产柚苷酶菌株ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒＺＧ８４,摇瓶发酵酶活力为３２０ｕ／ｍｌ。经自然分离和ＤＥＳ诱变处理,得到ＺＧ８６菌株,酶活力达１１２４ｕ／ｍｌ。对其培养条件和产酶条件进行了研究。     

巴西固氮螺菌Yu62draTG基因及其下游区域的克隆与核苷酸序列分析

以Azospirillum brasilense sp74. 0kb draTG片段为探针。自A．Brasilense Yu62的基因文库中克隆了约8kb的draTG同源片段。通过对该片段的Southern杂交分析发现Abrasilense Yu62的draTG基因定位在3．0kb EcoRI-Kpn I片段上,其上游与nifH基因相邻。DNA序列分析结果表明：该片段含有完整的draTG,这两个基因下游还有两个开放阅读框架(ORF3和ORF4,其中ORF4是不完整的),draTG及下游的ORF3推测以一个操纵元的方式转录;在draG及ORF3的上游区域均发现。54依赖型启动子的特征序列(DPE及UAS)．推测它们与draT共转录外,还有可能单独转录。同源比较的结果表明Azospirillum的DraTG是非常保守的．它们在菌株及种间的差异都很小;紧接着drag的ORF3除与A lipoferum和Rhodospirillum rubrum相应位置的ORF同源外,还与Azotobacter vinelandii的ORFl4同源;ORF3下游的ORF4与大肠杆菌的yafj基因有较高的同源性。     

应用杆状病毒载体在昆虫细胞系统中表达乙型肝炎病毒表面抗原基因

构建了同时带有乙型肝炎病毒表面抗原基因和大肠杆菌的β-半乳糖苷酶基因的杆状病毒转移载体质粒pVL941lacHBS。应用磷酸钙沉淀技术将pVL941lacHBS DNA转入事先用AcNPV感染过的Sf9细胞,在显色剂X-gal存在下,筛选无多角体的蓝色蚀斑。经过若干次蚀斑纯化,最后获得含乙肝病毒表面抗原基因和β-半乳糖苷酶基因的重组杆状病毒R-AcV941LS。 用R-AcV941LS感染Sf9细胞,在感染后72～96小时,用RPHA和RIA分别检测组织培养上清液和细胞裂解液中的乙型肝炎病毒表面抗原含量。结果,组织培养上清液为3.83μg/1×10~6～2×10~6细胞;细胞裂解液为4.39μg/1×10~6～2×10~6细胞。乙型肝炎病毒表面抗原的合成总量为8.22μg/1×10~6～2×10~6细胞。免疫电镜观察显示表达产物呈约22nm的球形颗粒。小鼠免疫接种实验结果表明,以R-AcV941LS感染Sf9细胞表达的乙型肝炎病毒表面抗原与在哺乳动物细胞系表达的乙型肝炎病毒表面抗原具有相近似的免疫原性。     

芒果苷通过PI3K/Akt/mTOR通路抑制缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡及炎症反应

目的:探讨芒果苷抑制缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡的机制。方法:将144只SD新生大鼠分为空白组、模型对照组、阳性对照组(尼莫地平,0.4 mg·kg~(-1)·d~(-1))、芒果苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg~(-1)·d~(-1))。检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)水平、细胞凋亡率、PI3K/Akt/mTOR通路分子表达量。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠脑组织中SOD的含量显著降低、细胞凋亡率显著增加,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达量显著减少(P0.05);与模型组比较,芒果苷低、中、高剂量组大鼠脑组织中SOD的含量显著增加,细胞凋亡率均显著减少,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达量显著增加且芒果苷剂量越大,上述变化越显著(P0.05)。结论:芒果苷对缺氧缺血性脑损伤大鼠的细胞凋亡及炎症反应具有抑制作用且该抑制作用与抑制PI3K/Akt/mTOR通路有关。     

黄芩苷对结肠癌细胞凋亡的影响及作用机制

黄芩苷在多种肿瘤中具有较高的抗肿瘤活性,然而,其在结肠癌中的抗肿瘤作用尚不清楚。本研究考察了黄芩苷对人结肠癌细胞系RKO的增殖和凋亡的影响,并探讨了其相关作用机制。研究发现,黄芩苷可按照剂量依赖性方式和时间依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖及集落形成能力。流式细胞术显示,与对照细胞相比,黄芩苷处理后的RKO细胞的凋亡率显著增加(5.6%vs 33.6%)。RT-PCR和Western blotting检测显示,黄芩苷处理可显著增加结肠癌RKO细胞中DKK1 (Wnt信号通路的关键负调节因子) mRNA和蛋白表达水平。相反,黄芩苷处理则显著抑制结肠癌RKO细胞中c-Myc和β-catenin (DKK1的下游靶基因)的m RNA和蛋白表达。敲低DKK1后明显阻断了黄芩苷诱导的结肠癌细胞中DKK1蛋白的上调。此外,敲低DKK1逆转了黄芩苷对其下游基因c-Myc和β-catenin的抑制作用。黄芩苷处理后,结肠癌细胞中miR-217的表达显著下调。RT-PCR和Western blotting结果显示,下调miR-217显著促进DKK1的mRNA和蛋白表达。综上所述,本研究表明黄芩苷可通过抑制结肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡来发挥其抗肿瘤作用,黄芩苷通过激活结肠癌细胞中DKK1来抑制Wnt信号通路。此外,黄芩苷通过下调结肠癌细胞中miR-217的表达来上调DKK1的表达,从而起到抗癌作用。