病原细菌致病性基因表达的环境调控

病原细菌致病性基因表达的环境调控胡稳奇（湖南省生物研究所长沙４４０００６）细菌是动物、植物乃至人类的重要致病微生物,可以引起人类的许多烈性和急性传染病,如鼠疫、霍乱、伤寒和传染性痢疾等。病理学家很久以前就注意到,病原细菌引起致病,是病原、行主及环境条...     

以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP－1

将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中,在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋０白,该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。     

昆虫杆状病毒晚期启动子在大肠杆菌中启动CAT基因表达

将油桐尺蠖（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａ）核多角体病毒晚期基因──多角体蛋白基因启动子及５′端编码区,以两种不同方式置于缺乏启动子的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）基因上游,使其分别终止在不同翻译终止位点,其宿主菌具有明显不同的氯霉素抗性,最高达２００ｍｇ／Ｌ　ＬＢ培养基以上,表明昆虫病毒启动子能启动原核基因表达。对多角体蛋白基因启动子能在大肠杆菌中有效工作的原因进行了讨论。     

玉米叶绿体atpB及atpE基因在大肠杆菌中的表达

本实验构建了在大肠杆菌中能表达玉米叶绿体ＣＦ１完整β亚基、缺失Ｎ端２３个氨基酸残基的β亚基以及完整ε亚基的表达质粒。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验表明,在分别含这些表达质粒的细菌中β、ε亚基蛋白的合成量在诱导３ｈ后即达到饱和,其含量各占细菌体总蛋白的１０％左右。这些表达产物在细菌体中形成不溶性的包含体。可通过对菌体蛋白的分级分高,将表达产物溶于５ｍｏｌ／Ｌ的尿素溶液中。     

铜绿假单胞菌PIC－N萘降解基因的研究

铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＩＣ－Ｎ对萘、邻苯二甲酸、水杨酸等有较强的氧化能力。发现该菌株以禁为底物可诱导产生芳香烃分解酶系。菌株中存在一个５７．４ｋｂ的质粒,经限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ处理可产生７个片段,用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ处理可产生８个片段。将以限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ部分酶切的片段克隆至大肠杆菌质粒ｐＭＦＹ４３上,获得２９个克隆株。通过对含有菌株ＰＩＣ－Ｎ质粒ＨｉｎｄⅢ片段的７个重组质粒进行限制酶分析,绘出了该质粒ＨｉｎｄⅢ内切酶７个切点的酶切图谱。     

杆菌属中蛋白酶基因的筛选及表达

杆菌属中蛋白酶基因的筛选及表达刘白玲,何先祺,张义正（四川成都科技大学皮革工程系成都６１００６５）（四川大学生物工程系成都６１００６４）蛋白酶是大多数杆菌产生的具有重要工业价值的水解酶,广泛应用于轻工、纺织、食品、化妆、洗涤剂及皮革工业中￣［１］。早...     

精子介导鱼类基因转移和聚合酶链反应检测技术

金鱼精子与美洲大绵ｗｅｉ的抗冻蛋白基因一起保温３０分钟后,再与卵子受精,共获得１４５尾成鱼和若干胚胎。从胚胎和成鱼中提取ＤＮＡ经聚合酶链反应（ＰＣＲ法）扩增和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交表明,外源的抗冻蛋白基因进入了部分受体鱼的染色体组内。测定了４５尾一年龄实验鱼中,有１２尾显示出明确的杂交带,阳性率为２６％。     

电脉冲穿孔法将苏云金杆菌δ-内毒素基因导入野生型芽孢杆菌

利用电脉冲穿孔法将带有苏云金杆菌毒蛋白基因的穿梭质粒导入几株野生型芽孢杆菌中。它们是野生型的蜡状芽孢杆菌、短芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。通过观察在新霉素和氨苄青霉素平板上长出的抗性菌落数,计算出转化效率为10~1—10~4转化子/μgDNA。从转化子中分离到的质粒DNA大小及其用HindⅢ酶切的片段与原始质粒DNA相同,毒性测试表明重组转化子对烟青虫六天的致死率达90—100％。     

应用亲和层析法提纯 鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物

利用鸡马立克氏病病毒(MDV)1型特异单克隆抗体H19致敏Sepharose 4B—cNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS—PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H19识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。