不同方法制备大鼠肝脏脱细胞支架及其免疫原性研究

目的:肝脏脱细胞支架(decellularized liver bioscaffold,DLB)在组织工程研究中具有良好前景,但对DLB的免疫原性尚未见探讨.本研究利用不同方案制备大鼠DLB,检测支架成分和体内重塑反应,为制备出低免疫原性的DLB提供改进依据.方法:选取文献报道的三种方案(分别以SDS,Triton X-100和NP-40为主要洗脱成分),制备F344大鼠DLB,进行HE和Masson染色,检测DLB中DNA、氨基葡聚糖(GAG)以及羟脯氨酸(HYP)含量;再将DLB埋植于C57BL/6小鼠的背部皮下,于术后第3、7和14天取出后进行形态学观察和组织学评分.结果:三种方案均成功制备出符合脱细胞标准的大鼠DLB;形态学结果提示TritonX-100和NP-40方案较SDS方案能更好地保护肝脏超微结构;成分检测结果发现NP-40方案去除DNA的能力显著强于SDS和Triton X-100方案(P＜0.05),而对GAG含量的洗脱作用最弱(P＜0.05);异种体内埋置实验提示NP-40方案制备的DLB引起的免疫反应强度明显弱于SDS和Triton X-100方案,体内重塑结局评分显著高于SDS和Triton X-100方案.结论:与SDS和TritonX-100方案相比,NP-40方案能更有效地去除肝脏DNA,较好地保留GAG,诱导移植受体对DLB的良性重塑反应,为进一步的体内研究提供更优化的支架.     

arcA基因提高大肠杆菌对有机溶剂的耐受性

【目的】将来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida JUCT1)的基因arc A(编码精氨酸脱亚胺酶)整合到Escherichia coli JM109(DE3)基因组中,以提高该菌对有机溶剂的耐受性。【方法】以P.putida JUCT1的基因组为模板扩增基因arc A,并与p ET-20b(+)连接后导入E.coli JM109(DE3)中,验证该基因提高E.coli JM109(DE3)对有机溶剂的耐受性。利用Red同源重组的方法将arc A整合到E.coli JM109(DE3)基因组中。【结果】E.coli JM109(DE3)/p ET-20b(+)-arc A在添加了2.0%(体积比)环己烷、0.1%(体积比)甲苯、4.0%(体积比)萘烷和0.1%(体积比)丁醇的培养基中培养8 h后,其OD660由初始的0.2分别上升到0.8、0.9、1.8和1.3。将arc A成功整合到E.coli JM109(DE3)基因组中,获得了具有较好遗传稳定性的溶剂耐受E.coli JM109(DE3)宿主菌株。【结论】外源基因arc A能提高大肠杆菌菌株的有机溶剂耐受性,为工业化应用中耐溶剂微生物菌株的构建提供了实验依据和理论基础。     

好氧反硝化微生物学机理与应用研究进展

近年来,关于好氧反硝化过程的研究主要集中在三个方面:分别是好氧反硝化菌株的分离和脱氮性能表征,好氧反硝化微生物的应用潜力分析,以及好氧反硝化过程的机理研究。好氧反硝化菌株分布范围广泛,可从多种环境中分离得到,种属以Pseudomonas sp.、Alcaligenes sp.和Paracoccus sp.为主。好氧反硝化菌株及菌群在实验室条件下表现出优良的耐冷、耐盐特性,并具有可降解毒性有机物及N_2O减排的潜力。关于好氧反硝化过程的机理研究表明,虽然硝酸盐作为电子受体的竞争力比氧气弱,但反硝化作为辅助电子传递途径,可提高产能效率,防止NAD(P)H的过量积累。因此,硝酸盐可与氧气同时参与微生物的新陈代谢,即发生好氧反硝化现象。未来除了继续分离更新更好的好氧反硝化菌株外,应加强对好氧反硝化机理及实际生物强化方面的研究。     

Radiolabeling and biodistribution of a nasopharyngeal carcinoma-targeting peptide identified by in vivo phage display

A dodecapeptide EDIKPKTSLAFR ligand targeting CEN- 1 human nasopharyngeal carcinoma （NPC） was identified by in vivo phage display. Two tridecapeptides and their derivatives, named YR13 （YEDIKPKTSLAFR）, EY 1 3 （EDIKPKTSLAFRY）, EY 1 3-NH2 （EDIKPKTSLAFRY-NH2） and Fmoc-YR 1 3 （Fmoc-YEDIKPKTSLAFR）, were synthesized and radiolabeled with ^[3]I. The stability in vitro, biodistribution and tissue distribution of selected phage particles in mice bearing NPC tumor were determined, and plasma metabolites analysis of radiolabeled peptides was carried out. Although Fmoc and NH2 groups could protect the peptide from deiodination, only Fmoc group inhibited the binding of Fmoc-YR13 to NPC tumors. The compound EY13-NH2, the C-terminal amide of peptide EY13, had the greatest serum stability, the least deiodination, and showed favorable tumor/blood ratios. The selected phage particles （phage 3 or phage 5） were more concentrated in NPC tumors than the control phage （initial phage display peptide library）. EY13 could also inhibit the binding of selected phage particles to tumors. The results indicated that EDIKPKTSLAFR was a good candidate in diagnostic and therapeutic NPC.     

高原鼠兔冷驯化和脱冷驯化中的产热变化

本文探讨了冷驯化和脱冷驯化对高原鼠兔代谢产热的影响。在冷驯化中，鼠兔的静止代谢率逐渐增加，血清Ｔ３‘／Ｔ４比率上升，肝线粒体状态３呼吸明显增加，线粒体细胞色素Ｃ氧化酶激活，而肝脏线粒体蛋白含量没有明显变化。     

磷脂酶D和炎症的关系

磷脂酶Ｄ（ＰＬＤ）广泛存在于动物组织细胞中,并受各种胞外信号调节。其主要底物为磷脂酰胆碱（ＰＣ）。ＰＬＣ引起的ＰＣ水解是细胞内重要的信号转导途径。越来越多的证据表明ＰＬＤ和炎症有密切的关系。本文主要介绍ＰＬＤ在呼吸爆发、脱颗粒及花生四烯酸（ＡＡ）释放等方面的研究进展。     

昆明地区香石竹病毒病流行状况调查及脱病毒苗的制备

对昆明地区3种不同生产模式下的香石竹（Dianthus caryophyllus L.)进行了调查,采集样本146号,利用酶联免疫法和电镜检测法对样本感染香石竹病毒的情况进行检测,结果表明昆明地区主要流行的香石竹为香石竹斑驳病毒和香石竹坏死斑点病毒,以带香石竹斑驳病毒的香石竹品种“俏新朗”为实验材料,研究了直接剥茎尖法,高温处理结合剥茎尖法和病毒痤处理结合剥茎尖法3种方法在脱病毒效率和茎尖成苗率的差异,实验结果表明以加热处理结合剥茎尖法脱病毒效果最好,0.2mm茎尖脱病毒率可达77．78％,加5％病毒座处理对脱病毒有一定的影响,直接剥茎尖法脱病毒效果最差。     

有机相酶促酯化反应中水分调控技术的研究

在有机相酶促反应中,水含量是影响酶活力的关键因素.对异辛烷/正辛醇体系中柱状假丝酵母脂肪酶催化萘普森酯化反应中的水分调控技术进行了研究. 结果表明：水合盐对——Na₂SO₄·10H₂O/Na₂SO₄对系统水分的变化具有有效的缓冲作用;非极性硅藻土吸附固定酶,使之对水分的敏感性得到缓解;另外,加入分子筛去除副产物——“水”可促进酯化过程的进行.     

制浆造纸生物技术研究进展

制浆造纸工业是国民经济的主要支柱之一,但也是资源消耗和环境污染的大户。近年来,国外用于制浆造纸工业的生物技术研究异常活跃,除废水生物处理外,木聚糖酶助漂、脂肪酶控制树脂、木片真菌预处理和酶法废纸脱墨等工艺已经在生产中得到实际应用,生物制浆、漆酶漂白工艺也已进入中试阶段。结合以草浆为主的特点,我国的制浆造纸生物技术研究也已日趋活跃起来。     

甲壳素脱乙酰酶的研究概况及展望

甲壳素脱乙酰酶(chitin deacetylase,CDA,E.C.3.5.1.41)是一种能催化脱去甲壳素分子中N-乙酰葡糖胺链上的乙酰基,使之变成壳聚糖的酶。而壳聚糖因其独特的性质被广泛应用于医药、食品、化工、化妆品等行业。对CDA的来源、分离纯化和酶学性质、结构和催化机制、基因的克隆表达及应用前景等方面的研究进行了综述,并分析出今后的主要研究方向应在CDA基因的克隆表达、CDA底物的改造及CDA的结构和催化机制等方面。