巴尔通体的液体培养

巴尔通体(Bartonella species)是一群革兰氏染色阴性、营养条件要求苛刻、兼性细胞内寄生的需氧杆菌,主要寄生在动物宿主和人的血管内皮细胞和红细胞内,20世纪90年代以后,在欧美地区一些流浪人群中出现了由巴尔通体引起的菌血症、心内膜炎,一些艾滋病人群中出现了杆菌性血管瘤等,由于这些疾病以往不曾为人们所认识,被WHO确认为新发传染病,因而引起广泛关注。     

Identification of xylanase-producing fungi EIM-30 and its optimization of submerged fermentation conditions

通过对木聚糖酶高产菌株EIM-30基于形态学和18S rDNA序列的系统发育进化分析,鉴定为里氏木霉Trichoderma reesei.在单因子实验确定EIM-30产木聚糖酶的最适碳源和氮源的基础上,通过Plackett-Burman实验对影响其产酶的相关因素进行评估并筛选出3个显著效应因子,然后应用最陡爬坡实验和响应面分析确定最适产酶培养基配方为:酵母浸膏1.50％,蛋白胨1.00％,NaCl 0.50％,PPG-2000 0.10％,MgSO4 1.20％,CaCl2 0.18％,(NH4)2 SO4 0.45％,甘油4.18％,乳糖3.05％,K2HPO41.59％.优化后Trichoderma reesei EIM-30的液体发酵产木聚糖酶的活力可达9.857×105 U/mL,较优化前提高1.98倍.     

聚磷茵JPA1菌株的生长特性和聚磷条件的优化

以YG培养基为基础,考察不同条件对聚磷菌JPA1菌株生长及聚磷效率的影响。结果表明：JPA1菌株生长的对数期为3-9h,9h后进入稳定期,12h到达衰亡期。在单因素试验中,麦芽糖为JPA1菌株最适生长和聚磷的C源,最适生长温度为30-35℃,pH为8,Na＋、Ca2＋、Mg2＋、Mn2＋和K＋等离子有利于JPA1菌株的生长;最适聚磷温度为30-35℃,pH为7,Fe2＋、Na2＋、Mg2＋、Mn“和K＋等离子有利于JPA1菌株的聚磷。正交试验结果表明：JPA1菌株去磷培养基的最优组合为麦芽糖1．5g／L,温度37℃,pH6．5,装液量50mL（300mL摇瓶）;菌株最适扩增培养基为麦芽糖1．5g/L,温度37℃,pH6．5或7．5,装液量150mL（300mL摇瓶）。     

纳豆激酶液态发酵条件的研究

考察纳豆杆菌在7.5 L发酵罐中分批发酵产纳豆激酶的条件,纳豆激酶酶活采用四肽底物测定。结果表明:纳豆杆菌生长和产酶的适宜条件不一致。发酵过程中发酵罐搅拌转速控制为500 r/min不变,0～12 h时控制pH为8.0、温度为37℃;12～36 h调整pH为7.0、温度为30℃;16 h时补加外源C源,连续发酵36 h。该过程中发酵液中比酶活最高达到3 232 U/mL,与摇瓶发酵相比,比酶活提高了58%。     

聚磷菌JPA1菌株的生长特性和聚磷条件的优化

以YG培养基为基础,考察不同条件对聚磷菌JPA1菌株生长及聚磷效率的影响.结果表明:JPA1菌株生长的对数期为3～9h,9h后进入稳定期,12 h到达衰亡期.在单因素试验中,麦芽糖为JPA1菌株最适生长和聚磷的C源,最适生长温度为30～ 35℃,pH为8,Na+、Ca2+、Mg2-、Mn2+和K+等离子有利于JPA1菌株的生长;最适聚磷温度为30 ～ 35℃,pH为7,Fe2+、Na+、Mg2+、Mn2+和K+等离子有利于JPA1菌株的聚磷.正交试验结果表明:JPA1菌株去磷培养基的最优组合为麦芽糖1.5 g/L,温度37℃,pH 6.5,装液量50 mL(300 mL摇瓶);菌株最适扩增培养基为麦芽糖1.5 g/L,温度37℃,pH 6.5或7.5,装液量150 mL(300 mL摇瓶).     

儿童肺炎支原体咽拭子快速液体培养结果分析

目的分析儿童肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养的结果及与患儿年龄以及季节的关系,为临床诊断、治疗肺炎支原体感染提供依据。方法选取深圳市宝安区人民医院1217例急性呼吸道感染的患儿,采用咽拭子快速液体培养基进行筛查,观察其阳性率。结果在1217例患儿中,共检出阳性281例,阳性率为23．09％。〈1岁、1～3岁、3～6岁和6～14岁各年龄组的阳性率分别为15．13％、26．52％、28．31％和18．07％;不同季节MP感染率分别为春23．75％,夏20．11％,秋18．61％,冬29．72％。1～3岁,3—6岁小儿感染率明显高于6—14和〈1岁儿童（P〈0．01）;冬春季阳性率较夏秋季高。结论MP快速液体培养鉴定对MP诊断具有重要的临床诊断价值。肺炎支原体感染全年均可发病,好发于冬季,以3—6岁小儿多见。     

Extraction of Pancreatic Lipase Inhibitor from Rice Germ

以米胚芽为原料,提取具有抑制胰脂肪酶活力的胚芽蛋白.经工艺优化得到提取条件为:原料颗粒60目,料液比1:6,pH 10.18,温度55℃,提取时间4h,水提后离心速度4 456 r·min-1,等电点沉降pH5.1,等电点沉降后离心速度3 692r·min-1.在此条件下提取得到的胰脂肪酶抑制剂的蛋白质纯度为60.7％.15.18 g/L的胚芽蛋白对30.1 U/mg的猪胰脂肪酶的平均抑制率达71.17％.     

下丘脑室旁核注射GLP-1 对糖尿病大鼠中枢GLP-1 受体表达

目的:探讨下丘脑室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)注射GLP-1(胰高血糖素样肽-1)对糖尿病大鼠胃排空的影响及机制。方法:30只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和GLP-1干预组(GLP-1组),每组各10只。DM组和GLP-1组腹腔注射链脲佐菌素,三组大鼠均PVN区埋置套管,恢复7d,GLP-1组微量注射0.5μg/0.5μl的GLP-1,NC组和DM组大鼠PVN区微量注射等体积生理盐水。甲基纤维素-酚红灌胃法检测胃排空;半定量RT-PCR检测大鼠下丘脑GLP-1RmRNA的表达。结果:DM组胃排空率较NC组明显升高(P<0.05),GLP-1组胃排空明显低于DM组(P<0.05),GLP-1组和NC组差异无统计学意义(P>0.05)。GLP-1组下丘脑GLP-1RmRNA的表达明显高于DM组和NC组(P<0.05),并与胃排空率成负相关(P<0.05)。DM组和NC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PVN区注射GLP-1可以抑制糖尿病大鼠早期胃排空加速,作用机制可能和促进下丘脑GLP-1受体表达有关。     

人胰高糖素样肽-1及其突变体在大肠杆菌BL21中的表达与生物活性研究

以人胰高糖素样肽-1（human glucagons-like peptide-1,GLP-1））为研究对象,以克隆载体pPblu2SKP/（GLP-1A2G）2基因为模板,利用PCR扩增获得GLP-1与其突变体GLP-1A2G的编码基因,并将其插入原核表达质粒pGEX-4T-1中,利用氯化钙法将其转入表达宿主大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中诱导表达,经IPTG诱导后,收集菌体。菌体经超声破碎后,裂解液用GST亲和层析纯化得到融合蛋白,经凝血酶酶解,用Superdex G-75凝胶层析,得到GLP-1及其突变体GLP-1A2G的样品,经SDS-PAGE电泳测定,样品纯度〉90%。小鼠糖耐量试验表明,相对于空白对照组而言,GLP-1及其突变体GLP-1A2G可以明显地控制血糖的水平,两者的生物活性并无明显差异。由于突变体GLP-1A2G较GLP-1可以更加有效的抵制DPPⅣ的降解,提示突变体GLP-1A2G较GLP-1在白蛋白融合或PEG修饰等方面具有更大的优势。     

黑曲霉X-1产木聚糖酶液体发酵工艺研究

目的:提高黑曲霉X-1菌株液体发酵木聚糖酶的产量.方法:采用单因素和正交试验对黑曲霉X-1菌株产木聚糖酶液体发酵培养基和培养条件进行了优化.结果:通过正交试验找出最大影响因素为玉米芯和葡萄糖的供应,优化后的最佳培养基和培养条件为:玉米芯粉3%,葡萄糖0.5%,蛋白胨1%,KH2PO4 0.5%,MgSO4·7HO 0.1%,Tween-80 0.‰,pH 6.5,30℃、200r/min摇瓶培养120h.结论:黑曲霉X-1菌株在优化后的培养基和培养条件下,木聚糖酶活力高达1 630.78U,比优化前木聚糖酶活力(724.63U)提高了125.05%.