鲤鱼硒蛋白W基因的克隆、序列分析及其组织表达

硒蛋白是一类含有硒代半胱氨酸(Selenocysteine,Sec)的蛋白质,具有抗氧化和免疫调节等多种生物学功能。尽管目前已知硒对鱼类生长发育、抗氧化和免疫等方面有着重要的作用,但是有关鱼类硒蛋白的研究还不全面,特别是对鱼类硒蛋白W(Selenoprotein W,Sel W)的结构和功能还知之甚少。为了深入研究鱼类硒蛋白的结构特征和生理作用,本文利用RT-PCR和RACE技术从肝胰脏中克隆获得了鲤鱼Cyprinus carpio Sel W的c DNA全长序列(cc Sel W)。cc Sel W c DNA全长704 bp,含有261 bp的开放阅读框,编码86个氨基酸。预测的cc Sel W分子量为9.5 k D,在其N-端含有特征序列C-X-X-U基序,且第13位氨基酸为13Sec。在cc Sel W c DNA 3'-UTR区域含有一个89 bp的Sec插入序列(Sec-insertion sequence,SECIS),形成经典的AUGA-AA-GA型SECIS。由于在其SECIS二级结构的顶环上有一个额外的小茎-环结构,所以鲤鱼SECIS属于Ⅱ型SECIS结构。cc Sel W与斑马鱼Danio rerio和热带爪蟾Xenopus tropicalis的同源性最高,均为84.7%,与其他物种的同源性在54%~60%之间。系统发育树结果显示,cc Sel W和斑马鱼、两栖类位于同一分支上。RT-PCR结果显示,cc Sel W mRNA在所检测的11个组织中均有表达,其中以精巢中的表达量为最高,下丘脑和肠中表达量次之,其余组织中表达量大致相当,低于精巢、下丘脑和肠。这些结果丰富了鱼类Sel W的研究内容,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。     

贵州黑洞内红点齿蟾组织和器官的碳氮稳定同位素分析

应用稳定同位素技术对贵州黑洞红点齿蟾组织和器官的δ13C、δ15N同位素组成进行了研究。结果显示,其胃肠、肌肉、肾脏、肝脏、骨头的δ13C值平均范围为-23.5763‰~-22.5933‰,跨度为0.9830‰,δ15N值平均范围为6.2940‰~7.2193‰,跨度为0.9253‰;其δ13C值大小顺序为骨头肌肉胃肠肾脏肝脏,δ15N值大小顺序为骨头肝脏肾脏肌肉胃肠。红点齿蟾在不同的年龄阶段、不同的性别中,其δ13C、δ15N值也不同,其δ13C值大小顺序为幼体雌性成体雌性幼体雄性成体雄性,δ15N值大小顺序为幼体雄性成体雄性幼体雌性成体雌性。Spearman相关分析结果表明,红点齿蟾肝脏的δ13C值随其体长和湿重的变化而成极显著变化(P≤0.01),其Spearman相关系数分别为0.820和0.833;其肾脏和肝脏的δ15N值也随其体长和湿重的变化而呈极显著变化(P≤0.01),其Spearman相关系数分别为0.812,0.895和0.800,0.883。     

轮状病毒感染相关受体的研究进展

轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一,由三层同心的蛋白质衣壳包被双链RNA基因组构成。轮状病毒感染宿主细胞主要依赖于病毒识别细胞表面的特异性受体并与其发生结合,因此,受体是病毒感染细胞的重要因素。目前已发现的受体包括唾液酸、整合素、Toll样受体、血型组织抗原等,本文将对参与轮状病毒感染的相关受体作一简要概述。     

冠盖藤水提物对大鼠膝骨性关节炎COX_2、NO、iONS表达及关节组织形态学的影响

研究冠盖藤水提物对膝骨性关节炎大鼠血液及关节液COX2、NO、iONS含量的影响。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性组(硫酸氨基葡萄糖组)、冠盖藤中、高剂量组,制备4%木瓜蛋白酶溶液与0.3 mol/L半胱氨酸溶液(1∶1)的混合液,分别于第1、3、7 d注入SD大鼠右膝关节造模,每次20μL。冠盖藤中、高剂量组以4.62 g生药/kg、9.24 g生药/kg,阳性组以0.133 mg/kg硫酸氨基葡萄糖分别灌胃,正常对照组和模型组分别予以等量蒸馏水;连续给药4周后,进行指标测定。与模型组比较,冠盖藤中、高剂量组血液及关节液中COX2、iONS、NO含量明显降低,能有效抑制关节软骨组织形态的改变,间接保护软骨细胞和促进受损软骨细胞恢复的作用。冠盖藤能有效抑制关节液中COX2、NO、iONS表达,保护软骨细胞和促进受损软骨细胞恢复的作用,是延缓关节软骨退变的机制之一。     

蛇床子配伍维生素C对大鼠运动性肾脏缺血再灌注的保护作用

本文对蛇床子配伍维生素C对大鼠运动性肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制进行了研究。试验中对大鼠以1.5 g/kg的剂量的蛇床子灌胃,100 mg/kg的维生素C腹腔注射56 d,并进行力竭游泳训练及血尿素氮等生化指标测定。结果显示,8周的过度训练导致大鼠运动性肾缺血"再灌注",肾组织组织病理学发生明显改变,肾功能受到严重损坏。血尿素氮和血清肌酐各组较对照组明显上升,与OM组相比FOM组、VCOM组、FVCOM组明显下降,分别为P0.05、P0.05、P0.01;与VCOM组相比,FOM组、FVCOM组明显下降,分别为P0.05、P0.01。SOD活性各组较对照组明显降低,与OM组相比FOM组、VCOM组、FVCOM组明显上升,分别为P0.05、P0.05、P0.01;与VCOM组相比,FOM组、FVCOM组明显上升,分别为P0.05、P0.01。MDA含量各组较对照组明显升高,与OM组相比FOM组、VCOM组、FVCOM组明显下降,分别为P0.05、P0.05、P0.01;与VCOM组相比,FOM组、FVCOM组明显降低,分别为P0.05、P0.01。从而说明蛇床子和维生素C均可以增强SOD活性,清除氧自由基,减轻脂质过氧化作用,对运动性缺血再灌注肾脏具有保护作用。蛇床子作用优于维生素C。二者配伍使用效果更好。     

2月龄和4月龄大鼠制备心肺复苏模型后神经功能评价及亚组评分的比较

目的：本研究旨在选择适合的大鼠,对比2月龄大鼠与4月龄大鼠CPR后神经功能评分及亚组评分,摸索利用不同月龄的大鼠CPR的可行性。方法通过严格监测SD大鼠制备模型过程中的心电、血压生理指标、测定各组大鼠不同时间点的神经功能缺失评分以及神经功能亚组评分、对比制备4月龄和2月龄大鼠心肺复苏模型的稳定性。结果电刺激致室颤,4月龄组大鼠的成模率为87.5％,远高于2月龄组大鼠,而死亡率无差异;在电刺激诱发CA过程中造成的血压变化,4月龄组大鼠明显低于2月龄组大鼠,存在极显著性差异（ P ＜0.01）;4月龄组大鼠与2月龄组大鼠CPR后各时间点的神经功能评分无统计学差异,而4月龄组大鼠与2月龄组大鼠的神经功能亚组评分在不同时间点,存在显著差异（P ＜0.05）,4月龄大鼠与2月龄大鼠对比,心肺复苏后脑损伤的程度加重。结论4月龄大鼠更适合制备心肺复苏模型,该月龄组的大鼠制备模型成模率高,脑损伤程度重,更适合于用于心肺复苏的基础研究及治疗评价。     

药用植物栀子的组织培养

栀子(Gardenia jasminoides)为药用木本植物。以栀子果皮、种子团和种子为外植体,研究不同激素配比及不同培养方式对愈伤组织诱导和芽分化的影响。研究结果表明,培养基成分为MS+0.5 mg·L–12,4-D+0.25 mg·L–16-BA较适宜果皮和种子愈伤组织的诱导,诱导率分别为83.3%和88.5%;培养基成分为MS+1.0 mg·L–12,4-D+1.0 mg·L–16-BA较适宜种子团愈伤组织的诱导,诱导率为78.1%。3种外植体诱导的愈伤组织中,只有种子愈伤组织能通过液体培养分化出芽;TDZ对芽分化有明显的促进作用;最佳的芽分化培养基为MS+0.05 mg·L–1NAA+0.10 mg·L–1TDZ,其愈伤组织分化率为8.75%。该研究以栀子种子为外植体,并获得了再生植株,为药用植物栀子转基因体系的建立奠定了基础。     

应用组织芯片技术检测果糖二磷酸醛缩酶在肝癌与胰腺癌组织中的表达

目的探究果糖二磷酸醛缩酶ALDOA在肝癌、胰腺癌组织中的表达及临床意义.方法采用组织芯片和免疫组织化学方法检测ALDOA在肝癌、胰腺癌及其相应的正常组织中的表达.结果ALDOA在肝癌组织中的阳性表达率为80%（24/30）,在正常肝组织中的阳性表达率为33.3%（2/6）,二者之间表达差异具有统计学意义（P〈0.05）.ALDOA在胰腺癌组织中的阳性表达率为66.7%（20/30）,在正常胰腺组织中的阳性表达率为0%（0/6）,二者之间表达差异具有统计学意义（P〈0.01）.ALDOA在肝癌、胰腺癌组织中的表达与性别、年龄、分化程度无关（P〉0.05）;胰腺癌组织中的ALDOA高表达与淋巴结转移无关（P〉0.05）.结论ALDOA在肝癌、胰腺癌组织中表达上调.     

改进的TTC染色法显示大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的比较应用不同2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方法对大鼠心肌缺血再灌注损伤后梗死面积的检测效果。方法将20只SD大鼠(雄性,8周龄,体重250~300 g)按随机数字表法分为两组,每组10只。A组:传统TTC染色法组;B组:改进后的TTC染色法组,分别进行大鼠心肌染色,随后计算心肌梗死面积及测定血清cTnI浓度水平。结果 A组和B组均能较好地标记梗死心肌;A组和B组心肌梗死面积百分比无统计学差异(48.69%±5.37%vs.47.41%±3.28%,P0.05);A组和B组血清cTnI浓度水平无统计学差异(4.51±0.88 ng/mL vs.4.70±0.71 ng/mL,P0.05);但B组心肌切片染色色泽对比度及心肌非梗死区与梗死区区分度均高于A组。结论改进后的心肌TTC染色法采用在体染色,不仅操作简便,节省了实验时间和经费,而且提高了染色效果,能更准确地反映心肌缺血再灌注损伤的程度。因此改进后的心肌TTC染色法是一种经济、简便、快捷、高效的染色方法。     

孕激素暴露致食蚊鱼形态雄性化的生物学效应

目的：研究不同浓度孕酮（ PRO）暴露对雌性食蚊鱼（ Gambusia affinis）的形态雄性化生物学效应。方法将性未成熟的雌性食蚊鱼个体分别静水暴露于0.5、5、50和500 nmol/L不同浓度的PRO实验组中,并设置对照组和平行组。持续暴露42 d后观察与测定食蚊鱼的体长、体重、臀鳍第3鳍条和第14,15,16椎肋骨形态雄性化变化等指标,同时观察卵巢发育状况。结果食蚊鱼暴露42 d后,与对照组相比,50和500 nmol/L实验组食蚊鱼的体长（ BL）有极显著减少（分别P＜0.01）;无论是低浓度组还是高浓度组,暴露实验后体重（ BW）都有显著性或极显著下降（P＜0.05或P＜0.01）;PRO暴露对食蚊鱼身体健康指数（CF）的影响,只有在5 nmol/L浓度时差异有显著性（P＜0.05）;500 nmol/L浓度处理后,第3臀鳍条分节数（FJ）、长度（FL）和最宽处宽度（FW）差异有显著性（P＜0.05）,表明形态雄性化变化明显;其他浓度组则无明显区别（P＞0.05）;500 nmol/L PRO实验组中,雌性食蚊鱼的第14,15,16椎肋骨的L值、D值和L：D值都出现极显著性差异（分别P＜0.01）,表明形态雄性化变化明显;组织切片观察揭示,暴露组食蚊鱼卵巢中的卵母细胞发育受到不同程度的抑制,II、III时相卵母细胞胞核发生肿胀现象。结论孕激素暴露诱导雌性食蚊鱼形态雄性化的生物效应十分明显。