基于颜色判定的环介导等温扩增技术检测HPV6和HPV16

建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导等温核酸扩增技术(LAMP)应用于HPV6和HPV16亚型的检测。该技术设计分别对应于HPV6和16的E6和E7基因序列中6个区段的4条特异引物,在等温条件下(63℃)进行核酸扩增反应1h,在扩增前加入HNB染料(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB染料颜色的变化做为结果判定的标准,并经LA-320实时浊度仪和琼脂糖电泳证实。文中利用这种技术对13份已知的单重感染13种HPV不同亚型的临床样本进行了特异性分析,同时对2个含目的片段的克隆质粒的系列稀释物进行了灵敏度分析。结果显示LAMP方法特异性高,颜色法判断的灵敏度均为1000个拷贝DNA分子水平,比Real-time PCR低10～20倍,对62份宫颈刮片临床标本的HPV6和HPV16检出率和HPV分型试剂盒一致。因此,基于颜色判定的环介导等温扩增方法有望应用于人乳头瘤病毒HPV6和HPV16感染的快速筛选,具有在基层疾病预防控制中心和医院推广和应用的潜力。     

人乳头瘤病毒6b型E7蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

进行人乳头瘤病毒6b型(Human papillomavirus type 6b,HPV6b)E7蛋白原核表达并制备其多克隆抗体。用已构建的pGEX-4T-2/HPV6bE7原核表达载体诱导表达大量可溶性融合蛋白GST-HPV6bE7,用Glutathione-Sepharose 4B亲和柱和凝血酶纯化获取HPV6b型E7蛋白。将纯化的E7蛋白免疫新西兰兔并纯化为多克隆抗体IgG。采用Western-Blot及免疫荧光法分析该抗体的效价及特异性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导3～6h后pGEX-4T-2/HPV6bE7表达载体在大肠杆菌中高水平表达可溶性融合蛋白。纯化的E7蛋白免疫新西兰兔后可获得兔多克隆抗体IgG。经Western-Blot及免疫荧光鉴定,兔抗IgG具有高效价性和抗HPV6bE7蛋白特异性。获取纯化的HPV6b型E7蛋白具有较好的免疫原性,其免疫兔产生的多克隆抗体IgG效价高,特异性好,有望进一步用于HPV6b型的生物学功能研究和免疫学效应研究。     

6b基因:植物肿瘤形成的重要影响因子

近年来,来自农杆菌的致瘤基因在植物中的功能和作用机理研究越来越得到重视。6b基因是植物肿瘤形成的重要影响因子,它位于T-DNA片段上,属于rolB基因家族。在植物体内,6b基因能影响激素水平、糖的含量和其他次生代谢产物的积累,以及改变与其相关基因的表达水平等,但其具体作用机制还有待深入研究。文章对6b基因的生物功能、分子结构、活性部位、作用模式等方面的重要研究进行了综述,为这类功能基因的进一步研究及应用提供了理论依据。     

雷帕霉素联合ZD55-TRAIL病毒对肿瘤抑制及其机制探讨

溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性研究一直是一个热点。目前已有商业化的ONYX-015、H101溶瘤腺病毒。在此基础上,科学家又进一步发展形成基因-病毒治疗方案,如文中应用的ZD55-TRAIL病毒。本研究利用刘新垣实验室提供的携带TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TNF相关的凋亡诱导配体)的溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL联合雷帕霉素杀伤肿瘤     

莲状虫草及其刺束梗孢无性型

报道采自安徽省万佛山自然保护区的一种寄生在蜘蛛上的虫草标本,经鉴定为莲状虫草Cordycepsnelumboides。经多批次利用子囊孢子分离得到其刺束梗孢无性型Akanthomyces,属首次报道,并在人工固体培养基上得到了与野生标本一致的子实体,从丽确证了有性型与元性型之间的对应关系。经研究发现,KOBAYASI和SHIMIZU对莲状虫草次生子囊孢子的原始描述可能有误。     

人乳头状瘤病毒感染与肺癌关系的研究进展

近年越来越多的研究发现肺癌组织中有人乳头状瘤病毒（human papillomavirus,HPV）DNA和癌蛋白的检出,其检出率具有地域差异性,但不同地方HPV检出亚型具有高度的一致性,主要是高危型HPV-16和HPV-18。HPV可能主要通过血液循环从宫颈癌病灶等原发部位转移到肺,从而可能诱发肺癌的发生。HPV诱发肺癌的机制可能与影响p53的失活及端粒酶的激活等有关。     

高危型人乳头瘤病毒、P16和ki67在宫颈上皮内瘤变临床意义及相互关系

目的:探究P16、ki67和高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)在宫颈上皮内瘤变中诊断临床意义,并就上述指标的相关性进行分析。方法:选择2019年1月至2019年12月于我院接受治疗的31例宫颈炎患者、45例上皮内瘤变患者(其中25例为低级别上皮内瘤变,20例为高级别上皮内瘤变)为研究对象,分别对上述患者采用免疫组化法检测P16和ki67的表达,并采用PCR法对高危型人乳头瘤病毒的表达进行检测,而后实施组间比对。结果:高级别人乳头瘤变组和低级别人乳头瘤变高于宫颈炎组(P<0.05),高级别人乳头瘤病变组感染率高于低级别人乳头瘤变组,但是对比无统计学意义(P>0.05);P16表达阳性率由高至低为高级别内瘤变组、低级别内瘤变组和宫颈炎组,各组间表达阳性率比对差异具有统计学意义(P<0.05);ki67表达阳性率由高至低为高级别内瘤变组、低级别内瘤变组和宫颈炎组,各组间表达阳性率比对差异具有统计学意义(P<0.05);P16和ki67表达阳性率与HPV16/18感染率呈正相关联系(P<0.05)。结论:高危型人乳头瘤病毒、P16以及ki67对宫颈上皮内瘤变具有较好的诊断鉴别价值,可依据上述指标判断患者病程进展程度,对临床治疗具有一定指导意义。     

尿神经突起导向因子1、肾损伤分子-1、视黄醇结合蛋白水平与妊娠期高血压疾病早期肾损伤的关系研究

摘要 目的：研究尿神经突起导向因子1（Netrin-1）、肾损伤分子-1（Kim-1）、视黄醇结合蛋白（RBP）水平与妊娠期高血压疾病（HDCP）早期肾损伤的关系。方法：将我院从2017年2月～2020年2月收治的HDCP患者80例纳入研究,按照HDCP严重程度分作妊娠期高血压组22例、轻度子痫前期组32例、重度子痫前期组26例,另随机选取同期于我院接受规律孕产检以及分娩正常妊娠孕妇40例作为正常妊娠组,检测并比较各组尿Netrin-1、Kim-1、RBP水平。此外,将HDCP患者按照是否出现早期肾损伤分作肾功能损伤组42例和肾功能正常组38例,比较两组尿Netrin-1、Kim-1、RBP以及肾功能指标水平,并进行相关性分析,通过Logistic回归分析HDCP早期肾损伤的影响因素。结果：正常妊娠组、妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组尿Netrin-1水平呈逐渐降低趋势,而尿Kim-1、RBP水平均呈逐渐升高趋势,多组数据间两两对比差异均有统计学意义（均P＜0.05）。肾功能损伤组尿Netrin-1水平低于肾功能正常组,而尿Kim-1、RBP以及血尿素氮、血肌酐、24 h尿白蛋白排出量（UAE）水平均明显高于肾功能正常组（均P＜0.05）。经Pearson相关性分析可得：HDCP早期肾损伤患者尿Netrin-1水平和血尿素氮、血肌酐、UAE均呈负相关关系,而Kim-1、RBP水平和血尿素氮、血肌酐、UAE均呈正相关关系（均P＜0.05）。经Logistic回归分析发现：尿Netrin-1是HDCP早期肾损伤的保护因素,而尿Kim-1、RBP是HDCP早期肾损伤的危险因素（均P＜0.05）。结论：随着尿Netrin-1水平的降低以及Kim-1、RBP水平的升高,HDCP早期肾损伤风险越高,检测尿Netrin-1、Kim-1、RBP水平可能有助于评估HDCP的病情严重程度和肾功能损伤。     

瘤背石磺Egr-1基因的克隆、分析及低频声音刺激对其表达的影响

早期生长反应因子1(Egr-1)基因又名为Zif268、NGFI-A、Krox-24、Tis8、ZENK,分布于脊椎动物的神经细胞中,参与识别功能相关的神经活动.本研究通过cDNA末端快速扩增法(RACE)获得瘤背石磺(Onchidium reevesii)Egr-1基因全长序列,进行蛋白质特征分析、氨基酸序列预测以及Egr-1基因的组织差异表达,并检测了不同低频声音(0～200 Hz)刺激0～24h后Egr-1基因表达量的变化.结果显示:瘤背石磺Egr-1基因cDNA序列全长2 556bp,含134 bp的5'端非编码区、709 bp的3'端非编码区和1 713 bp的开放阅读框,编码570个氨基酸.瘤背石磺Egr-1蛋白分子质量为61.31 kD,理论等电点为6.14,平均疏水指数-0.491,不含信号肽;二级结构和三级结构预测显示有α螺旋和β折叠.瘤背石磺Egr-1基因在其腹足、背部皮肤、神经节、肝胰腺、两性腺中均有表达,在神经节和两性腺中高表达,背部皮肤和肝胰腺中组织表达量最低(P＜0.05).相比对照组,受到低频声音刺激0.5 h,后瘤背石磺神经节中Egr-1基因的表达量显著升高,且不同频率声音间表达量差异显著(P＜0.05),推测Egr-1基因参与了瘤背石磺识别低频声音功能相关的神经活动,所得结果为进一步研究瘤背石磺识别处理声音信息的分子机制提供重要的基础数据.