piRNA：一类新的非编码小RNA

piRNA（Piwi-interacting RNA）是从哺乳动物生殖细胞中分离得到的一类长度约为30nt的小RNA,并且这种小RNA与PIWI蛋白家族成员相结合才能发挥它的调控作用。目前,越来越多的文献表明piRNA在生殖细胞的生长发育中的调控是由于Piwi-piRNA复合物引起的基因沉默导致的,但由于对piRNA的研究尚处于初级阶段,它的一些具体的功能和生源论尚在研究当中。本文主要综述了piRNA的最新研究进展。     

己烯雌酚抑制斑马鱼精子发生及其可能的分子机制

为研究内分泌干扰物己烯雌酚(DES)对鱼类精巢发育和配子发生的影响, 研究用DES(0.1、1和10 g/L, 暴露20d)对内分泌干扰研究的经典模式动物斑马鱼(Danio rerio)雄性成鱼进行了处理。组织学研究结果表明, DES严重影响斑马鱼精子发生。同时, 研究克隆了斑马鱼与生殖细胞发育和减数分裂相关的vasa、dmc1的部分cDNA, 对其组织和细胞表达模式进行了研究。结果表明, vasa仅表达于精巢的精原细胞、初级精母细胞和卵巢不同时期的生殖细胞; 而dmc1则表达于精巢精母细胞和卵巢卵母细胞发育早期。半定量PCR结果表明, DES处理后vasa的表达没有明显变化; 而dmc1的表达则被明显抑制, 且呈时间依赖性和剂量依赖性效应; 而转录因子dmrt1和雄激素合成关键酶基因P450 11的表达也被显著抑制。因此本研究推测, DES可能通过抑制dmrt1和P450 11的表达诱导了斑马鱼生殖细胞凋亡; 并通过抑制dmc1的表达阻碍了减数分裂。       

生殖细胞及性腺移植

生殖细胞和性腺移植研究近年来已取得了突破性进展。这两项技术对于农业、医学及动物繁殖学的研究具有深远的意义和很大的应用价值。本文从同源移植、异源移植、移植技术及其它移植相关问题等方面对生殖细胞和性腺移植进行了简要介绍,并阐述了近年来在这方面所取得的进展。     

人胚胎干细胞建系的研究现状与存在的问题

人胚胎干细胞系的建立,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程,就建系的几种方案、路线、意义和可行性进行了探讨;详细系统地说明了迄今为止建立人胚胎干细胞系所需要的饲养层类型、培养基组成、添加细胞因子种类及其作用;分析了建立和维持人胚胎干细胞系所需消化酶的种类及其作用以及目前常用的几种传代方法;从若干方面总结了人胚胎干细胞系的鉴定方法,并对建立和维持人胚胎干细胞系中存在的若干问题进行了剖析,提出了目前急待解决的问题。     

七十年的细胞重建研究

~~七十年的细胞重建研究@贝时璋$中国科学院生物物理研究所!北京100101~~     

西瓜生殖细胞向圆球形变化的超微结构研究

从超微结构水平上研究了西瓜生殖细胞从凸透镜形到圆球形的变化。细胞变圆过程中发生细胞器重新分布：刚产生的细胞中细胞器随机分布,变圆的细胞中细胞器分布呈现极性,与花粉壁相邻区域内质网堆叠而线粒体稀少,相反,向着花粉中心区域线粒体大量聚集而内质网稀少;细胞器重新分布表明生殖细胞在结构上建立了极性。细胞变圆有助于脱离花粉壁。细胞核对着花粉壁的一面有凹陷,凹陷中有内质网和核糖体。     

不同时期鸡胚原始生殖细胞分离的研究

采用Ficoll密度梯度离心,酶解离两种方法在鸡胚孵化的第14期、19期、28期,分离、培养鸡胚中的原始生殖细胞(PGCs)。探索PGCs分离、培养的适宜时期及方法,以期获得较多数量,较高活力的PGCs作介导生产转基因鸡。结果表明：1．提取、分离PGCs的最佳时期依次为19期、28期。2．两种分离方法均能分离到一定数量的PGCs细胞。但在19期和28期,酶解离法分离到的PGCs的相对数量较多,存活时间较长,是一种较适宜的分离方法。     

第二十八期鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存

采用Ficoll密度梯度离心 ,提取第 2 8期 (孵化 13 2h)性腺中的PGCs ,对其应用不同的冷冻保护剂和不同的平衡方法进行冷冻保存 ,并于复苏后进行体外培养。复苏后的PGCs用台盼蓝染色检测其存活率 ,结果发现 :从第 2 8期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护液下 ,采用不同的平衡方法进行冷冻 ,对PGCs的存活率有显著影响 (P <0 .0 5 ) ;平衡方法相同 ,在不同冷冻保护液条件下 ,冷冻保护液III的冻存效果最好 ,与其他保护液之间存在显著 (P <0 .0 5 )或极显著 (P <0 .0 1)差异。冷冻保护液V和冷冻保护液VI二者对PGCs的冻存效果次之。冷冻保护液I、冷冻保护液II和冷冻保护液IV三者对PGCs的冻存效果最差。PGCs经体外培养 2 4小时后再进行冷冻保存 ,复苏后其存活率、体外培养存活时间均极 (P <0 .0 1)显著短于分离后直接冷冻的PGCs。     

鸡胚原始生殖细胞的分离和鸡鸭嵌和体的制备

探索了鸡胚12～17期血液中的原始生殖细胞(PGCs)迁移数量变化规律,将其在液氮中冷冻保存.并以Ficoll密度梯度离心、MiniMACS磁气分离、滤膜三种方法对PGCs进行分离,结果发现12～17期血液中均有PGCs存在,13期达到高峰约47.1±10.5个/μl,在血液中比例为0.0126%.冷冻保存3个月后解冻成活率达80%以上.三种分离方法所得的分离效果分别为95.7%、39.2%、63.0%,纯度为27.5%、8.4%、3.1%.将分离的原始生殖细胞以微注射法转移至14～15期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌和体,获得8只雏鸭(8/110).以鸡W染色体探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测到鸡原始生殖细胞,嵌和率达84.2%(16/19).表明鸡原始生殖细胞能够迁移定居到鸭胚性腺中,并有可能增殖分化成有功能的配子.     

多氯联苯对鸡胚原始生殖细胞的损伤作用

目的：本实验研究了PCB以及雌二醇（E2）,睾酮（T）和雌激素受体阻断剂克罗米酚（clomiphen)对5日龄鸡胚性朱中原始生殖细胞（PGC）形态和数量的影响,并对胚胎性腺受损伤程度进行了评价。方法：在入孵前将PCB（Aroclor 1254)油剂注入海兰种蛋卵黄内,实验组中PCB的剂量分别为1,10,100ug/枚;E2和T油剂注射剂量均为10,100ug/枚;克罗米酚,克罗米酚和Aroclor 1254均为100ug/枚,体积均为100ul;对照组注射等量花生油,孵化温度为38度,相对湿度60％,孵化111－120h后取出胚胎进行全固定,经石蜡切片和高碘酸席夫试剂染色后观察性腺中的PGC。结果（1）与对照组相比,PCB延缓鸡胚发育,但是鸡胚死亡率与PCB的剂量不呈现剂量依赖关系,最大死亡率在PCB 1ug/枚组;（2）性腺中的PGC的数量随PCB注射剂量的升高而显著降低,而且左侧性腺比右侧性腺明显,在PCB 100ug/枚组的性腺中,PGC发生了空泡化和核固缩甚至成为空洞;（3）PCB可以导致鸡胚性腺中PGC的损伤程度显著加强;（4）E2,T和克罗米酚处理后,对性腺中的PGC没有显著影响;（5）注射PCB和克罗米酚后,对性腺中PGC的影响与Aroclor 100ug/枚组的结果相同,结论：PCB对鸡胚生殖的影响早在PGC定居性腺就开始了,且对PGC的影响只表现其毒性作用,并没有通过类性激素作用影响PGC的形态和数量。