金鱼草XTH家族基因鉴定及抗核盘菌和雄蕊瓣化相关基因筛选

木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶(XTH)属于糖苷水解酶16家族(GH16),是一类介导木葡聚糖(XyG)-纤维素骨架构建和重组的酶。为探明XTH家族基因在金鱼草(Antirrhinum majus)中的潜在生物学功能,通过生物信息学分析,结合转录组测序(RNA-seq)和实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)探究了XTH家族基因分别在金鱼草瓣化和非瓣化雄蕊以及抗感核盘菌材料中的表达水平。结果表明,鉴定出的33个AmXTH蛋白主要保守基序为ExDxE,分为3个亚组。AmXTH基因启动子的顺式作用元件多为生长发育、抗病及抗逆类。经RNA-seq和qRT-PCR验证,最终挖掘出4个正向介导抗病的关键候选基因(AmXTH3、14、18和33), 1个负向介导抗病的关键候选基因(AmXTH23), 12个正向介导雄蕊瓣化的关键候选基因(AmXTH1、7、9、11、21、22、23、24、26、28、29和33)以及2个负向介导雄蕊瓣化的关键候选基因(AmXTH15和31);其中AmXTH23和AmXTH33可能同时在金鱼草抗核盘菌和雄蕊瓣化中发挥作用。该研究初步挖掘出参与金鱼草抗核盘菌及雄蕊瓣...     

巴西橡胶树去泛素化酶UCHs基因的克隆及功能分析

为探究去泛素化酶中泛素羧基末端水解酶（UCHs）在巴西橡胶树乳管泛素化过程中发挥的潜在功能,从巴西橡胶树中成功分离2个UCHs家族成员（HbUCH-L3和HbUCH-L5）的全长序列,开放阅读框分别长993、558 bp,编码330、185个氨基酸,具有典型的UCHs结构域;qRT-PCR结果表明HbUCH-L3和HbUCH-L5在各组织中均有表达,且在胶乳中表达丰度较低;HbUCHs重组蛋白的体外泛素化底物切割试验表明,HbUCH-L3和HbUCH-L5均具有水解泛素的功能。HbUCHs显著降低C乳清中总蛋白整体泛素化水平,且HbUCH-L3去泛素化酶活性高于HbUCH-L5。由此推测橡胶树UCHs在乳管中参与维持泛素化动态平衡进而发挥其特定的生物学功能,但具体的作用及调控机制尚不清楚。     

斜卧青霉纤维素酶系的酶学研究

使用包括疏水相互作用色谱在内的多种色谱分离技术,对斜卧青霉的纤维素酶进行了系统的分离纯化。共分得一种β一葡萄糖苷酶,六种β一葡聚糖纤维二糖水解酶和八种内切β一葡聚糖酶组分。其中六种分别进一步分离为二到六个亚组分。多数达到电泳纯。系统地研究了各组分的分子组成和酶学特征。并用计算机对各酶组分及其它来源的纤维素酶组分的氨基酸组成进行了绕计分析,推论了它们之间的相互关系。据以提出转译后修饰的假说,以解释纤维素酶系多组分性和微异质性产生的原因。     

不同生境芦苇tRNA的分离纯化及氨酰化特性研究

用苯酚法,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ＿（２５）柱层析分离并纯化了河西走廊分布的不同生境芦苇的ｔＲＮＡ。用ｔＲ－ＮＡ结合￣３Ｈ－Ｌｅｕ、￣３Ｈ－Ｇｌｙ及￣３Ｈ－Ａｌａ的氨酰化活性研究了四种生境芦苇的ｔＲＮＡ氨酰化特性。结果表明,三种￣３Ｈ－氨基酸的ｔＲＮＡ氨酰化活性在不同生境之间及同一生境芦苇的不同发育时期表现出极大差别;ｔＲＮＡ含量也存在类似的变化,表现在沙生芦苇与沼泽芦苇５－９月份含量均增高,盐化草甸－沙丘过渡带芦苇中ｔＲＮＡ含量均较其它生境芦苇低,而盐化草甸芦苇中以７月份含量最高;蛋白水解酶活性除沙生芦苇９月份降低外,其余三种生境芦苇均呈增高趋势;蛋白质含量在盐化草甸芦苇中与总氨酰化活性变化相一致,而过渡带芦苇与蛋白水解酶活性变化类似,沙生芦苇５月份表现为水解占优势后期则主要与合成有关,沼泽芦苇７、９月份却与水解相关。产生这些结果的原因之一是芦苇代谢对各自生境适应的差异性。     

国人睾丸、附睾和输精管的水解酶的组织化学观察

本文报导国人睾丸、附睾和输精管的ＮＳＥ,ＡＣｈＥ,ＣｈＥ,ＡＬＰ,ＡＣＰ,５＇－Ｎａｓｅ,Ｇ－６－Ｐａｓｅ,β－ＧＡ,β－ＧＲ,ＡＰ－Ｍ,ＡＴＰａｓｅ和ＴＰＰａｓｅ水解酶的组织化学活性、结果显示：睾丸曲细精管的ＡＬＰ,５＇－Ｎａｓｅ和ＡＴＰａｓｅ;睾丸间质细胞的ＮＳＥ,ＡＬＰ,ＡＴＰａｓｅ和ＡＣＰ;睾丸间质中的ＮＳＥ,ＡＬＰ和ＡＴ－Ｐａｓｃ;睾丸输出小管和附睾管上皮的ＮＳＥ,ＡＬＰ,ＡＣＰ,５’－Ｎａｓｅ,β－ＧＡ,β－ＧＲ,ＡＴＰａｓｅ和Ｔｐｐａｓｅ;附睾头部间质中的ＮＳＥ,ＡＣｈＥ,ＡＬＰ,和ＡＴＰａｓｅ;输精管上皮细胞的ＡＴＰａｓｅ的酶活性均呈强阳性或极强阳性。说明人类睾丸、附睾和输精管含有丰富的水解酶,尤其是附睾头部的输出小管、附睾管和头质均含有种类多活性高的水解酶,在精子的功能成熟上起了重要的作用,提示其可能作为生育与不育诊治中的重要指标。     

内内葡聚糖苷水解酶的分离纯化和内源荧光性质

利用离子交换和分子筛层析技术从拟康氏木霉Ｓ－３８固态发酵液中提纯了两个内切葡聚糖苷酶组分。测定了一个组分的内源荧光性质。结果表明：该酶分子的内源荧光几乎都来自色氨酸。Ｎ－溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）修饰导致了酶活力的完全丧失,但是酶荧光残留了２５％,抑制剂纤维二糖与酶结合可使部分酶荧光得到保护,同时这种结合也可以保护一定的色氨酸荧光不被外来淬灭剂淬灭。     

小麦返白系返白阶段叶片蛋白质变化与叶绿素含量的关系

小麦返白系春天出现白色心叶。白叶中有脱辅基蛋白存在,但含量很低。白叶复绿时色素条带中ＣＰⅡ出现先于ＣＰＩ;叶绿素含量的增加与色素蛋白的出现呈正相关,同时影响蛋白含量,但２１、２５ｋＤ蛋白即使在全白叶中也有较高水平。白叶中ＲｕｂｉｓｃｏＬＳ含量极低,而ＳＳ仅略有降低。复绿初期蛋白质合成速率随叶绿素含量增加而显等提高,ＬＳ也迅速增加。     

肌苷产生菌中降低核苷水解酶的研究

本研究以枯草杆菌肌苷产生菌ＳＤ９４０１（Ａｄｅˉ＋Ｔｈｉˉ＋Ｈｉｓˉ＋８—ＡＧｒ＋６－ＭＰｒ）为出发菌株,经紫外线和硫酸二乙酯诱变,在以肌苷为唯一碳源的补充培养基上筛选到一株核苷水解酶缺失菌株。实验结果表明这一突变株积累比亲株高３０％左右的肌苷,平均达到２６．８９ｍｇ／ｍｌ,最高到２８．０３ｍｇ／ｍｌ。且发酵液中未测出次黄嘌呤。     

坚强芽孢杆菌三个淀粉酶基因的克隆和表达

以pUC18为载体,用鸟枪法从产淀粉水解酶的坚强芽孢杆菌725菌株中得到三个产淀粉水解酶的重组质粒,在大肠杆菌中表达。用高压液相色谱分析了三个表达的酶的淀粉水解产物,其中pBA135和pBA150表达的酶的淀粉水解产物主要是麦芽糖,具β-淀粉酶的性质。pBA140表达的酶的淀粉水解主要产物除麦芽糖外还有一糖,三糖和四糖。pBA135编码的酶有较好的热稳定性,60℃保温30min,活性保留70％以上,最适反应温度55-60℃。而在同样条件下pBA150编码的酶仅保留37％的酶活,最适反应温度50℃。     

产腈水解酶基因工程菌的产酶诱导条件及培养基优化

本文通过对产酶诱导条件及发酵培养基进行优化,成功提高了产腈水解酶基因工程菌E. coli BL21(DE3)-pETNYNit的产酶水平。研究结果显示,最佳发酵培养基为：葡萄糖0.2%、甘油0.7%(v/v)、蛋白胨1.2%、酵母膏0.8%、NaCl 0.3%、(NH4)2SO40.3%、NH4Cl 0.13%、Na2 HPO4·12H2 O 1.04%、KH2 PO40.39%、MgSO4·7H2 O 0.03%,pH 7.2。最佳产酶诱导条件为：发酵4 h时加入0.5 mmol/L IPTG,然后在28℃、240 r/min下诱导腈水解酶基因表达14 h~16 h。采用优化方案,重组菌产酶水平可提升至0.9~1×105 U,与野生菌株的产酶水平相比,提高幅度超过50%。同时重组菌培养仅需24 h,培养周期缩短超过50 h。