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991.
将胰岛素原基因融合到金色葡萄球菌蛋白A的基因上,构建成大肠杆菌中基因融合的外分泌表达载体。它能高效表达且有效地分泌表达产物。利用亲和层析能方便地从培养液中分离出融合蛋白。融合蛋白经CNBr裂解后,经反相HPLC分析,分离得到具有天然结构的胰岛素原并进行了鉴定。 相似文献
992.
以Swaisonine(Sw)作为高尔基体付糖链加工酶系中α-甘露糖苷酶Ⅱ的特异抑制剂,研究N-糖链结构和胰岛素受体(Ins-R)功能的关系.发现Sw不影响细胞生长和3H-亮氨酸参入SMMC7721细胞,但明显促进3H-甘露糖参入细胞总糖蛋白和表面糖蛋白,并使后者的ConA强结合组分显著增加,提示Sw使Ins-R的N-糖链变成杂合型及高甘露糖型。胰岛素结合试验后作Scatchard分析:发现Sw不改变Ins-R的结合容量和每个细胞表面的结合位点数,也不改变结合动力学。再用部分纯化的Ins-R研究自身磷酸化和对外源底物的酪氨酸蛋白激酶活力,也未发现Sw处理和对照细胞间的明显区别,表示Sw也不影响Isn-R的跨膜信息传递,结合已报道的衣霉素使细胞表面Ins-R减少的结果,提示Ins-R运送至细胞膜需要N-糖链存在,但糖链的类型对INS-R的代谢和结合动力学并不重要 相似文献
993.
研究了野生型Aγ珠蛋白基因、中国型胎儿血红蛋白持续存在综合症(HPFH)Aγ基因(启动子区─196C→T突变)及希腊型HPFHAγ基因(─117G→A突变)在鼠红白血病(MEL)GM979细胞中的表达。比较每个整合的Aγ基因表达的mRNA量,─196C→T突变Aγ基因未显示比野生型Aγ基因明显增加的表达水平,而─117G→A突变Aγ基因在未分化的及HMBA或丁酸钠诱导分化的MELGM979细胞中的表达水平增加到野生型Aγ基因相应水平的2.3倍至3.1倍。此结果提供了又一个实验证据,说明启动子─117G→A突变是希腊型HPFH中胎儿Aγ基因在成人中持续活跃表达的原因,这也为β地中海贫血和镰刀性贫血的基因治疗提供了新途径,即可以考虑用转移─117G→A突变Aγ基因的方法改善患者的贫血症状。 相似文献
994.
SMMC-7721细胞经10μmol/L视黄酸(RA)处理1-5天后,完整细胞或纯化胰岛素受体(Ins-R)对胰岛素(Ins)的结合容量逐日降低。^%35S-甲硫氨酸参人Ins-R明显减少,特别是β亚基。部分纯化Ins-R的酷氨酸蛋白激酶(TPK)活力也随RA处理时间延长而逐步降低。结果表明RA降低Ins-R的表达。但RA并不改变Ins-R与Ins结合的亲和力和它的负协同效应。 相似文献
995.
奶中的胰岛素样生长因子及其作用 总被引:1,自引:0,他引:1
奶中的胰岛素样生长因子及其作用贺淹才(江西农业大学畜牧兽医学院南昌330045)奶中的胰岛素生长因子和其他生长因子哺乳动物的奶中含有新生动物生长发育所必需的一切营养成分。奶中含有水、蛋白质(主要是酪蛋白、乳清蛋白和乳球蛋白)、脂肪(油酸、软脂酸和其他... 相似文献
996.
[B3-Lys]-胰岛素的研究:受体结合及生物活性 总被引:3,自引:0,他引:3
本文用125T-[B3-Lys]-胰岛素和125Ⅰ-胰岛素研究了[B3-Lys]-胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜(HPM)胰岛素受体结合特性并进行了比较。实验结果表明[B3-Lys]-胰岛素与EPM胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的[B3-Lys]-胰岛素和猪胰岛素的IC(50)值分别为0.65和1.11nmol/L。经Scatchard分析得出[B3-Lys]-胰岛素与HPM胰岛素受体中高亲和位点和低亲和位点结合的亲和常数分别为1.72×109和2.27×106L/mol,而猪胰岛素分别为1.26×109和1.47×106/mol。促脂肪细胞合成脂肪实验结果表明[B3-Lys]-胰岛素也同样具有比天然猪胰岛素更高的离体生物活力,EC(50)分别为0.175和0.301nmol/L。可见[B3-Lys]-胰岛素的受体结合能力和高体生物活力都为猪胰岛素的1.7倍。 相似文献
997.
[B3—Lys]—胰岛素的研究:受体结合及生物活性 总被引:2,自引:1,他引:1
本文用^125I-[B3-Lys]-胰岛素和^125I-胰岛素研究了[B3-Lys]-胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合物性并进行了比较。实验结果表明[B3-Lys]-胰岛素与HPM胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的[B3-Lys]-胰岛素和猪胰岛素的IC(50)值分另为0.65和1.11nmol/L。经Scatchard分别得出[B3-Lys]-胰岛素与HPM胰岛素 相似文献
998.
高效融合表达中载体蛋白对hIGF—I免疫原性结构形成的… 总被引:3,自引:0,他引:3
利用人工全合成人胰岛素样生长因子I(hIGF-I)基因,构建了分别以β-半乳糖苷酶的三种即含590、310、280个氨基酸序列片段和一种以Protein A、C结构域为载体蛋白的融合型表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了以上各种hIGF-I的融合蛋白产物。通过对羟胺裂解前后的hIGF-I产物进行放射免疫结合测定分析;结果显示以β-Gal590、310、280为载体蛋白;均严重影响与其融合的hIGF- 相似文献
999.
通过化学半合成从天然猪胰岛素得到[Bl-Ala,B2-Ala]-胰岛素,这一胰岛素类似物经聚丙烯酰胺凝胶电泳和HPLC鉴定证明是均一的,氨基酸组成与理论值相符,生物活性测定结果表明:[Bl-Ala,B2-Ala]-胰岛素的体内活力与天然猪胰岛素相同,而与人胎盘细胞膜胰岛素受的结合能力为天然猪胰岛素的132%。这一结果进一步说明胰岛素B链N端肽段参予与受体相互作用,此外,[Bl-Ala,B2-Ala 相似文献
1000.
本文研究了人肝癌细胞SMMC-7721的胰岛素受体与^125I-胰岛素结合的条件,并比较了衣霉素处理和对照细胞的结合动力学和内吞作用。结果表明:4℃和PH8是研究胰岛素受体与配体结合的较佳条件,当0.1ug/ml衣霉素处理18小时,Scatshard作图分析指出,胰岛素受体的结合容量降低,每个细胞上的受体位点数减少。Hill作图分析说明,胰岛素和受体的亲和力(胰岛素半饱和浓度和表观解离常数)及结合 相似文献