多重PCR方法快速检测4种主要致腹泻性大肠埃希菌

肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)和侵袭性大肠埃希菌(EIEC)是引起腹泻的主要大肠埃希菌,威胁着食品安全和人类健康,建立同时检测4种致腹泻性大肠埃希菌的方法具有重要意义。基于ETEC LT肠毒素基因、EPEC bfpA基因、EHECO抗原基因和EIEC侵袭性质粒特异性基因,设计了4对特异性引物,通过对单一PCR反应条件的优化建立了快速检测4种主要致腹泻性大肠埃希菌的多重PCR方法,彼此之间无交叉反应。该多重PCR方法具有良好的特异性和灵敏性,对24株致病菌进行检测,所试4株致腹泻性大肠埃希菌均为PCR阳性,其他菌株则为阴性。实践证明,利用所建立的多重PCR方法对124份肉类、奶类制品及人工污染样品等进行检测,检出15份阳性,与国标(GB4789.6-1994)检测结果相同。结果表明本文建立的多重PCR方法可用于ETEC、EPEC、EHEC和EIEC的单一或混合感染的鉴别诊断及食品安全风险评估,具有良好的实用性。     

铁皮石斛腋芽的快速繁殖

目的利用组织培养技术建立铁皮石斛的高效快繁体系,克隆繁殖种苗,为野生居群的恢复提供材料。方法以铁皮石斛腋芽为外植体,研究不同浓度和配比的基本培养基、激素以及天然提取物对腋芽萌发生长,丛生芽的诱导增殖以及壮苗生根的影响,比较不同培养阶段的增殖倍数,筛选各时期的最适培养基。并对试管苗的形态学特征进行了调查。结果1/2MS+NAA 0.2 mg/L+BA 1 mg/L适合腋芽的成活生长。BA与香蕉汁组合有利于丛生芽的诱导增殖,其最适比例为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+BA 2.0 mg/L+香蕉汁100 g/L,增殖倍数最大可达14.0,平均增殖倍数为6.4。培养基中添加100 g/L香蕉汁或200 g/L马铃薯汁均有利于壮苗生根。结论铁皮石斛通过腋芽形成丛生芽途径建立高效的快繁技术体系获得优质种苗是可行的。     

结香的组织培养和快速繁殖

1 植物名称 结香（Edgeworthia chrysantha Lindl.）。     

八宝景天的组织培养和快速繁殖

1植物名称八宝景天(Sedumspectabile‘StarDust’)。2材料类别顶芽茎段。3培养条件以MS为基本培养基。(1)启动培养基:MS+2,4-D0.5mg·L-1(单位下同)+KT0.5+6-BA0.5;(2)不定芽增殖培养基:MS+6-BA0.1+NAA0.1;(3)生根培养基:1/2MS。以上培养基均含3%蔗糖、0.6%琼脂,pH5.8￣6.0。培养温度(25±2)℃,光强40￣60μmol·m-2·s-1,光照时间16h·d-1。4生长与分化情况4.1无菌材料的处理从圃地栽植的植株上剪取幼嫩顶芽茎段,用洗涤剂溶液浸泡、振荡20min,流水冲洗1￣2h备用。在超净工作台上,用70%酒精灭菌10￣15s,0.1%HgCl2消毒2min,无菌水…     

狭叶松果菊的组织培养与快速繁殖

1植物名称狭叶松果菊（Echinacea angustifolia DC．）。 2材料类别种子。     

石香薷的组织培养与快速繁殖

1植物名称 石香薷（Mosla chinensis Maxim．）,又名青香薷、细叶香薷、小香菜、华荠苎。 2材料类别带腋芽茎段。     

羊踯躅的组织培养与快速繁殖

1植物名称 羊踯躅（Rhododendron molleG．Don）。 2材料类别当年生茎尖或茎段。     

耳叶补血草的组织培养与快速繁殖

1植物名称 耳叶补血草（Limonium otolepis Kuntze）。 2材料类别花茎。     

圆叶蒙桑的组织培养与快速繁殖

1植物名称圆叶蒙桑(Morus mongolica var.rotundifolia)。2材料类别茎及茎尖。3培养条件以MS为基本培养基。(1)诱导及增殖培养基:MS+6-BA1mg·L-1(单位下同)+NAA0.1。(2)生根培养基:1/2MS+IBA1。以上培养基中均加入3%的蔗糖和0.8%琼脂,pH5.8。培养温度为(24±2)℃,光照时间12h·d-1,光强40μmol·m-2·s-1左右。4生长与分化情况4.1芽的诱导采集无病虫害、生长健壮的圆叶蒙桑枝条,剪掉叶片后用流水冲洗干净,在超净台上,剪成0.5～1.0cm的茎段和茎尖,放置在75%的酒精中浸泡20s,无菌水冲洗3～4遍,用次氯酸钠灭菌10min,再用无菌水冲洗3～4…     

银叶竹芋的组织培养和快速繁殖

1植物名称银叶竹芋(Ctenanthe setosa‘Greystar’)。2材料类别当年生茎节。3培养条件芽诱导培养基:(1)MS+BA1mg·L-1(单位下同)+NAA0.1;(2)继代增殖培养基MS+BA6+NAA0.05;(3)生根培养基MS+NAA0.5。以上培养基均附加3%蔗糖(生根培养基中为2%)、0.6%琼脂。pH5.8,培养温度(26±1)℃,每天光照12h,光强40μmol·m-2·s-1。4生长与分化情况4.1无菌材料的获得取当年生茎节,除去根状物,自来水冲洗表面20min。将茎节切成约2cm的小段,每段一芽,在超净工作台上,用75%的酒精浸泡30s,再置于0.1%升汞溶液(加1～2滴吐温20)中消毒10min,然后用无…