酵母ADH2—SUC2融合启动子的构建及其对基因表达的调控

将ＡＤＨ２基因的ＵＡＳ与带有不同长度缺失上游区的ＳＵＣ３基因融合,构建成４种具有不同融合启动子的ＳＵＣ２基因的表达质粒ＹＲＤ１１０１．ＹＦＤ１１０△９．ＹＦＤ１１０△１７、ＹＦＤ１１０△１１。将这些质粒及对照表达质粒ＹＦＤ２６△１．ＹＦＤ２５转化酵母菌Ｙ３３,在阻遏与去阻遏培养条件下,对各种转化子所产生的蔗糖酶进行了活性测定和组分分析。结果表明：在葡萄糖去阻遏生长条件下,ＹＦＤ１１０△１的启动子组合中ＵＡＳｓｕｃ２和ＵＡＳＡＤＨ２对ＳＵＣ２基因的表达有协同激活作用。在阻遏条件下Ｙ３３／ＹＦＤ１１０△１与Ｙ３３／ＹＦＤ１１０△９、Ｙ３３／ＹＦＤ２６△１、Ｙ３３／ＹＦＤ２５一样,均表达很低的糖基化蔗糖酶,３种去阻遏培养条件比较说明,在低糖培养基中对糖基化蔗糖酶表达的去阻遏效果最佳     

酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)启动子片段的亚克隆

含有3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)的酿酒酵母染色体3.1kb HindⅢ片段,已被克隆到大肠杆菌-酵母菌穿梭载体pCN60上。Kpn Ⅰ核酸内切酶在pCN60上没有酶切位点,而在pCN60(PGK1)上仅有一酶切位点。用此酶将pCN60(PGK1)质粒完全酶切,再用Bal31从两端逐步消解碱基对,使反应终止于每端消解500bp左右,加上EcoR Ⅰlinker。用EcoRⅠ、BamH Ⅰ酶切,分离1. 9kb的DNA片段,插入用同样双酶切的酵母启动子探针载体pVC727上,转化E.coli C600,再从转化子中提取重组质粒转化酵母受体菌NA87-11A。用菌落染色法筛选出PHO5基因高效表达转化子,这个转化子质粒含有1.9kb的BamH Ⅰ、EcoRⅠ酶切片段,它具有强启动子功能,并测定其3'末端序列。     

由显微注射了金属巯基组氨酸三甲内盐-生长激素融合基因的受精卵发育而戍的小鼠生长显著

将大鼠生长激素结构基因与小鼠金属巯基组氨酸三甲内盐—Ⅰ基因启动子相融合,用此DNA片段显微注射入小鼠受精卵的原核中。由这些受精卵发育成的21只小鼠中,有7只具有融合基因,其中有6只比它们的同胎小鼠长得要显著地大。这些基因转移小鼠中,有几只在其肝脏中有很高水平的融合mRNA,在其血清中则有很高水平的生长激素。这个工作对于研究生长激素的生物学效应;作为一个加速动物生长的途径;作为巨大发育的模型;作为矫正遗传疾病的工具以及作为生产有价值的基因产物的方法,都具有潜在的意义。     

采用PL启动子在大肠杆菌中直接表达人aD型干扰素

从p8218、pUR-222、pBV-114及pKC-30组建杂交质粒pBV一867,使人aD型干扰素基因在PL启动于控制下在大肠杆菌中能够直接表达。每升菌液的干扰素平均产量为0.8 x107单位。     

表观遗传修饰介导的植物胁迫记忆

植物因其固着生长的方式, 已经进化出各类特殊的机制来适应多变的外界环境。为提高自身的存活率, 植物进化出一类胁迫记忆机制, 以适应环境和保护自己。表观遗传修饰不仅能调控植物的正常生长发育, 而且参与植物对各种非生物或生物胁迫的响应。近年的研究表明, 表观遗传修饰在植物胁迫记忆调控中也发挥重要作用。例如, DNA甲基化、组蛋白甲基化及乙酰化等表观遗传修饰参与并维持特定的胁迫记忆。该文主要对表观遗传修饰介导的植物胁迫记忆最新进展进行综述, 并展望未来的重点和热点研究方向。     

Bam HI DNA甲基化酶酶学性质的研究

以Lineweave-Burk plot双倒数作图法测得该酶对底物S-腺苷酰甲硫氨酸(SAM)的K_m=7.69×10~(-6)mol/L,在1mmol/LS-腺苷酰高半胱氨酸(SAH)存在下,Ki=7.33×10~(-4)mol/L,两条直线相交于纵轴,证明SAH是该酶的竞争性抑制剂。该酶最适pH为7.8,对热不稳定。同时还测定了该酶对不同DNA底物的专一性及盐浓度、代谢相关物’两价阳离子、某些酸根等对该酶调节性质的影响。以碘代乙酰胺修饰该酶的SH基’及用二硫苏糖醇(DTT)和巯基乙醇(MSH)保护该酶SH基所作的实验表明SH基是该酶活性中心所必需的,用高效液相色谱(HPLC)法证明该酶所甲基化的碱基为刘氏小球菌(M·L、DNA)分子中的胞嘧啶,且求得甲基化30min后所得甲基化水平为2.39％。同时也证明当用该酶将λDNA甲基化后,可使BamHI限制性核酸内切酶对甲基化后的λDNA丧失切割作用。     

二甲基苯并蒽对肺肿瘤细胞P1-450基因表达的调节

人肺肿瘤细胞(ChaGo)经二甲基苯并蒽(DMBA)处理,刺激了p 1-450基因的高水平表达,用亚致死剂量内的DMBA 处理细胞,检出了p 1-450基因的mRNA 水平随DMBA浓度和处理时间而增加;p 1-450基因的主要编码区和3’末端区“—CCGG—”序列的甲基化型式不受DMBA 处理的影响,但DMBA 处理细胞影响到基因5’末端和侧翼区的“—CC-GG—”中“—C—”残基的位点特异的低甲基化效应,这种低甲基化效应,可能关系到p 1-450基因的异常高水平表达,也可能同时存在着别的分子调节机制。     

臭曲霉(Aspergillus foetidus)启动子H8片段克隆及其序列

使用原核及真核菌通用的挑选启动子克隆载体pJGI,从臭曲霉菌体总DNA中分离到具有较好活性的启动子H8片段。根据Southern blot证明该启动子来自臭曲霉菌;H8全片段DNA序列分析结果表明其含有7 50bp,内含典型真核启动子功能序列(TA TA box)及增强子GTGG：TTTAAAG的相似序列,分析证实是一个新的臭曲霉启动子。初步实验表明该启动子不但在臭曲霉菌内有启动功能;并第一次证明来自臭曲霉菌的启动子在原核细胞中也具有启动子活性,能够表达完整的Lacz基因。