组织型纤溶酶原激活因子的分子生物学研究进展

血栓性疾病,尤其是急性心肌梗塞严重威胁着人类的生命与健康,目前国内外临床应用的溶血栓药物主要有:链激酶(streptokinase,SK)、尿激酶(urokinase,UK)以及近年来开始广泛研究和初步应用的纤溶酶原激活因子(PA)。     

牛骨髓间充质干细胞的分离培养和初步鉴定

本试验采用全骨髓法和密度梯度离心法来分离纯化和体外培养牛骨髓间充质干细胞,并研究了不同培养基和血清对BMSCs的生长的影响以及对牛骨髓间充质干细胞的初步鉴定。结果表明,全骨髓法和密度梯度离心法均可获得纯化度较高的牛骨髓间充质干细胞,并且能够分化为脂肪样细胞,为利用MSCs作为种子细胞治疗多种疾病提供试验基础,同时可以利用骨髓间充质干细胞作为核供体进行核移植的研究和动物遗传资源的保存。     

赤腹松鼠（Callosciurus erythralus）春季生境特征初步分析

2009年2月至5月,在广西龙江河畔对赤腹松鼠（C.erythralus）的春季生境特征进行了分析.野外共测量了57个10m×10m样方中的13个生态因子,并运用频次分析和主成分分析的方法,对赤腹松鼠的春季生境选择因子进行了分析.结果表明,赤腹松鼠春季生境的主要特征为：郁闭度良好,水源距离＜30m,坡度20～40°,避风性良好,坡向以东坡和南坡为主,坡位中坡位或上坡位,食物因子良好,人为干扰距离＜10m,海拔50～100m,乔木密度＜50株,乔木距离低于4m,灌木密度低于200株,灌木距离＜2m.影响赤腹松鼠春季生境选择的主要因子为郁闭度、避风性、坡度、坡位和灌木距离;次要因子为海拔、人为干扰距离、乔木距离、水源距离、乔木密度、灌木密度、食物丰富度、坡向.     

小鼠骨髓源树突状细胞体外诱导培养及初步鉴定

用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和重组小鼠白细胞介素4（rmIL-4）体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,进行形态学变化观察,分析细胞表面分子,刺激T细胞增殖,探讨小鼠骨髓源树突状细胞（BMDC）体外诱导培养并进行初步鉴定。体外培养9d后BMDC可达80%以上,光镜下可见典型的树突状细胞形态。清楚表达成熟期主要表面标志物,可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。获得了较高纯度的BMDC,避免了使用传统磁珠分离方法所带来的成本高,操作复杂,产出率低的弊端,为研究BMDC功能以及运用开展下游实验提供材料。     

诸葛菜叶色变异株系的初步观察

诸葛菜被认为是具有较高开发价值的新型园林经济植物,具有广泛的变异性,有关其自然变异的报道较少。2012年我们在野外观察中发现了4个诸葛菜的叶色变异株系,通过变异植株与同生境植株的观察比较,发现叶色变异株系的变异性状主要表现在分枝或是全株,叶片表现为白化或黄化,花色表现为白色或紫色,其中3个株系能结实,变异性状是否具有遗传特性有待于子代观察分析。本文为进一步阐明其变异机理提供了参考。     

池塘养殖斑鳢弹状病毒的分离与初步鉴定

从患暴发性死亡的斑鳢病灶中分离出一株弹状病毒。 取病鱼肝、脾、肾组织过滤液接种EPC、FHM细胞, 连续传至第3代后28℃培养35h出现细胞病变(CPE), 测得病毒半数细胞感染量为10-5.746/0.1 mL。将病变细胞制成超薄切片, 透射电镜下观察到细胞质中存在大量呈子弹状的病毒颗粒, 大小约53 nm140 nm。用上述组织过滤液及F3代细胞培养病毒液回归感染健康斑鳢均能显示与自然发病鱼相似的症状, 死亡率达100%。根据鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus, SCRV)N蛋白保守序列设计的引物对斑鳢病毒的基因组RNA进行RT-PCR扩增, 得到大小约400 bp的阳性片段。对该片段克隆、测序后与GenBank中序列进行BLAST比对, 发现该基因序列与SCRV同源性最高, 为94%。选取GenBank中已登录的病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鳢弹状病毒(SHRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、鳜鱼弹状病毒(SCRV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、狂犬病毒(RV)、牙鲆弹状病毒(HIRRV)相关序列构建系统进化树, 结果表明, 该基因序列与SCRV聚为一支。由于该病毒粒子的形态大小与SCRV(100 nm200 nm)存在一定差异, 暂将其命名为斑鳢弹状病毒(CHRV)。       

副溶血性弧菌显色培养基检测效果初步评价

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种重要的食源性致病菌, 广泛存在于各种海产品中。由于传统培养基和检测方法费时费力, 本研究设计开发了一种新型显色培养基HKC vibrio, 通过应用于人工污染样品和实际样品检验, 以法国科玛嘉弧菌显色平板CHROMagar vibrio和柠檬酸钠-硫代硫酸钠-氯化钠-蔗糖琼脂平板(TCBS)为对照, 对显色培养基HKC vibrio的灵敏性、特异性和检测效果进行了初步评价。结果表明, HKC vibrio的灵敏性与CHROMagar vibrio和TCBS相当, 并具有较好的特异性, HKC vibrio是非常有价值的分离平板, 可大大提高副溶血性弧菌的检测效率。     

用于靶向于NFAT的免疫抑制类小分子化合物筛选的细胞模型的建立

建立IL-2启动子以及NFAT-AP1增强子调控报告基因包括D2egfp或Luciferase在Jurkat细胞中瞬时表达的细胞模型。首先,利用三步连接将IL-2-promoter -255～+285处的序列插入到Pnf-Κb-D2egfp表达载体启动子上游,形成3个拷贝的前后串联的增强子序列;然后从人外周血钓取两条IL-2-promoter序列,包括-326～＋46以及-89～＋46两段基因组序列,分别替代上述重组表达载体中的TK minimal promoter, 构建所需的IL2 promoter以及NFAT-AP1 enhancer调控的报告基因表达质粒：3×NFAT-AP1-IL-2P/D2egfp和3×NFAT-AP1-TATA/D2egfp; 最后,分别将3×NFAT-AP1-IL-2P以及3×NFAT-AP1-TATA融合基因克隆到Pgl3-basic载体中,构建相应的Luciferase报告基因表达质粒。利用电转染方法将重组的报告基因表达载体瞬时转入Jurkat细胞后发现,未刺激以及PMA、离子霉素（Ionomycin）单刺激均不能激活下游报告基因的表达,只有PMA和离子霉素联合刺激才能启动D2egfp以及Luciferase的转录表达,并且5μg/Ml FK506预先作用1h能几乎完全阻断刺激剂诱导的无论是IL-2 promoter还是NFAT-AP1enhancer调控的报告基因的表达。实验结果提示,所构建的Jurkat细胞瞬时表达模型可用于靶向于NFAT信号通路的FK506类免疫抑制小分子化合物的初步筛选。     

二次通用旋转试验设计优化小米菜色素提取工艺

以小米菜为材料,以吸光度为指标,在单因素试验的基础上采用二次通用旋转试验设计,对小米菜色素的提取工艺进行了优化,建立了色素提取效果与提取温度、液料比、提取时间的二次回归数学模型,并利用该模型探讨了各因素对色素提取效果的影响。结果表明：小米菜色素初步定性为复合色素,可能包含黄酮醇和叶绿素。