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991.
将丙型肝炎病毒C+E1区基因插入到原核高效表达载体pBV221质粒中,构建了质粒pBV221HCV/C+E1作为表达载体,然后,将含有该质粒的宿主大肠杆菌进行升温诱导表达HCV/C+E1区基因,并对表达产物进行了生物活性的检测。结果表明,插入到表达载体pBV221中的HCV/C+E1基因片段能够得到有效的表达,表达产物主要为非融合蛋白形式存在于细胞中,同时这种C区和E1区连接共表达的产物保持了良好的抗原活性 相似文献
992.
胶质细胞衍生的神经营养因子成熟肽基因的克隆、表达及纯化的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过PCR的方法克隆了胶质细胞衍生的神经营养因子(gliacel-linederivedneu-rotrophicfactor,GDNF)成熟肽的基因,并将其连接到E.coli高效表达载体pET16b,在E.coli中获得高效表达.表达蛋白占菌体总蛋白21%以上,以包涵体形式存在,经体外复性后用金属螯合亲和层析的方法得到具有较高纯度和活性rhGDNF. 相似文献
993.
利用逆转录套式PCR扩增Ⅲ型中国株HCVE2/NS1基因片段,将其克隆到pcDNA3载体上.采用双脱氧链终止法测定插入片段的核苷酸序列.并与已知分离株的相应区域进行同源性比较.首次克隆出Ⅲ型中国株HCVE2/NS1基因(HC-W14),其核苷酸序列与Ⅲ型日本株HCV(HC-J6)该区域同源性为88.37%,其推定的氨基酸同源性为89.29%.而与已知的非Ⅲ型株HCV该区域相比,核苷酸及氨基酸的同源性均相对较低.Ⅲ型中国株HCV与Ⅱ型中国株HCV在E2/NS1区域有较大的变异,揭示研制我国的HCV疫苗应该考虑这种基因型之间的变异性. 相似文献
994.
毛积芳 《中国生物化学与分子生物学报》1996,12(6):633-636
利用谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合基因表达系统,大鼠20α羟类固醇脱氢酶(20αHydroxysteroidDehydrogenase,20αHSD)在大肠杆菌中得以成功地表达。亲和层析和Thrombin消化,可从融合蛋白中回收和纯化重组20αHSDSDS-PAGE、Western印迹法和酶活性测定显示,重组20αHSD具有天然蛋白质相同分子量、相似的抗原性和酶催化活性,其对NADP的K_m值和V_(max)分别为9.5μmol/L、334nmo1/(min·mg),对底物20α羟孕酮(20αHydroxyprogesterone,20αOHP)的K_m值和V_(max)分别为5.9μmol/L和347nmol/(min·mg),利用该表达系统大量制备大鼠重组20αHSD,为深入研究20αHSD的生理活性和功能创造条件。 相似文献
995.
高压力杀灭大肠杆菌的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
除传统的加热杀菌及辐照保鲜食品技术外,目前国外正在研究高压力(hydrostatic pressure)食品加工法。食品经此法处理后,可杀死绝大多数细菌,且仍能保持食品新鲜及原味,不会破坏其营养成分。这项技术已被国外列为10大关键科技之一。近来,作者以大肠杆菌为模型,研究了高压力的大小、施压时间及施压时的温度对其存活率的影响。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 菌株:大肠杆菌(Escherichiacoli No.44156)购自上海市卫生防疫站菌种室。 1.1.2 仪器:高压力设备按Paladini和Weber的设计,作者自行研制,可产生1~2500bar压力。 1.1.3 LB培养基(%):胰蛋白胨1,酵母抽提粉0.5,NaCll,pH 7.5,琼脂1.5,121℃20min灭菌 相似文献
996.
人乳头瘤病毒16型E7基因的体外扩增及其克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
人乳头瘤病毒16型E7基因是转化基因。作者设计了一对PCR引物,在引物的5′端分别引入EcoRI和HindⅢ酶切序列,以HPV16DNA为模板成功地扩增出E7基因。通过EcoRI和HindⅢ双酶切位点将E7基因定向克隆入pUC18载体,经过PCR、酶切分析和Southern印迹杂交鉴定得到E7重组克隆pHSE7、DNA序列分析表明所克隆的E7基因与已发表的HPV16E7基因序列完全一致且读框正确。 相似文献
997.
采用PCR技术从E.coli基因组片段中克隆出碱性磷酸酯酶(PhoA)的启动子和信号肽序列.在PhoA启动予5'端设计了EcoRⅠ酶切位点,在信号肽编码序列3'端设计了HindⅢ酶切位点.将PCR产物酶切后EcoRⅠ-HindⅢ片段克隆至pBR322的EcoRⅠ-HindⅢ位点,组构出含有PhoA启动子和信号肽序列的分泌表达载体pBM-Pho-1.之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之在E.coli中获得分泌表达,另采用pINⅢ载体系统以分泌方式表达了人表皮生长因子。 相似文献
998.
Tx基因与Igk基因的同源性研究及其在不同细胞株的表达 总被引:10,自引:1,他引:9
本文对以前报道的Tx基因2.8kb片段的核苷酸序列与人免疫球蛋白kappa链C区基因的核苷酸序列及其编码产物的氨基酸序列进行了同源性比较。结果表明,Tx基因与kappa链C区基因的同源性高达99.5%以上,编码区的同源性高达100%。从而提示Tx基因与kappa链C区基因可能是同一种基因。限制性内切酶图谱及Southern印迹杂交分析,也进一步支持这一观点。本文还报道了kappa链C区基因在不同细 相似文献
999.
B-E-A毒素的作用机制毛献荣(中国科学院上海生物化学研究所,上海200031)关键词B-E-A毒素,酶活力许多细菌和植物都能产生对哺乳动物有很强细胞毒性的蛋白质,并且它们在结构和作用方式上都很不同。一般根据毒素的主要的破坏位点是在胞液中(通过酶活性... 相似文献
1000.