用酵母双杂交系统筛选影响apo-AI和SR-BI相互作用的苦豆子活性成分

本文通过将苦豆子总提取物及其分离得到的10个组分加入含有AH109菌株(携带大鼠apo-AI及其受体SR-BI全基因)的培养基中,利用报告基因半乳糖苷酶活力有无变化来寻找能够促进大鼠载脂蛋白apo-AI及其受体SR-BI相互作用的激动剂.经测试,我们观察到苦豆子总提取物(K-1),在上述系统中能显著增强这两种蛋白的相互作用.继续用硅胶柱层析方法从k-1中分出10个组分后,利用酵母双杂交系统再次筛选,发现有五个组分能增强两种蛋白的相互作用,(与空白对照组相比其中有两个组分有极显著差异)另外三个组分显著地抑制上述两种蛋白的相互作用,剩下的两个组分则没有差异.该实验还提示该酵母双杂交系统可能成为一种跟踪具有调脂功能的先导化合物的有效方法.     

氨基化硅胶固定化葡萄糖氧化酶的研究

利用溶胶-凝胶技术,以四甲氧基硅（TMOS）和γ-氨丙基甲基二甲氧基硅烷（APMDMOS）为前驱体制成了一种功能化的材料——氨基化硅胶.并以戊二醛为交联剂,利用该氨基化硅胶为载体对葡萄糖氧化酶（GOD）进行交联固定化,研究了TMOS用量、戊二醛浓度、给酶量、温度和pH值等因素对固定化GOD活力的影响,并考察了固定化GOD的热稳定性和贮存稳定性.红外光谱验证了氨基化硅胶交联固定化GOD的可行性.确定出了优化的固定化条件：TMOS用量为10%,戊二醛的浓度2.0%,给酶量1 600 U,最适pH和最适温度分别为5.2和32℃.固定化GOD具有良好的热稳定性和贮存稳定性.     

大量分离叶绿素a和b的方法

在原有分离叶绿素a和b的DEAE SepharoseCL 6B和SepharoseCL 6B柱层析法的基础上 ,用较大的层析柱 ,在保持分离效果的前提下 ,提高流速 ,并对层析柱进行原位再生处理 ,实现循环分离 ,可节省装柱和平衡时间 ,快速大量分离纯化叶绿素并可循环再生。 10 0 g菠菜叶可分离得到叶绿素a约 5 0mg ,叶绿素b约 15mg。     

牛膝多糖的组分分析及抗衰老活性研究

牛膝多糖 (Achyranthesbidentatapolysaccharides ,ABPS)是苋科植物牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)根中的水溶性多糖 ,先后用DEAE_Sepharosefast_flow柱和SephadexG_10 0柱将牛膝粗多糖分为 4个组分 ,分别命名为 :Con .1、Con .2、Con .3和Con .4。Micro_Kjeldahl试验表明 ,Con .1中含有氮元素 3 .95 % ,另 3个小分子组分不含氮元素。以果蝇为动物模型研究了该 4个牛膝多糖组分的抗衰老作用 ,结果表明 ,大分子组分Con .1对果蝇无抗衰老作用 ,而另3个小分子量组分在培养基中浓度为 2和 5mg/g(多糖质量 /培养基质量 )时 ,都可显著或极显著地使果蝇平均体重增加 3 .85 % - 5 .47% ,并使果蝇平均寿命延长 2 .6 1% - 3.16 %。     

新疆醉马草化学成分的研究

用95％和60％乙醇提取、溶剂萃取、硅胶柱层析、重结晶等方法从新疆醉马草提取分离得到8个活性化合物,根据IR、MS、NMR等光谱技术方法分别鉴定为adenosine(1),veratroylzygadenine(2),germerine(3),十六烷酸2,3-二羟基丙酯(4),3-O-glucoside-veratramine(5),胡萝卜甙(6),4′,6,7-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(7),蔗糖(8)。这些成分均为首次从该植物及该属中获得。     

生物防治因子

<正>以菌种培养在肉汁滤液并通过活性炭、离子交换树脂Amberlite CG一50(H')层析柱和硅胶柱层析的吸附作用分离出这种抗菌素。并通过薄层层析和高压液相色谱净化。Mndfomyc加D的分子结构式根据其物理化学数据     

用膨化柱填料的方法从红藻中规模分离纯化R-藻红蛋白(英)

以Phenyl_sepharose作为柱填料 ,用streamline柱层析技术从红藻 (Palmariapalmata (Lannaeus)Kuntze)中规模分离捕光色素蛋白———R_藻红蛋白。由于不是传统的从层析柱上方进样 ,而是用泵将样品从streamline层析柱的下方加样 (从下至上 ) ,因而解决了用一般层析柱分离R_藻红蛋白时海藻抽提液中大量的粘性多糖堵塞层析柱的难题。用P .palmata粗提液上样后 ,分别用 0 .2mol/L、0 .1mol/L和 0 .0 5mol/L的 (NH4) 2 SO4溶液从相反的方向 (即从上到下 )洗脱层析柱 ,发现这些洗脱液中的藻红蛋白纯度已经较高。然后将洗脱液透析去盐 ,用阴离子交换柱层析 (Q_sepharose)进一步纯化。经过这两次柱层析后 ,R_藻红蛋白的纯度 (OD565/OD2 80 )超过 3.5 ,高于一般认可的R_藻红蛋白的纯度标准 3.2 ;产率为每克冷冻P .palmata可纯化 0 .12 2mg高纯度的R_藻红蛋白 ,比使用一般分离方法的产率要高 10倍。这些结果表明 ,使用本文报道的方法纯化藻红蛋白 ,将会使作为生化检测试剂的藻红蛋白市场价格大幅度下降。     

一种构建 cDNA 文库时 Sepharose CL-4B 筛分 cDNA 的简化方法

构建 cDNA 文库时,为了提高获得全长 cDNA 的可能性,在进行连接和包装反应之前,应当采用Sepharose CL-4B 柱层析对 cDNA 首先进行筛分。一般的方法是在提取 mRNA 之后,利用逆转录酶合成cDNA 第一链,然后直接在第一链反应混合液中加入同位素、RNase H 和 E.coli DNA 聚合酶 I 示踪合成cDNA 第二链,再进行甲基化、连接接头并以限制性内切酶消化,上 Sepharose CL-4B 柱层析进行分离。显然这一程序由于多次使用同位素,增加了放射污染材料扩散的可能,也给整个实验过程带来不便。     

鼻咽癌转移淋巴结中EB病毒相关的DNA多聚酶的分离及其特性研究

一种新的DNA多聚酶已从鼻咽癌(NPC)转移淋巴结胞核酶液,通过DEAE-纤维素柱层析而被部分纯化,并可与细胞的α-及β-DNA多聚酶分开。 此酶有下列特点可与细胞DNA多聚酶区分:(1)可放DEAE-纤维素吸附,需用130mMK_2HPO_4缓冲液方可洗脱下来。(2)可被浓盐所激活,150——200mMKCl或75mM(NH_4)_2SO_4可使它显示最高的酶活性。(3)最适pH为8.0。(4)对磷酰甲酸盐的抑制较敏感。(5)能很好地利用某些合成模板,如poly(dA)·oligo(dT)_(10)及poly(dA)·oligo(dT)_(12-18)。但不能利用poly(rA)·oligo(dT)_(10),证明此酶并非细胞的γ-DNA多聚酶,而与巴基特淋巴瘤的EB病毒相关的(EBV)DNA多聚酶性质十分相似。对照的Raji细胞未见此种EBV-DNA多聚酶。 从鼻咽癌淋巴结中分离出此种EBV-DNA多聚酶,将对EB病毒与NPC的发病关系提供新的证据。     

离子色谱法测定ACYW135群脑膜炎球菌结合物中Y群及W135群多糖含量

目的利用离子色谱法即高效阴离子交换柱层析—脉冲安培检测法(HPAEC-PAD),测定ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖含量的方法,并加以验证。方法将ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖用三氟乙酸(TFA)水解为特异性单糖(葡萄糖、半乳糖),并去除水解液中残留的TFA,用HPAEC-PAD分析检测,用PA10糖分析柱分离单糖,电化学检测器测定葡萄糖及半乳糖含量,用Chromeleon色谱工作站记录并分析数据。对上述方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的检出限和定量限。结果 Y群和W135群多糖在TFA2.5 mol/L(终浓度)、90℃、4 h可完全水解为葡萄糖、半乳糖。对照品葡萄糖及半乳糖在0.10~60.00μg/m L范围内,质量浓度和色谱峰面积呈较好的线性关系,r均大于0.99,回收率为87.94%~109.80%,相对标准偏差(RSD)为1.00%~2.00%,检出限为0.05μg/m L(信噪比3∶1),定量限为0.10μg/m L(信噪比10∶1)。结论离子色谱法可同时检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群糖含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对相关疫苗生产过程中的质量控制。