烟草曲茎病毒Y128分离物及伴随卫星的分子鉴定

从云南保山田问表现曲叶症状的烟草植株上分离到病毒分离物Y128,病株在实验室可经烟粉虱（Bemisia tabaci）传播到健康烟草上。分别用针对烟草曲茎病毒（TbCSV）、云南烟草曲叶病毒（TLCYNV）、中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCCNV）及泰国番茄黄化曲叶病毒（TYLCTHV）等田间常复合侵染的云南粉虱传双生病毒的特异性引物对Y128 DNA-A进行PCR扩增,结果表明Y128是烟草曲茎病毒（TbCSV）的1个分离物。利用DNAβ的特异性引物1301和1302,在Y128中扩增到卫星DNA分子（Y128β）。对Y128进行DNAβ全序列测定及分析表明,Y128β拿长1350个核苷酸,其互补链上编码1个有功能的ORF（βC1）。Y128β的全序列与TbCSV各个分离物的卫星分子（Y2β、Y35β和Y115β）的同源性最高,分别为85．2％、94．3％和88％;与其它已报道的卫星DNAβ的同源性均低于56．1％。     

Smad7对Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用

研究人永生化支气管上皮BEP2D细胞中,作为Smad蛋白家族的抑制分子,Smad7对TGF-β信号通路中Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用.培养BEP2D细胞,瞬时转染Smad7真核表达载体pCISmad7.neo,TGF-β刺激,提取细胞核蛋白及总蛋白,用Western blot方法比较瞬时转染Smad7基因前后细胞核中Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的差异.结果,Smad3在TGF-b作用下有明显的核转位;转染Smad7后Smad3、Smad4的核转位显受到抑制.表明在BEP2D细胞中,Smad7对TGF-β/Smads信号通路的拮抗作用主要通过抑制Smad3的活化、Smad3/Smad4异源复合物的形成及核转位,从而拮抗TGF-β对细胞的生长抑制效应.     

生长速度对β干扰素工程菌稳定性和产物表达的影响研究

为了研究发酵培养阶段生长速度对重组人干扰素β(hIFN-β)工程菌稳定性、菌体密度和干扰素表达的影响,采用日本LE．Marubishi MSJ-50L发酵罐,在发酵过程中于诱导后通过控制不同的补料速度,检测低和高生长速度及发酵结束后菌体密度、稳定性和重组人干扰素β的表达量。诱导后维持低生长速度,发酵结束后平均密度A600值为7．52,表达量达20．7％,质粒稳定率好,达到91％,粗制干扰素收获2．37克;维持高生长速度,发酵结束后平均密度A600值达20．57,而表达量降为4．13％,质粒稳定率降为27％,粗制干扰素收获仅为0．59克。诱导后生长速度对工程菌稳定性和产物表达有明显影响。     

人肿瘤坏死因子β(hTNFβ)在变铅青链霉菌中的表达研究

以变铅青链霉菌为宿主研究了人INFβ(hTNFβ)的异源表达。应用链霉菌S.VENEZUELAC cbs762.70分泌产生的枯草杆菌蛋白酶抑制剂vsi基因的启动子、表达调控序列和分泌信号肽序列,分别对hTNFβ进行了直接分泌表达、分泌融合表达和胞内表达。将hTNFβ的cDNA分别直接融合于vsi信号肽序列下游2个氨基酸处、vsi全长基因之后以及vsi起始密码子ATG的下游,获得的表达盒分别克隆至链霉菌高拷贝质粒pIJ486,转化Streptomyces lividans TK24,获得了重组菌株S.lividans(pIJ486-hTNFβ),s.LIVIDANS(PIJ486-vsi-hTNFβ)和S.lividans(pIVPA-hTNFβ)。分别对不同的重组菌株进行摇瓶培养,对其培养的上清液和细胞裂解液进行SDS—PAGE和Westen杂交,结果表明：hTNFβ在重组菌株中均获得了表达,且直接分泌产物和胞内表达产物均具有生物学活性。hTNFβ直接分泌表达产物的分子量约为16kDa,NB培养基中培养48h时表达水平约为0．7mg／L。胞内表达产物分子量与对照重组hTNFβ一致(18．7kDa),但随培养时间的延长远步降解为16kDa,NB培养基中培养48h时的表达水平(25．1mg／L)远高于其直接分泌表达水平。     

Kap与Ran—GTP在核浆转运中的作用

生物大分子（cargo）的核浆转运是由一些转运因子介导的,这些因子包括Kap-α、Kap-β、Ran-GTP及其调节蛋白等。本文阐述了在核浆转运过程中,各因子之间的相互作用及其结构变化,并提出cargo被释放入核的可能机制及一些有待深入研究的问题。     

雌激素受体信号通路新进展

雌激素通过直接与两类核内雌激素受体ERα和ERβ结合,活化靶基因的转录,这是经典的雌激素受体信号转导途径。近来发现,雌激素受体还能够通过依赖或不依赖雌激素的方式与胞内一些信号通路对话,使自身被磷酸化而活化;雌激素受体还能与其它转录因子相互作用,调节自身或者其它转录因子的活化功能,参与ER阳性细胞的增殖调节。此外,雌激素能通过细胞膜上的雌激素受体进行信号转导,引起靶细胞的快速反应及活化靶基因转录,参与骨和心血管保护。     

多聚蛋白聚糖酶与骨关节疾病

多聚蛋白聚糖酶是ADAMTS家族中的一员,受多种细胞因子的调节。它可以降解多聚蛋白聚糖核心蛋白上至少五种不同的位点,使多聚蛋白聚糖降解造成关节软骨变性坏死。关节组织中多聚蛋白聚糖酶及其抑制剂的数量保持着动态平衡,从而维持关节软骨的正常代谢,一旦失衡就会产生病理性损伤。该从多聚蛋白聚糖酶的结构、活化过程、调节因素以及与其他相关生物大分子的关系多个角度阐述了多聚蛋白聚糖酶研究的进展及其与骨关节疾病的关系。     

人绒毛膜促性腺激素β亚基DNA疫苗的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)除了在正常的妊娠滋养层细胞中分泌外,在许多肿瘤细胞也大量分泌,是防治hCGβ依赖型癌症的有效目标分子之一.通过RT-PCR方法克隆全长的hCGβ基因,成功构建了PCR3.1-hCGβ DNA疫苗,其能够在HeLa细胞中高效表达hCGβ蛋白,表达的hCGβ蛋白主要存在于细胞内.将20 μg PCR3.1-hCGβ质粒DNA通过普鲁卡因盐酸盐(bupivacaine-HCl)药物诱导后接种小鼠肌肉,小鼠能够吸收质粒DNA,并表达编码的hCGβ蛋白抗原,表达的hCGβ被小鼠的免疫系统识别,同时激发hCGβ抗原特异性的体液免疫和细胞免疫反应,抗体滴度最高可超过1∶8000,并且这两种类型的免疫应答均能够在体外作用于HeLa细胞, 诱导其发生细胞凋亡,表明PCR3.1-hCGβ DNA疫苗激发的免疫反应在体外具有抗肿瘤作用.     

Smads蛋白家族与TGF—β的细胞内信号传导

Smads蛋白家族参与TGF－β的细胞内信号转导,TGF－β通过与Ⅰ型和Ⅱ型受体结合,形成受体复合物,Ⅰ型受体磷酸化激活R－Smads,R-mads与Co-Smads结合成为转录复合物进入细胞核内,通过与DNA结合的直接方式或与DNA结合蛋白结合的间接方式,结合SBEs,最终导致PAI－1等目的基因的转录,在此过程中,某些促进因子和（或）抑制因子的协调作用使TGF－β的信号转导处于一种协调有序的状态中。     

Smad蛋白信号网络

Smad蛋白家族是近年来发现的新的细胞内信号转导蛋白,哺乳类中共发现了有8种不同的Smad蛋白,可分为3个不同的亚族：R—Smad、Co—Smad和I—Smad。Smad蛋白在TGF—β超家族成员的信号转导中具有重要的作用。TGF—β超家族的二聚配体与细胞膜表面的Ⅱ和I型丝氨酸／苏氨酸激酶受体结合形成异四聚复合体。活化后的I型受体使R—Smad磷酸化,磷酸化的R—Smad与Co—Smad形成异聚复合体,进入细胞核,与其它转录协同子和抑制子共同调节靶基因的转录。此外,Smad蛋白还与其官信号通路相互作用。