TOX3基因RNAi慢病毒载体的构建及对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖的影响

旨在构建TOX3基因RNAi慢病毒载体并观察其对人乳腺癌ZR-75-1细胞增殖能力的影响。针对TOX3基因设计干扰靶序列,构建载体,测序正确后进行慢病毒包装及滴度测定。转染ZR-75-1细胞,荧光显微镜下观察表达GFP的细胞数目,实时荧光定量PCR及Western blot实验验证转染后ZR-75-1细胞中TOX3 mRNA和蛋白的表达。MTT及平板单克隆实验检测TOX3对ZR-75-1细胞增殖能力的影响。结果显示,各组载体序列正确,病毒滴度均2×108 TU/mL,表达GFP细胞数目均可达95%以上。各干扰组TOX3 mRNA及蛋白表达水平均降低,其中TOX3-shRNA-3组干扰效果最佳,转染后ZR-75-1细胞的增殖和单克隆形成能力下降。成功构建TOX3基因的RNAi慢病毒载体,沉默TOX3后ZR-75-1细胞的增殖能力下降。     

英语写后说口语教学法的效果与分析

目的:开发高效率的英语学习方法。方法:通过随机分组并对评分者设盲的实验教学法对比研究了"写后说"教学法与传统教学法的效果差别,并用调查问卷的方法考察了学生们英语自主学习的时间。结果:实验组(写后说组)口语和写作成绩均明显优于对照组(传统教学组),两组学生英语自主学习时间无显著差别。结论:写后说可以明显提高学生的英语输出能力及其学习效率。     

重组腺相关病毒介导的RNAi靶向治疗作用研究

目的:采用前期成功构建的靶向沉寂CDK2基因的重组腺相关病毒r AAV-sh RNA-CDK2转染人肝癌Hep G2细胞,研究其对人肝癌细胞增殖的抑制作用。方法:取人肝癌Hep G2细胞于裸鼠前肢腋下接种,构建裸鼠皮下移植瘤模型,将成瘤裸鼠随机分为三组:肿瘤组、NC对照组、r AAV-sh RNA-CDK2给药组。各试验组均通过尾静脉注射给药,每隔五天用游标卡尺测量肿瘤的长径(a)、短径(b),计算肿瘤体积。根据每组裸鼠移植瘤体积的平均值,绘制移植瘤生长曲线。于给药24 h后处死,称取瘤重,计算抑瘤率,应用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测各组肝癌组织中CDK2基因m RNA和蛋白的表达量,观察r AAV-sh RNA-CDK2对肝癌组织CDK2表达的影响;结果:r AAV-sh RNA-CDK2能够显著抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,其抑瘤率为72.18%;并能够下调肝癌组织中CDK2基因m RNA与蛋白表达量;结论:r AAV-sh RNA-CDK2实现了体内靶向治疗肝癌的目的,并确定静脉定量给药方式。     

腺相关病毒作为基因治疗载体在生殖系统中的分布及影响的研究进展

腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)作为一种基因治疗载体被广泛应用于医学相关的各个领域。大量以AAV为载体的基因治疗被应用于药物研究,但目前国内外没有相关的基因药物应用于临床,原因在于其安全性问题有待进一步研究。AAV具有器官靶向性,易于分布在靶器官,但在非靶器官也会分布。AAV在生殖系统的短暂分布降低了对其功能的影响,但不排除潜在影响。就目前的研究结果来看,AAV不会整合在生殖细胞,从而不会对子代产生影响。本文将综述目前以腺相关病毒介导的基因治疗中对生殖系统安全性的研究进展,从载体在生殖系统的分布、对生殖系统功能的影响以及对子代影响的三个方面进行阐述。     

18β-甘草次酸通过PGK1糖酵解途径抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡研究

基于磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)介导糖酵解途径研究18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid, GA)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, oxLDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的分子机制。采用oxLDL(100 mg/L)损伤建立体外人主动脉内皮细胞损伤模型,并给予不同浓度的GA(10、20和40μmol/L)及PGK1激动剂进行干预,Western blot法检测糖酵解关键酶PGK1、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)、己糖激酶(hexokinase 2,HK2)和丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)表达水平以及凋亡相关Bax、Bcl2、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,比色法检测细胞内乳酸和葡萄糖含量。结果表明,与对照组相比,oxLDL组内皮细胞葡萄糖消耗减少、乳酸分泌量增加,PGK1、GLUT1、HK2、PKM2、Bax、cleaved Caspase-3及cleaved ...     

人参皂苷Rg3通过调节自噬减轻脓毒症心肌损伤

摘要 目的：探讨人参皂苷Rg3（ginsenoside Rg3,Rg3）对脓毒症介导的心肌损伤的作用效果及机制。方法：本研究通过对小鼠进行盲肠结扎穿孔手术的方法构建脓毒症模型。32只BALB/c小鼠随机分为假手术组（Sham组）、脓毒症组（CLP组）、人参皂苷Rg3治疗组（Rg3+CLP组）以及自噬抑制剂干预组（3-MA+Rg3+CLP组）,每组8只。术后18 h分别留取各组小鼠血浆及心肌组织。通过ELISA方法检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）及半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达水平。通过HE染色观察心肌组织形态结构的变化。应用Western-blot方法检测自噬及NLRP3炎性小体相关蛋白（NLRP3、ASC、Caspase-1）的表达。结果：与Sham组相比,CLP组小鼠心肌组织结构紊乱,炎性细胞浸润明显。另外,Caspase-3活性增加,NLRP3炎性小体相关蛋白（NLRP3、ASC、Caspase-1）表达升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与CLP组相比,外源应用Rg3组小鼠心肌组织炎性细胞浸润减少,并且Caspase-3活性降低,NLRP3炎性小体相关蛋白表达下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,而部分自噬相关蛋白表达升高。应用自噬抑制剂后,较单纯应用Rg3组,心肌组织损伤明显,而NLRP3炎性小体活性增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：脓毒症时NLRP3炎性小体激活,释放大量的细胞因子,进而导致心肌损伤。而Rg3治疗后,可以调节心肌细胞自噬,抑制NLRP3炎性小体激活,进而减轻细胞因子对心肌细胞的损伤。本研究表明Rg3可能通过调节心肌自噬,抑制NLRP3炎性小体的激活,进而减轻脓毒症时心脏的损伤。     

基于虚拟筛选技术对氟康唑细胞毒性的机制评价

目的 探讨氟康唑对细胞是否具有毒性,能否用于防治细胞污染。方法 虚拟筛选与分子对接技术筛选潜在的毒性靶点。使用人肝癌SMMC-7721细胞、人胚肝HHL-5细胞与人胚肾HEK-293细胞进行体外实验。CCK8实验验证氟康唑对细胞活性的影响。Hoechst 33342/PI双染实验进行形态学观察。qRT-PCR实验进一步验证氟康唑对虚拟筛选所获的靶点是否有影响,明确对细胞影响的机制。结果 虚拟筛选前6个核心毒性靶点是IL-6、TP53、TNF、IL-1β、VEGFA以及EGFR。CCK8实验与Hoechst 33342/PI双染实验显示氟康唑对SMMC-7721细胞和HHL-5细胞具有抑制作用,对HEK-293细胞具有促增殖作用。qRT-PCR实验表明氟康唑导致细胞毒性的核心靶点是IL-6、IL-1β和EGFR。结论 氟康唑不适合广泛应用于预防细胞污染。     

膳食钠钾摄入与高血压

高血压是脑卒中、心肌梗死、慢性肾病发病和死亡的最重要的危险因素，也是全球疾病负担最重的疾病。相关研究表明，减少膳食钠或补充膳食钾均可以单独或协同降低血压；其中，盐作为高血压的主要环境影响因素已被广泛关注，而膳食钾的影响作用通常被忽略。最新研究发现，高血压发病机制的主要环境因素是人体钠过量与钾缺乏共同作用的结果，而不仅仅是受其中单一因素影响，钾的作用与钠同等重要。因此，本文就膳食钠钾摄入对高血压的影响机制进行阐述，以期为高血压的防治提供新思路。     

甘草有效成分及其作用机制研究进展

甘草是一种常见中药，资源丰富且药用价值高，已作为一种重要药物用于疾病治疗之中。近年来，甘草中黄酮类、三萜皂苷类、多糖类等有效成分被证实具有多种良性药理活性。甘草具有良好的抗炎、抗肿瘤、保肝、增强免疫等作用。本文主要介绍了甘草的有效成分及其作用机制，旨在为甘草的推广及临床应用提供参考。     

内源性二氧化硫对心肌损伤的作用及机制

二氧化硫(sulfur dioxide,SO₂)是一种具有强烈刺激性气味的酸性气体，以往常被认为是有害物质。内源性SO₂是继一氧化氮(nitric oxide,NO)、一氧化碳(carbon monoxide,CO)和硫化氢(hydrogen sulfide,H₂S)之后的第四种气体信号分子，可以在心血管组织中内源性生成，并且在心血管系统调节中发挥着重要的生理和病理学作用。SO₂对心功能发挥剂量依赖性的负性肌力作用，其中三磷酸腺苷敏感钾通道参与其中。SO₂还能减轻各种有害刺激引起的心肌损伤，在心肌缺血-再灌注损伤和心肌肥厚中发挥重要作用，作用机制与SO₂的抑制炎症和抗氧化作用有关。此外，SO₂还可以抑制心肌细胞的凋亡和自噬。因此，内源性SO₂在维持心血管系统的稳态中发挥重要作用。本文将围绕内源性SO₂生成代谢、心血管生物学效应及对内源性SO₂/天冬氨酸氨基转移酶(asp...