rAAV-shRNA-CDK2对肝癌人肝癌裸鼠血液系统的影响

目的:探讨新型基因药物rAAV-shRNA-CDK2对人肝癌裸鼠血液系统的影响,评估其安全性。方法:采用皮下接种人肝癌Hep G2细胞构建荷瘤裸鼠,10天后将其随机分为3组:肿瘤组、NC组及rAAV-shRNA-CDK2组,每组雌雄裸鼠各6只。通过尾静脉注射定量给药,15天后取眼球血并处死裸鼠。检测血常规指标和骨髓细胞周期。结果:所有裸鼠平均血小板体积略高于该周龄鼠的正常值范围,但各组间比较差异无统计学意义(P0.05);肿瘤组雌性裸鼠的中性粒细胞百分比显著高于rAAV-shRNA-CDK2组,而淋巴细胞百分比明显低于rAAV-shRNA-CDK2组(P0.05),但指标数值均在正常值范围内。各组雄性裸鼠骨髓细胞周期分布比较差异均无统计学意义(P0.05),而肿瘤组雌性裸鼠骨髓细胞G2/M期比例明显高于rAAV-shRNA-CDK2(P0.05),但两组其他周期骨髓细胞比例比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:rAAV--shRNA-CDK2并未对人肝癌裸鼠血液系统产生不良影响。     

基于肝癌CDK2 基因敲减对CyclinE 表达及树舌多糖GF对其影响的研究

目的:探究树舌多糖GF(GAPS.GF)对rAAV-shRNA-CDK2抑制肝癌细胞Cyclin E基因表达的辅助作用。方法:将细胞培养后的人肝癌HepG2以皮下注射的方式接种于裸鼠前肢腋下,接种后的裸鼠随机分为5组:NC(非相关序列)对照组、肿瘤组、rAAV-shRNA-CDK2组、树舌多糖GF组以及树舌多糖GF+rAAV-shRNA-CDK2组,各实验组均采取尾静脉注射定量给药。采用实时定量PCR和Western blot技术研究肝癌细胞Cyclin E基因m RNA和蛋白水平的表达情况,同时观察GASP.GF对其作用的影响。结果:树舌多糖GF+rAAV-shRNA-CDK2联合应用组对肝癌HepG2细胞增殖的抑瘤率为75.6%,对Cyclin E基因mRNA表达抑制率为69%,对Cyclin E基因蛋白表达抑制率为67.5%,比rAAV-shRNA-CDK2组分别提高了3.42%、1%和2.7%。结论:树舌多糖GF与rAAV-shRNA-CDK2联合应用可以显著提高肝癌的治疗效果,说明树舌多糖GF可以辅助r AAV-shRNACDK2对肝癌细胞Cyclin E基因的表达的抑制作用。     

腺相关病毒作为基因治疗载体在生殖系统中的分布及影响的研究进展

腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)作为一种基因治疗载体被广泛应用于医学相关的各个领域。大量以AAV为载体的基因治疗被应用于药物研究,但目前国内外没有相关的基因药物应用于临床,原因在于其安全性问题有待进一步研究。AAV具有器官靶向性,易于分布在靶器官,但在非靶器官也会分布。AAV在生殖系统的短暂分布降低了对其功能的影响,但不排除潜在影响。就目前的研究结果来看,AAV不会整合在生殖细胞,从而不会对子代产生影响。本文将综述目前以腺相关病毒介导的基因治疗中对生殖系统安全性的研究进展,从载体在生殖系统的分布、对生殖系统功能的影响以及对子代影响的三个方面进行阐述。     

重组腺相关病毒介导的RNAi靶向治疗作用研究

目的:采用前期成功构建的靶向沉寂CDK2基因的重组腺相关病毒r AAV-sh RNA-CDK2转染人肝癌Hep G2细胞,研究其对人肝癌细胞增殖的抑制作用。方法:取人肝癌Hep G2细胞于裸鼠前肢腋下接种,构建裸鼠皮下移植瘤模型,将成瘤裸鼠随机分为三组:肿瘤组、NC对照组、r AAV-sh RNA-CDK2给药组。各试验组均通过尾静脉注射给药,每隔五天用游标卡尺测量肿瘤的长径(a)、短径(b),计算肿瘤体积。根据每组裸鼠移植瘤体积的平均值,绘制移植瘤生长曲线。于给药24 h后处死,称取瘤重,计算抑瘤率,应用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测各组肝癌组织中CDK2基因m RNA和蛋白的表达量,观察r AAV-sh RNA-CDK2对肝癌组织CDK2表达的影响;结果:r AAV-sh RNA-CDK2能够显著抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,其抑瘤率为72.18%;并能够下调肝癌组织中CDK2基因m RNA与蛋白表达量;结论:r AAV-sh RNA-CDK2实现了体内靶向治疗肝癌的目的,并确定静脉定量给药方式。