代替蝗虫的实验材料—蝈蝈

蝈蝈(Gampsocleis gratiosa Brunner Wattenwyl)也称聒聒儿,属节肢动物门、昆虫纲、有翅亚纲、直翅目、螽亚目、螽嘶科、聒聒儿亚科。可经加工入药,有解毒、行水、止痛功能。因其鸣声悦耳,夏秋季常被人们笼养。笔者经数年实践,在中学动物教学中,将蝈蝈作为代替蝗虫的实验材料。现将蝈蝈与蝗虫相同及不同的特征简介如下。蝈蝈身体呈筒形,腹部略膨大。体表为绿色或绿褐包。体长为43—48毫米。躯体由头部、胸部和腹部三个体段构成(图1本文图见第11页)。     

Eph-ephrin介导反向信号传递的研究进展

双向信号传递是细胞间通讯领域中新近阐明的机制,酪氨酸激酶受体-配体(Eph-ephrin)介导的双向信号传递是此机制中的一个重要代表.Eph酪氨酸激酶家族受体及其配体ephrin家族成员是在神经发育、血管新生等方面起重要作用的分子,通过Eph向细胞内传递的信号称为正向信号,通过其配体ephrin的信号称为反向信号.Ephrin家族又可根据分子结构分为2个亚家族,其中ephrinB为跨膜蛋白,可通过酪氨酸磷酸化依赖和PDZ结合结构域介导2种方式向胞内传递反向信号,活化FAK、JNK、Wnt等信号通路,ephrinA为糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白,也具有反向信号传递功能.     

利用CRISPR/Cas9n double nick系统构建人DNAH2基因敲除的U2OS细胞株

基于CRISPR/Cas9n double nick技术构建人DNAH2(Homo sapiens dynein,axonemal,heavy chain 2)基因敲除的U2OS稳定细胞株,旨在研究DNAH2基因的生物学功能。首先设计并合成A、B两个sg RNA(Single guide RNA)以及各自的互补链,退火连接形成DNAH2 sg RNA-A、B双链,再分别与带有BbsⅠ粘性末端的p X462线性载体相连,形成p X462-DNAH2-A、p X462-DNAH2-B重组真核表达质粒。质粒共转染至U2OS细胞后,加入嘌呤霉素,以有限稀释法获得阳性单克隆细胞株,再以蛋白印迹实验检测DNAH2蛋白的表达,最后通过PCR-基因测序技术分析突变特点。结果显示A、B sg RNA双链成功插入p X462载体,U2OS-DNAH2-KO单克隆细胞株中DNAH2蛋白不表达,DNAH2基因发生移码突变,从而证实利用CRISPR/Cas9n double nick系统成功构建人DNAH2基因敲除的U2OS稳定细胞株,为研究DNAH2基因提供有利工具。     

血小板生成素改构体基因的克隆和序列分析

采用PCR技术,根据文献报道的鼠TPO成熟肽基因序列,设计并合成两对引物,以鼠TPO cDNA为模板,扩增获得mTPO N端153个氨基酸的478bp cDNA片段及鼠TPO全长1032bp cDNA片段,mTPO153片段与合成的碱性成纤维生长因子序列中Lys119-Lys135as的51bp肝素结合位点DNA片段连接,克隆到M13mp18及M13mp19载体中进行双向测序;同时将扩增的鼠TPO全长cDNA片段克隆到M13mp18及M13mp19载体中进行双向测序。证明获得鼠血小板生成素与肝素结合位点基因及鼠TPO全长基因,继之以pMAL-C2X为表达载体构建表达质粒,并经PCR及酶切鉴定。     

开发抗CD44抗体治疗急性髓系白血病

为了探讨抗CD44 抗体对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和分化的影响,为肿瘤靶向药物的开发提供前提和基础．应用流式细胞术检测抗CD44单克隆抗体HI313的亲和力,MTS检测HI313是否抑制NB4细胞生长,并检测细胞周期的变化,与初筛AML病人标本共培养检测其促分化作用．结果显示HI313抑制NB4细胞生长,能使细胞周期停留在 G0/G1期,并能有效诱导AML病人血细胞的分化．通过以上实验证明抗CD44抗体HI313对NB4细胞具有增殖抑制作用,作用机制可能与阻滞细胞周期于G0/G1期相关, 并对AML病人的细胞有一定的促分化作用,提示此抗体具有针对AML进行靶向治疗的潜力,为HI313人抗体的进一步基因工程改造及临床应用奠定了基础．     

脐带血干细胞的基础与应用研究

作为造血干/祖细胞(hematopoieticstemcells/hematopoieticprogenitorcells,HSCs/HPCs)的另一来源,脐带血已经应用于临床治疗多种恶性和非恶性疾病。脐带血中HSCs/HPCs的质与量是决定其临床应用效果的最重要因素。同时,脐带血中还存在多种非造血的干细胞和前体细胞,如间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)、内皮前体细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)和非限制性体干细胞(unrestrictedsomaticstemcells,USSCs)等,这些细胞可能会在未来的细胞治疗和再生医学中发挥重要作用。本综述还讨论了脐带血的临床应用及HSCs/HPCs的体外扩增、增加HSCs归巢和再植能力等提高其临床应用能力的相关研究。     

PIG7慢病毒表达载体的构建

目的:构建一个含有PIG7基因ORF区的表达载体pPRRL-PIG7-IRES,为研究PIG7基因的功能打下基础。方法:采用RT-PCR方法从经苯丁酸钠处理过的Kasumi-1细胞获得PIG7基因SIMPLE转录本的ORF片段,再用酶切-连接的方法将目的片段亚克隆入慢病毒表达质粒PRRL.SIN.CPPT.PGK/GFP.WPRE。结果:PIG7基因ORF区成功亚克隆入了慢病毒表达质粒PRRL.SIN.CPPT.PGK/GFP.WPRE。结论:成功完成了PIG7慢病毒表达载体的构建,为研究PIG7基因的功能打下了基础。     

间充质干细胞治疗急性放射性损伤的研究

急性放射性损伤是组织损伤的一种重要类型,目前未有较理想的治疗方案。间充质干细胞（MSCs）能够多向分化、自我更新,且具有分泌多种细胞因子、抗炎、免疫调节等生物活性。其在促进组织修复的优势显而易见,而移植的时机、剂量长期以来莫衷一是。致瘤性等安全问题制约其临床研究的进一步开展。近年来,MSCs趋向于无细胞化移植取得了明显成效。这一研究新进展势必迎来急性放射性损伤治疗的新格局,本文对此研究现状及进展进行综述。     

减毒沙门氏菌介导的血小板第四因子活性片段的放射保护作用研究

目的:观察减毒沙门氏菌携带的血小板第四因子活性片段PF417 70 的放射保护作用。方法:通过口服途经喂饲小鼠携带PF4活性片段的减毒沙门氏菌,在第 2次喂饲后小鼠接受 70 0cGy全身照射,然后观察PIRES2 EGFP PF417 70 在小鼠体内的表达,并观察小鼠的造血恢复情况。结果:在小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、小肠、外周血及骨髓均能检测到GFP的表达和转基因的整合。与对照组比较,实验组小鼠的生存期明显延长,照射后第 7d和 1 4d骨髓有核细胞数、骨髓培养的CFU GM和HPP CFC数量明显增加 (P <0 0 5 )。结论:首次应用减毒沙门氏菌SL32 61为载体来介导PF4活性片段的生物学作用,并证实通过口服途径可以保护小鼠免受放射损伤,并促进放射损伤后小鼠的造血恢复。     

口服携带人PF4基因的减毒沙门氏菌对大剂量化疗小鼠的促造血重建作用

目的:探索口服携带人PF4基因的减毒沙门氏菌对大剂量化疗小鼠造血重建作用。方法:通过在大剂量化疗前／后喂服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌,检测化疗后小鼠的生存率,小鼠在不同时间外周血血常规、骨髓细胞数、骨髓中Sca-1和C-kit细胞含量、不同时间骨髓生成各系细胞的集落数等。结果:在大剂量化疗前、后均口服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌组小鼠生存率高于只在化疗前口服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌组;两组口服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌组小鼠存活率明显高于PBS对照组及携带空载体的减毒沙门氏菌组;口服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌组小鼠在化疗后第9~12天的外周血血小板数、骨髓细胞中Sca-1和C-kit阳性细胞含量明显比对照组高,第5天、9天、12天的骨髓细胞总数、骨髓细胞形成Mix集落数明显增加。结论:口服减毒沙门氏菌SL3261为载体的PF4基因可以保护小鼠免受损伤,并促进化疗损伤小鼠的造血恢复。