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101.
魏建军 陈丙玺 杨亚萍 蔡富强 郭亦寿WEI Jian-Jun CHEN Bing-Xi YANG Ya-Ping CAI Fu-Qiang GUO Yi-Shou 《遗传》1993,15(2):33-35
RFLP(限制性片段长度多态)技术应用于遗传病的诊断始于1981年。在十年时间里,这一基因诊断技术和分析方法不断得到发展和改进。随着越来越多的致病基因和连锁DNA多态片段的分离和克隆,该技术在分析缺陷基因性质,携带者检出和产前诊断等方面将发挥重要作用.然而,RFLP技术复杂,耗费时间和费用较大,使其向临床推广应用面临很大局限性。因此,基因诊断的方法简化和技术改进大有必要。1985年首创的多聚酶链 相似文献
102.
为了将外源基因导入花椰菜原生质体获得转基因植株,本文研究了PEG介导的外源基因在花椰菜下胚轴原生质体中的瞬间表达。(1)20%PEG将质粒pBI221导入原生质体后GUS表达比13%PEG导入的高,但易造成原生质体损伤。(2)热激处理增强表达,但在随后的培养过程中易造成原生质体降解。(3)原生质体状况对表达有重要影响,5d龄下胚轴原生质体比8d龄的表达强。(4)不同质粒及启动子表达强度不同。质粒pKIWI101比pBI221表达强3倍左右。 相似文献
103.
牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工 总被引:2,自引:0,他引:2
通过寡核苷酸引导的定位突变,在人工全合成的第27位为Ile的牛生长激素释放因子[Ile27]bGRF(1-44)OH基因的5'端ATG后插入Trp密码子序列,并分别了构建了Pl promoter控制下、以β-半乳糖苷酶和protein A结合IgG domainB、C为载体蛋白的融合型基因表达质粒pBLE310和pBLPAE2D,在大肠杆菌中得到高效表达。经SDS-PAGE分析,表达产物β-Gal 相似文献
104.
化学突变具有底物结合部位的单克隆抗体制备含硒抗体酶 总被引:3,自引:1,他引:2
开发了一种制备抗体酶的新方法。用二硝基氯苯(DNCB)专一地与谷胱甘肽(GSH)的巯基反应,合成出半抗原GSH-S-DNP。用戊二醛将半抗原偶联到牛血清白蛋白(BSA)上,制成全抗原。再用标准的单抗制备法获得具有GSH结合部位的单抗(4A4IgG)。用苯甲基磺酞氟(PMSF)和H2Se相继处理该单抗,则将单拉结合部位上的丝氨酸(Ser)突变成硒代半胱氨酸(SeCys,因而在单抗结合部位上引入了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的催化基团。突变后的单抗具有GPX活性,其活力已达到天然GPX的数量级水平。动力学行为也与天然GPX类似。这种新的含硒抗体酶有优于GPX的一些特点。 相似文献
105.
人白细胞介素-3(humanInterleukin3,hIL-3)是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用PCR方法从人T淋巴细胞cDNA文库中扩增出0.44kb的DNA片段,并克隆入pUC19载体中。经DNA序列测定,确定0.44kb的PCR产物合完整的编码人白细胞介素-3成熟蛋白cDNA序列,并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ATG起始密码。构建的PL启动子控制下的hIL-3cDNA表达质粒,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导,获得hIL-3的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为15kd,约占细菌总蛋白的15%。表达产物经ELISA和Western-blot验证。hIL-3表达产物在细胞内形成包涵体,纯化包涵体,使产物纯度提高到70.8%,产物复性后,能明显促进hIL-3依赖细胞株生长,具有明显的生物活性。产物转移到PVDF膜后进行N端序列分析,N端16个氨基酸正确。 相似文献
106.
鸡马立克氏病病毒B抗原片段在大肠杆菌中表达 总被引:1,自引:0,他引:1
鸡马立克氏病病毒BamHI基因文库I3质粒中含有编码B抗原膜外Domain的DNA序列。经ScaI和SphI双酶酶解I3质粒,分离获得764bpDNA片段,并克隆进M13mp19中。DNA序列测定分析表明克隆片段为MDV-B抗原基因的494-1258bp部分序列。进一步分离NcoI-HindIII部分基因片(530bp),克隆于PLPromoter控制下的含有修饰型cIts857基因的表达载体中, 相似文献
107.
利用标记N-糖链的凝集素亲和层析法研究了佛波醇肉桂酸乙酸酯(PMA)对人肝癌细胞SMMC-7721表面糖蛋白上N-糖链结构的影响,发现100nmol/L的PMA处理5天后,可使细胞表面N-糖链中高甘露糖型和杂合型以及四天线、C2C2,6三天线复杂型的比例增高,而二天线复杂型降低。此结果与我们曾报道的视黄酸(RA)和双丁配环磷酸腺苷(db-cAMP)对该细胞表面N-糖链的影响相反。因RA和db-cAMP是SMMC-7721细胞的分化诱导剂,可抑制细胞生长;而PMA是该细胞的增殖促进剂,故细胞表面N-糖链的变化与细胞的分化和增殖密切相关。 相似文献
108.
Per Mrin Roland Rosmond Bengt-ke Bengtsson Carola Gustafsson Gran Holm Per Bjmtorp 《Obesity (Silver Spring, Md.)》1994,2(3):263-270
Visceral obese men were characterized by a decreased total GH secretion and diminished peak amplitude, size, and number. T-substitution was followed by elevation of IGF-I levels. The IGF-I increase correlated with the elevation of T-concentration, and was most pronounced in men with the lowest concentrations of free T from the outset. There were no detectable changes in total quantity, amplitude, size or number of peaks of GH secretion. Glucose, cholesterol and triglycerides as well as diastolic blood pressure decreased. There were no changes in thyroid or hematology variables. Visceral obesity in men has been reported to be characterized by low testosterone (T) and insulin-like growth factor I (IGF-I) concentrations, the latter suggesting a relative growth hormone (GH) deficiency. Since T and GH-secretions are interrelated, men with visceral obesity were substituted with T for 14 days, and diurnal secretion pattern of GH as well as IGF-I concentrations, and metabolic variables were followed. T-substitution of visceral obese men is followed by an elevation of IGF-I concentrations. It is suggested that this might be due either to minor, non-detectable increases in GH secretion, or to direct effects of T on IGF-I concentrations. The regulatory mechanisms by which T-administration are leading to metabolic and anthropometric improvements, might be direct effects of T, with or without mediation via GH secretion. 相似文献
109.
HUIQUAN ZHAO YANG ZHAO JAMES J. NORDLUND RAYMOND E. BOISSY 《Pigment cell & melanoma research》1994,7(3):131-140
Human TRP-1 has been immunopurified from normal human melanocytes cultured from black neonatal subjects and used to investigate the catalytic function of TRP-1 for the two substrates, L-tyrosine and L-DOPA. Immunopurified TRP-1 did not demonstrate DOPA staining on SDS/PAGE nor DOPA oxidase (DO) activity with either routine or modified assays. The purified TRP-1 also demonstrated no tyrosine hydroxylase (TH) activity using the routine Pomerantz assay. However, there was apparent TH activity exhibited by immunopurified TRP-1 under conditions with low tyrosine concentration (≤0.8 μCi/ml of 3H-tyrosine), prolonged incubation time (i.e., overnight) and in the absence of the cofactor L-DOPA. Using these latter specific conditions, TH activity was also detected in cell lysates from a tyrosinase-negative albino melanocyte line which exhibited no TH activity with the routine Pomerantz assay. In addition, TH activity under low substrate assay conditions was not exhibited in a melanocyte line derived from a TRP-1 deficient, Brown albino individual. However, the absence of TH in this Brown albino cell line could be compensated for by the addition of L-DOPA to the assay. These results suggested that TRP-1 has some tyrosine hydroxylase but no DOPA oxidase activity. We propose that one function of TRP-1 is to modulate tyrosinase activity by making DOPA available as a cofactor to perpetuate the initial steps in melanogenesis. 相似文献
110.
本文记述乌蜂虹亚科Usiinae2新种,分别隶属于Usia(乌蜂虹属)和Parageron(拟驼蜂虹属),并对有关属的特征及分类情况作了概述。 相似文献