用多寄主质粒pSUP106转化荧光假单胞菌Pfx—18

构建了荧光假单胞菌工程菌的转化系统,探索了多寄主质粒ｐＳＵＰ １０６在不同ＣａＣｌ２浓度、不同热激时间和荧光假单胞菌受体在不同生长期的转化频率,建立了一个简便可行的荧光假单胞菌转化方法。结果表明,在荧光假单胞菌Ｐｆｘ－１８生长到０Ｄ６００≈０．５５时,用２５ｍｍｏｌ／Ｌ,ＣａＣｌ２处理细胞,热激２ｍｉｎ,转化频率最高,可达１０＆５／ｎｇ ＤＮＡ。同时讨论了Ｍｎ＾２＋和Ｍｇ＾２＋对转化频率的影响,以     

异源基因片段在大肠杆菌克隆株中的缺失

在研究苏云金芽孢杆菌基因克隆和表达时,发现当把以色列亚种P19和cytA蛋白基因的重组质粒转入大肠杆菌MV1190后,cytA蛋白基因起始密码上游第18位碱基至下游第48位碱基之间缺失约30个碱基,导致cytA蛋白生物活性丧失。同样也发现,把大肠杆菌-苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT3101转化大肠杆菌TG1时,其载体中约1．6kb片段也发生类似缺失事件,说明大肠杆菌细胞对某些异源基因片段具有不相容性。     

转化crylC基因对苏云金芽胞杆菌杀虫活性的影响

将含基因crylC的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因CrylC的质粒 ,通过电脉冲法转入含基因CrylAb、CrylAc和cry2的对小菜蛾具有高毒力的苏云金芽胞杆菌野生菌株YBT-803-1中 ,得到转化子BMBY-003。PCR和SDS PAGE分析显示 ,CrylC可在其中正常复制、表达 ,但使受体菌部分内源质粒发生丢失。生物测定结果表明 ,转化子BMBY-003既对甜菜夜蛾有毒力 ,LC₅₀ 值     

苏云金芽胞杆菌菌株YBT833含不同杀虫晶体蛋白基因转化子的特性

用电脉冲方法将含有苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因ｃｒｙ１Ｃ的重组质粒ｐＢＭＢＬＣ转入野生菌株ＹＢＴ８３３,获得含不同杀虫晶体蛋白基因的４个转化子。质粒检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明它们均为菌株ＹＢＴ８３３含重组质粒ｐＢＭＢＬＣ的转化子。ＰＣＲ扩增表明,转化子ＹＢＴ８３３－１保留了原有的杀虫晶体蛋白基因;转化子ＹＢＴ８３３－２丢失了基因ｃｒｙ１Ａｂ;转化子ＹＢＴ８３３－３则丢失了所有的杀虫晶体蛋白基     

细菌基因工程杀虫剂研究进展

本文综述了在细菌基因工程杀虫菌构建过程中涉及到或可能涉及到的杀虫基因或因素的种类和特性 ,描述了工程菌构建的方法及策略 ,以及目前所获得的各类工程杀虫菌 ;讨论了杀虫工程菌的应用潜力和发展方向。     

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的分类

１９８９年Ｈｏｆｔｅ和Ｗｈｉｔｅｌｅｙ根据氨基酸序列的同源性和杀虫谱双重标准将苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因划分为５类１４亚类。根据双重标准出现的问题和冲突,给分类带来了困扰,为此１９９５年,只根据氨基酸序列的同源性进行分类。现已将基因分为２１群,４４亚群,６４类,１１６个亚类。本文介绍了纳入新系统的条件、分类原则、命名方法、定名步骤和分类中值得注意的问题。     

苏云金芽胞杆菌杀蚊基因在鱼腥藻中克隆和表达的初步研究

将苏云金芽胞杆菌以色列亚种的杀蚊晶体蛋白基因cry11A亚克隆到大肠杆菌－蓝藻的穿梭质粒载体pRL25C,然后用三亲本杂交的方法将重组质粒转移到一种具有固氮能力且可被蚊幼虫吞食的鱼腥藻（Anabaena）PCC7120中。Southernblot及Westernblot分析表明cry11A基因在鱼腥藻PCC7120中得以克隆和表达,但生物测定未能检测到转基因鱼腥藻对库蚊（Culex）的毒性,可能是因为带有苏云金芽胞杆菌自身启动子的Cry11A基因在鱼腥藻PCC7120中表达量不够高的缘故。     

苏云金芽孢杆菌以色列亚种P19基因的初步研究

以含有P19和cyt1A基因的以色列亚种72MD质粒的9 7kb HindⅢ片段为模板进行PCR扩增,分别获得Ｐ19基因和cyt1A基因片段。与表达 载体pUHE24连接转化大肠杆菌XL１,获得3个克隆株。LZ19含有P19基因;pLZcyt1A含 有cyt1A基因;LZ19A含有P19和cyt1A两个基因。利用cyt1A蛋白质可使大肠杆菌细胞致 死的特性,在IPTG诱导下,测定了各克隆基因表达对大肠杆菌有致死作用;pLZ19A对大肠杆菌的起始致死作用明显快于pLZcyt1A,这种现象可能是P19基因促进cyt1A基因高表达的结果。     

苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白Vip与Cry蛋白的协同作用*

将构建的营养期杀虫蛋白基因vip83表达质粒pBMB2 32 8和含杀虫晶体蛋白基因(cry1Ac1 0或cry1Ca)质粒同时电转化无质粒突变株BMB1 71并双抗筛选。经PCR特异引物扩增验证 ,分别得到含cry1Ac1 0和vip83、cry1Ca和vip83的双基因重组菌BMB2 830 1 71和BMB2 882 1 71。用单基因重组菌作对照 ,分别测定了营养期杀虫蛋白Vip83与杀虫晶体蛋白Cry1Ac1 0和Cry1Ca两组蛋白对 3种重要鳞翅目害     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基cry3A在鳞翅目特异菌株中的表达及杀虫特性

将对鞘翅目昆虫有特异毒性的苏云金芽孢杆菌cry3A基因电转化到只对鳞翅目昆虫有毒性的苏云金芽孢杆菌野生型菌株YBT803-1中,获得转化了BMBY-001。SDS-PAGE分析及镜检结果表明,cry3A基因可在该菌株中高效表达,但出发菌株中原有的cry1Ab、cry1Ac及cry2的表达则受到不同程度的影响。生物测定结果显示,转化子BMBY-001对柳蓝叶甲(鞘翅目)具有较高毒力,LC50为0.413μL／mL(浸叶法),对小菜蛾(鳞翅目)的毒力比野生受体菌YBT803-1有所降低,LC50值为3.319μL／mL。