真核普通转录因子

三类真核ＲＮＡ聚合酶分别选择性地转录细胞核基因,其转录特异并不决定于ＲＮＡ聚合酶本身,而是取决于被转录基的启动子元件及能识别并结合这些元件的普通转录因子,它们与ＲＮＡ聚合酶相互作用,在启动子区组装成转录起始复合物,从而起动转灵,已知的三类普遍转寻因子中,大多数为相应ＲＮＡ聚合酶所专用,只有少数因子中的个别亚基是三类酶所通用。本简述这三类普通转录因子的结构,性质及其在转录中的功能。     

苏云金芽胞杆菌质粒pBMB2062的克隆及遗传稳定载体的构建

从苏云金芽胞杆菌ＹＢＴ－１５２０菌株中克隆到１个小质粒ｐＢＭＢ２０６２,序列分析表明该质粒由２ ０６２个核苷酸组成。该质粒含２个编码框（ｏｒｆ１和ｏｒｆ２）,可分别编码由２８９个氨基酸和８０个氨基酸组成的蛋白质。这２个潜在的蛋白质分别与质粒的复制启始蛋白和复制蛋白同源。ｐＢＭＢ２０６２与２个已知同源质粒之间有２３个核苷酸的差异,这些差异引起了ｏｒｆ１编码框的变化。ｃＤＮＡ合成和ＰＣＲ检测显示与ｐＢ     

苏云金芽孢杆菌及其杀虫晶体蛋白 作用机制的研究进展

综合叙述了苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis和杀虫晶体蛋白的作用机制及在不同水平上解释这些机制的一些流行模型和有关亚分子结构的作用。     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3A在鳞翅目特异菌株中的？…

将对鞘翅目昆虫有特异毒性的苏云芽孢杆菌ｃｒｙ３Ａ基因电转化到只对鳞翅目昆虫有毒性的苏云金芽孢杆菌野隆型菌株ＹＢＴ８０３－１中,获得转了ＢＭＢＹ－００１。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析及镜检结果表明,ｃｒｙ３Ａ基因可在该菌株中高效表达,但出发菌株中原有的ｃｙｒ１Ａｂ、ｃｒｙ１Ａｃ及ｃｒｙ２的表达则受到不同程度的影响。生物测定结果显示,转子ＢＭＢＹ－００１对柳蓝叶甲（鞘翅目）具有较高毒力,ＬＣ５０为０．４１３μ     

炭疽芽孢杆菌致死因子突变株K518E和L519C的筛选及活性分析

为研究炭疽毒素致死因子( lethal factor,LF)致死机理,更有效地防治炭疽,对LF基因1 550～2 324 bp之间的片段进行了随机突变实验．通过细胞毒性实验筛选LF突变体库,结果获得5株活性降低突变体．进一步对单点突变体蛋白进行亲和纯化,首次得到了K518E、L519C两种突变蛋白,对其进行纯蛋白活性检测和竞争抑制实验,发现这两种突变蛋白活性显著降低,表明518位赖氨酸和519位亮氨酸对LF功能起着非常重要的作用．并且发现,K518E对野生型LF具有一定的抑制作用,对LF作用机理的研究有一定帮助．     

苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因特性分析

营养期杀虫蛋白是在苏云金芽胞杆菌营养期中发现的一种非晶体状胞外杀虫蛋白 .通过Southern杂交的基因定位实验 ,证实了营养期杀虫蛋白基因并非位于染色体和环型质粒上 ;在 2 0个不同血清型的 2 3种菌株中 ,营养期杀虫蛋白基因的存在率为 5 6 5 % (13 2 3) .同时对随机选择的 3个不同亚种菌株进行基因克隆和序列分析 ,表明其基因具有相当高的同源性 .运用生物信息技术 ,对营养期杀虫蛋白多肽进行了功能结构域比对分析 ,发现这 789多肽蛋白的N端 31至 15 0残基之间存在一种趋化信号传导因子相似序列 ,C端 5 36至 6 6 6残基之间则存在着纤维素结合结构域相似肽 .上述结果提示 ,营养期杀虫蛋白基因在苏云金芽胞杆菌天然菌株中高度保守并较为广泛分布 ,其编码蛋白的特殊结构提示了营养期杀虫蛋白潜在的功能特性 ,为进一步研究营养期杀虫蛋白奠定了基础 .     

鱼肝线粒体DNA的简易提纯方法

本文报道一种简易分离纯化线粒体DNA(mtDNA)的方法。即以差速离心或蔗糖梯度离心制得线粒体后,用RNase除去RNA,可得纯mtDNA,或用凝胶过滤、或低熔点琼脂糖法纯化之。所获纯mtDNA可用于限制性酶切图谱的组建和其片段的克隆。此法可避开冗长的昂贵的超速离心,故可为普通实验室所采用。文中还讨论了mtDNA纯化和得率的因素。     

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 CryⅣD基因在无晶体突变株中的克隆和表达

本文用HindⅢ/BamHⅠ对含Cry Ⅳ D基因的pGEMl质粒进行双酶切,获得了含CryⅣ和20-kDa蛋白质基因的5.4kb片段,将其与穿梭质粒pⅪ61连接,转化到感受态大肠杆菌TG1细胞,对克隆的重组质粒经质粒抽提,进行斑点杂交,Southern分析加以证实后,电转化到苏云金芽胞杆菌无晶体突变株Bti.IPS. 78/11细胞中,可形成不规则的六边形晶体。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,工程菌表达72-kDa杀虫晶体蛋白和20-kDa的蛋白质,对致倦库蚊有很高的毒力,其LC_(50)值为0.53ug/ml。     

几种鱼肝线粒体基因组的研究

我们用简易方法提纯了武昌鱼、乌鱼、草鱼和白鲢肝脏线粒体(mt)DNA。武昌鱼mt DNA经五种限制酶BamHI、BglⅡ、BglI、EcoRI和HindⅢ单酶完全酶解分别产生2、2、3、3和3个片段。乌鱼肝mt DNA用EcoRI、BamHI、pstI和BglⅡ单酶解分别得到1、2、2和2个片段。草鱼mt DNA亦作相应的酶解。所有各片段经琼脂糖凝胶电泳测定出它们的分子量(MW):武昌鱼肝mt DNA的MW10.2×10~6道尔顿,长约16.6kb;乌鱼肝mt DNA MW9.99×10~6道尔顿,长16.2kb;草鱼mt DNA的分子量10.13×10~6,长16.22×10kb。用七对限制酶双酶全酶解构建出武昌鱼mt DNA五种限制酶图谱。用六对限制酶双酶解构建出乌鱼mt DNA四种限制酶图。以酵母线粒体15S rRNA为探针对武昌鱼、白鲢鱼和乌鱼mt DNA12S rRNA基因进行了初步定位。