美国能源部的从基因组到生命计划

1990年至今 ,人类基因组计划已实施十年 ,为了进一步揭示生命 ,美国能源部于今年 2月 12日提出了继人类基因组计划后的又一个十年计划———从人类基因组到生命计划 (ｇｅｎｏｍｅｓｔｏｌｉｆｅｐｒｏｇｒａｍ)。这项计划的目的在于以从微生物到高等生物的ＤＮＡ序列为起点 ,有序地解决一系列生命进程的重大问题 ,最终达到对生命体系基本的、全面的、系统的理解。为迎接这一挑战 ,该计划提出了有步骤的四项技术目标 ,以最后实现在计算机上模拟“人工生命” ,对复杂生命体系进行精确的描述和预测。这四项技术目标 (ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｇｏ…     

降钙素基因相关肽基因直接注射大鼠

所设计的基因表达一个含降钙素基因相关肽(CGRP,37个氨基酸)、及其N端信号肽和C端酰胺化位点的多肽.该基因克隆到哺乳动物表达载体pBPV上并构成pBPV-CGRP.将此质粒DNA直接注射自发高血压大鼠并导致其血压在注射样品后3～22 d内明显下降,下降幅度超过了12％,在第16天甚至达到了24.42％.基因直接注射比CGRP本身的降压作用维持时间更久.     

人血管内皮细胞文库的构建

<正> 人体内大约有10~(12)个内皮细胞,它们均位于血管的内面,其面积约1000m~2,内皮细胞不仅为血液流动、防止血凝提供了一个光滑的表面,而且亦是防止某些细胞因子和细胞成分粘附和迁移的屏障。内皮细胞具有广泛的合成能力,可以产生几十种生物活性物质。另外,内皮细胞与血管平滑肌细胞及多种细胞有着广泛的相互作用。这种相互作用对维持机体     

抗癌基因──p53和Rb基因甲基化的研究进展

介绍p53和Rb基因甲基比研究的最新进展.CpG序列是DNA甲基化和基因突变的频发位点.p53和Rb基因的CpG序列易发生甲基化.其高度甲基化可能与基因功能失活有关,从而丧失抑制细胞增殖的功能,可能为肿瘤等发生的重要原因之一.     

中枢神经系统中的P物质

1931年 Von Euler 和 Gaddum 从马的脑和小肠中提取出一种能使家兔血压降低、离体肠管收缩且不为阿托品所阻滞的物质,称为 P 物质。长期以来,由于未得到 P 物质的纯品,又缺乏灵敏的测定方法,研究的进展一直缓慢。直到1971年,Chang 和 Leeman 分离、提纯了 P 物质,随后确定了它的化学结构,建立了 P 物质的放射免疫测定方法,才使 P 物质的研究有了较快的进展。现在有一些证据证明 P 物质是一种神经介质,它在中枢神经系统中具有选择性分布和特异性传递通路;特别在痛觉调制中有重要作用。     

脊髓蛛网膜下腔慢性瘘管埋植法

为了研究药物对脊髓机能的影响,过去常用离子透入、局部动脉内注射、急性蛛网膜下腔注射以及脊髓动物全身给药等方法。这些方法有的既作用于脊髓,又作用于脑,不利于定位;有的不宜于长期反复使用。最近,我们参照美国威斯康星大学药学院Yaksh和Rudy(1976)的方法,建立了大鼠脊髓蛛网膜下腔慢性瘘管埋植法。此方法简便易行,通过瘘管可长期、反复给药,在动物完全清醒的状态下进行各种慢性实验观察,以进行脊髓机能的定位研究。带有瘘管的大鼠可以存活4个月以上。一、瘘管的制备植入瘘管均选用外径0.61毫米,内径0.28毫米的PE-10聚乙烯管。瘘管的长度视大鼠体重而异,我们一般选用200～300克大鼠进行实验,瘘管全长12厘米,插入7厘米,可达腰膨大上缘。为固定瘘管插入脊髓蛛网膜下腔的深度,在离瘘管下端7厘米处,套以一直径约1.5毫米,长约3.0毫     

抗Ⅳ型胶原酶单链抗体在毕赤酵母中分泌表达

利用毕赤酵母系统表达抗Ⅳ型胶原酶人单链抗体。首先把目的基因克隆到毕赤酵母表达载体上,电击转化受体菌,在甲醇诱导下表达单链抗体。SDS－PAGE和免疫印迹显示毕酵母分泌表达人单链抗体,表达量约20mg/L酵母培养物。该表达系统与大肠杆菌相比,简化了表达产物的分离纯化程序。     

Human single chain antibody to vascular endothelial growth factor: gene cloning, high-level expression, affinity maturation and bioactivity

Using antibody phage display technique, a human single chain antibody to vascular endothelial growth factor (VEGF) has been cloned. The antibody expression reached 45% of the total bacterial proteins. The purification and refolding of the antibody were completed in one step by using gel filtration chromatograph. ELISA analysis showed that the antibody not only specifically bound to human VEGF, but also competitively inhibited VEGF reacting with its receptors. In order to raise the affinity of the single chain antibody, its heavy chain variable region was randomly mutated using error-prone PCR and an antibody mutant library was constructed, from which a mutant with higher affinity was screened out. The three-dimensional structure and binding affinity of wild type and mutant antibody were compared. Our study provided a potential reagent for tumor angiogenic therapy and a significant model for antibody high-level expression and affinity maturation.     

一种新型肿瘤血管抗体Fab的基因克隆与表达

鼠单克隆抗体AA98是我室研制的一株新型抗肿瘤血管抗体,体内实验证明它可以抑制血管生成,抑制肿瘤生长。从分泌抗体AA98的杂交瘤细胞中提取总RNA,采用逆转录PCR(RT-PCR)分别扩增重链Fd及轻链κ,并进行序列测定。将Fd和κ链依次与噬菌粒pComb3H连接,构建pComb3H-AA98Fab表达载体。在大肠杆菌中表达了AA98Fab。免疫印迹表明该Fab片段识别分子量为100kD的蛋白,具有原抗体AA98的抗原特异性。AA98Fab是研究抗体AA98作用机理的工具,也为制备重组免疫毒素,尝试肿瘤血管靶向治疗实验打下了基础。