BrdU抗性细胞特性的研究III．染色体加倍及SCE和胞质可溶蛋白电泳特点

BrdU被细胞吸收后可结合到染色体DNA 上,由于被BrdU标记的DNA对光极为敏感F91 因此可引起染色体结构的损伤。BrdU 还可抑 制细胞核着酸还原酶的活性,导致细胞死亡11770 尽管如此,有些细胞却能在含高浓度BrdU的培 养基中繁殖传代,其原因可以是细胞缺乏胸营 激酶(TK)活性［[1+1;细胞的BrdU吸收系统有 缺陷(a);细胞因核营酸代谢失去平衡而获得 BrdU 抗性[31。抗性细胞的DNA有的是部 分[701、有的是全部191被BrdU标记。某（些）染 色体的特异性改变是否与BrdU抗性有关？目 前的资料表明,BrdU抗性细胞的染色单体断 裂频率较高[1a1,或染色体数很不稳定［’］;但许多 BrdU抗性细胞株染色体平均数等于或略低于 亲本细胞的水平,染色体G一带图样没有明显的 差异131。因此,尚未发现BrdU抗性细胞有染 色体的特异性改变。少数药物抗性细胞蛋白质 合成过量的现象已引起人们很大的兴趣[1a,is7 BrdU抗性细胞是否也会出现蛋白质过量合成 的现象？ 我们过去报道了通过高浓度的BrdU 加可见光处理获得4个抗BrdU 亚系[11,本文 报道这4个抗性亚系细胞第17号染色体有极高 的加倍频率,以及某些胞质可溶蛋白过量合成 的现象,这些均未见报道。 姐妹染色单体互换（(SCE） 是反映正在进 行复制的染色体损伤和修复过程的一个极为敏 感的指标110,131。由于BrdU抗性细胞长期在含 高浓度BrdU 的培养基中生长,BrdU进人细 胞后便均匀地分布在姐妹染色单体DNA 上, 已达到某种程度的相对平衡状态,因此不可能 出现姐妹染色单体差别染色。本文报道采用特 殊的方法所观察到的BrdU抗性亚系SCE频 率,以及第17号染色体加倍对细胞SCE频率 的影响。除了我们过去报道的一个抗性亚系 SCE[a1外,尚未见其他关于BrdU抗性细胞SCE 的报道。     

BrdU抗性细胞特性的研究 Ⅲ.染色体加倍及SCE和胞质可溶蛋白电泳特点

BrdU被细胞吸收后可结合到染色体DNA上,由于被BrdU标记的DNA对光极为敏感,因此可引起染色体结构的损伤。BrdU还可抑制细胞核苷酸还原酶的活性,导致细胞死亡。尽管如此,有些细胞却能在含高浓度BrdU的培养基中繁殖传代,其原因可以是细胞缺乏胸苷激酶(TK)活性;细胞的BrdU吸收系统有缺陷;细胞因核苷酸代谢失去平衡而获得BrdU抗性。抗性细胞的DNA有的是部分、有的是全部被BrdU标记。某(些)染色体的特异性改变是否与BrdU抗性有关?目前的资料表明,BrdU抗性细胞的染色单体断     

利用毕赤酵母系统高效表达灵芝中的免疫调节因子LZ-8蛋白

根据Murasugi等发表的LZ-8基因的DNA序列,利用PCR方法从灵芝菌丝体的基因组DNA中扩增到lz-8基因.将该基因构建到毕赤酵母表达载体上,电激转化毕赤酵母.对转化子先后进行PCR和PCR-Southem鉴定,表明lz-8基因已转入毕赤酵母.转化子经发酵培养后用SDS-PAGE电泳方法检测发酵液,证明毕赤酵母...     

三氯乙烯对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性作用及机制*

目的:研究三氯乙烯(TCE)对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性作用及其机制,为寻找干预靶点提供实验依据。方法:斑马鱼胚胎来自于国家斑马鱼资源中心,分为DMSO组(对照组)、DMSO+CHIR组、DMSO+XAV组、TCE处理组、TCE+CHIR组和TCE+XAV组(TCE设置为1、10、100 ppb三个不同的浓度;DMSO:二甲基亚砜;CHIR:CHIR-99021,Wnt信号通路激活剂;XAV:XAV-939,Wnt信号通路抑制剂),每组60条。斑马鱼胚胎饲养于系统养殖水中,恒温28℃,每隔24 h更换养殖水,并分别加入相应药物。连续培养72 h,收集斑马鱼胚胎的心脏组织,提取RNA进行转录组芯片分析,并以荧光定量PCR验证Wnt信号通路相关基因的表达。结果:与对照组相比,三氯乙烯暴露导致斑马鱼心脏畸形显著增加,以心房心室比例异常、环化不全以及心包水肿等为主要表型。芯片分析结果显示,TCE处理组Wnt信号通路相关基因(Axin2、Sox9b、Nkx2.5)表达受到显著影响。qPCR结果进一步验证,TCE处理组与DMSO对照组相比,Wnt通路靶基因Axin2、Sox9b及Nkx2.5的mRNA水平显著下调(P＜0.05),提示Wnt信号通路被抑制。Wnt激活剂CHIR降低TCE导致的斑马鱼胚胎心脏发育异常,而添加Wnt通路抑制剂XAV后,斑马鱼胚胎心脏畸形率显著增加(P＜0.05)。结论:三氯乙烯暴露导致斑马鱼胚胎心脏畸形,Wnt信号通路参与三氯乙烯的心脏发育毒性。     

竹节参皂苷IVa通过Akt/mTOR通路保护胰岛β细胞损伤

摘要 目的：研究竹节参皂苷IVa（CHS）对高糖诱导的胰岛β细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法：采用高糖建立胰岛β细胞损伤模型,分为正常组、模型组、CHS给药低、中和高剂量组（25、50 和100 μM）。MTT法检测CHS对胰岛细胞存活率的影响,胰岛素释放实验检测CHS对胰岛β细胞功能的影响,试剂盒检测Caspase 3和细胞色素c的水平,蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、Akt、mTORC1、S6K蛋白表达和磷酸化水平变化。结果：与正常组比较,高糖使INS-1细胞存活率降低,胰岛素释放减少,同时Caspase-3,细胞色素c,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;与模型组比较,CHS可以明显逆转这一趋势（P <0.05）。此外,CHS可剂量依赖性的促进Akt,mTORC1和S6K磷酸化水平,进一步研究发现,CHS保护胰岛INS-1细胞的作用及对mTORC1和S6K磷酸化的作用被siAkt抵消。结论：CHS可以对抗胰岛β细胞的糖毒性,降低胰岛INS-1细胞凋亡,增加胰岛素释放水平,其作用机制可能与激活Akt/mTOR信号通路有关。     

脂蛋白与载脂蛋白

脂质是生物体内的一类重要物质,包括各种脂肪酸、甘油酯、类固醇、磷脂和糖苷脂等,其共同特点之一是在水溶液中溶解度低,甚至完全不溶。脂质能提供高能量,脂溶性维生素和必需脂肪酸也主要存在于食物的脂肪部分。在体内,脂质的生理功能除了作为能量的利用和储存方式,...     

斑腿树蛙染色体的组型分析

关于两栖类染色体的研究,在国内已有些报道,但迄今对斑腿树蛙的染色体组型尚缺了解,故本文对其组型作了初步的分析,现简报如下: 本实验所用材料,是从安徽黄山采集的20只(雌雄各10只)性成熟的斑腿树蛙,利用骨髓细胞,按常用的秋水仙素—低渗—空气干燥等直接制片法制作染色体标本,以Giemsa染液染色。 染色体标本制就后,首先在显微镜下计数100个以上的中期分裂相细胞,得出该种动物的二倍体染色体数;然后选择着丝点清楚,比较平直、分散较好且周缘清晰的10个中期分裂相细胞(♀♂各5个)在显微摄影机(OLYNPUS 100×7.5)下照相、放大和测量,算出每一个染色体的相对长度、臂比指数和着丝点指数,并以上述测量数据,将染色体进行编号与分组。     

小鼠二倍体细胞微细胞形成的机制研究

微细胞只含有少量的DNA,是实现体细胞 之间遗传物质转移的有效载体[1.Z,+1。用微细胞 作为媒介物,可以在不引人外源主要组织相容 性抗原基因的情况下实现基因的互补和导人新 的遗传物质〔幻,这对细胞工程的研究十分有用。