酶法合成天冬甜精中的几个问题

本文从酶、酶的作用底物和合成体系三个方面综述了酶法合成天冬甜精中的几个问题。     

红带滑胸针蓟马的生物学和防治

红带滑胸针蓟马Selenothrips rubrocinctus(Giard)为我国油桐的重要害虫。一年可发生6—8代,6—9月约20—30天完成一代。6—10月种群数量不断上升,尤以9—10月增殖幅度极大,是一年中为害最重的时期,造成早期落叶,影响碳水化合物转化为油脂,并削弱来年树势。高温干旱有利于此虫的发生,低温高湿不利其发生。三年桐是其喜食寄主,千年桐几乎是免疫的。加强桐林培育,适当密植提早郁闭及以40%乐果原液涂树干是防治此虫的可行而有效办法。     

星头啄木鸟繁殖司性的研究

为大力开展生物防治,保护和招引食虫益鸟提供重要依据,1978年4—6月,我们结合病虫害防治专业毕业论文工作,在山东省平邑县浚河林场对星头啄木鸟(Dendrocopos canicapillusscintilliceps)进行了观察。 星头啄木鸟喜生活在茂密林丛边缘,通风向阳,且较偏僻幽静,少受外界惊扰的地区。飞     

栽培大麦矮秆齐的染色体组型和Giemsa C一带带型

栽培大麦（Hordeum vulgare）一般多为二 倍体;染色体数目较少（2n二14),但体积较 大;各种物理或化学诱导的畸变类型丰富,以及 它的高度自花受精,容易进行人工杂交和具有 一些易于分类的表型特征等,使它成为植物细 胞遗传研究中广泛应用的实验材料。此外,也 常用作植物生理学、放射生物学、病理学及病毒 学研究的模式植物。     

产青霉素酰化酶的大肠杆菌AS1.76的固定化

用在有机溶剂中成型的琼脂凝胶包埋,结合戊二醛处理的方法,制备产青霉素酰化酶的大肠杆菌AS1.76固定化细胞,其细胞含量可达50%以上。固定化细胞水解青霉素 G 钾盐的最适 pH 为8.0,比原细胞约高0.3pH 单位;最适温度与原细胞一样,均为45℃。固定化后,Hg2+对酶抑制作用降低,但酶对Fe3+、Cu2+等金属离子敏感性增加。在无底物情况下,与原细胞相比,固定化细胞对 pH 和热的稳定性增加;4℃保存14个月无活力损失。固定化细胞装柱,在pH7.7,37℃下连续裂解青霉素 G,转化率达95%以上。155天无明显酶活力损失。     

昆虫悬吊飞行装置的设计和应用

<正> 昆虫悬吊飞行装置在研究昆虫的飞行能力,其中包括飞行持续时间,飞行速度及不同生理条件和生态因子对飞行的影响,是一种重要的装置。 黄冠辉等(1966)应用Treat的方法测定了粘虫飞行的持续时间和振翅频率,大久保宣雄(1973)应用     

电针降温作用及其与脑脊液中cAMP和PGE1含量变化的关系

cAM P和前列腺素E(PGE)是发热的重要中枢生物活性物质。我们实验室在最近的工作中发现,间断电针对家兔发热效应的抑制作用与其阻止脑脊液中cAMP和PGE_1含量升高有关。但这种实验是在给动物注射致热原后未出现发热效应时,给以多次电针刺激引起的     

自动控制培养基pH提高D型产气荚膜梭菌产毒素能力的研究

参考H.Pivnick等的报告,用自动控制培养基pH(以下简称自控pH)的方法,培养D型产气荚膜梭菌(Cloaridium perfringens,魏氏梭菌),以期提高毒素产量,增强肠毒血症菌苗的效力。     

肝素C5异构酶的表达优化及分子改造

肝素和硫酸乙酰肝素是一类应用于临床抗凝血的糖胺聚糖。肝素葡萄糖醛酸C5异构酶(Heparosan-N-sulfate-glucuronate 5-epimerase,C5,EC 5.1.3.17) 是肝素和硫酸乙酰肝素合成过程中重要的修饰酶,催化N-硫酸化肝素前体 (N-sulfoheparosan) 的D-葡萄糖醛酸 (D-GlcA) 上5号位羧基翻转生成L-艾杜糖醛酸 (L-iduronic acid,L-IdoA)。文中以大肠杆菌Escherichia coli为宿主对斑马鱼来源的肝素葡萄糖醛酸C5异构酶基因Glce进行重组表达优化与分子改造。比较了3种不同的表达载体pET20b(+)、pET28a(+) 和pCold Ⅲ对C5表达的差异情况,其中以嗜冷启动型载体pCold Ⅲ表达酶活最高,达到(1 873.61±5.42) U/L。为了进一步提高C5的可溶表达量,在N端融合促溶标签SET2后,可溶蛋白表达量比对照提高了50%,酶活达到 (2 409.25±6.43) U/L。在此基础上,通过理性设计对底物结合口袋进行定点突变,获得最优突变体 (V153R) 的酶活和比酶活分别为 (5 804.32±5.63) U/L和(145.14±2.33) U/mg,是原始酶的2.41倍和2.28倍。肝素C5异构酶改造与表达优化为酶法催化合成肝素奠定了基础。     

肠激酶在毕赤酵母中的分泌表达优化

肠激酶 (Enterokinase,EK) 是一类特异性识别切割DDDDK序列的丝氨酸蛋白酶,作为一种工具酶广泛应用于生物医药领域。目前,EK在毕赤酵母Pichia pastoris中的表达水平较低,难以应用。本研究比较了6种不同的信号肽SP1、SP2、SP3、SP4、SP7和SP8对毕赤酵母分泌表达EK的影响。在摇瓶水平上,与α-factor信号肽相比,SP1信号肽显著提高了EK的分泌表达 (从6.8 mg/L提高至14.3 mg/L),酶活从 (2 390±212) U/mL提高至 (4 995±378) U/mL。在此基础上,通过共表达毕赤酵母内源蛋白Kex2,EK酶活提高至 (7 219±489) U/mL。另外,N端融合WLR三个氨基酸进一步提高酶活至 (15 145±920) U/mL,比酶活为 (1 174 600±53 100) U/mg。EK在毕赤酵母中的高效分泌表达为未来应用奠定了基础。