| 肠激酶在毕赤酵母中的分泌表达优化 |
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| 引用本文： | 梁启星,石竟成,金学荣,堵国成,康振.肠激酶在毕赤酵母中的分泌表达优化[J].生物工程学报,2020,36(8):1689-1698. |
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| 作者姓名： | 梁启星 石竟成 金学荣 堵国成 康振 |
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| 作者单位： | 1 江南大学 生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122;2 江南大学 生物工程学院 糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 江南大学自主科研计划重点项目 (No. JUSRP51707A)，国家轻工技术与工程一流学科自主课题 (No. LITE2018-16) 资助。 |
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| 摘 要： | 肠激酶 (Enterokinase，EK) 是一类特异性识别切割DDDDK序列的丝氨酸蛋白酶，作为一种工具酶广泛应用于生物医药领域。目前，EK在毕赤酵母Pichia pastoris中的表达水平较低，难以应用。本研究比较了6种不同的信号肽SP1、SP2、SP3、SP4、SP7和SP8对毕赤酵母分泌表达EK的影响。在摇瓶水平上，与α-factor信号肽相比，SP1信号肽显著提高了EK的分泌表达 (从6.8 mg/L提高至14.3 mg/L)，酶活从 (2 390±212) U/mL提高至 (4 995±378) U/mL。在此基础上，通过共表达毕赤酵母内源蛋白Kex2，EK酶活提高至 (7 219±489) U/mL。另外，N端融合WLR三个氨基酸进一步提高酶活至 (15 145±920) U/mL，比酶活为 (1 174 600±53 100) U/mg。EK在毕赤酵母中的高效分泌表达为未来应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 毕赤酵母，肠激酶，信号肽，共表达，N端改造 |
| 收稿时间： | 2019/12/23 0:00:00 |
Optimization of enterokinase secretion in Pichia pastoris |
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| Qixing Liang,Jingcheng Shi,Xuerong Jin,Guocheng Du,Zhen Kang.Optimization of enterokinase secretion in Pichia pastoris[J].Chinese Journal of Biotechnology,2020,36(8):1689-1698. |
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| Authors: | Qixing Liang Jingcheng Shi Xuerong Jin Guocheng Du Zhen Kang |
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| Institution: | 1 Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;2 Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris enterokinase signal peptide co-expression N-terminal modification |
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