| 肝素C5异构酶的表达优化及分子改造 |
| |
| 引用本文： | 王兵兵,周正雄,金学荣,李江华,史仲平,康振.肝素C5异构酶的表达优化及分子改造[J].生物工程学报,2020,36(7):1450-1458. |
| |
| 作者姓名： | 王兵兵 周正雄 金学荣 李江华 史仲平 康振 |
| |
| 作者单位： | 1 江南大学 生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122;2 江南大学 生物工程学院 糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31670092)，国家重点研发计划 (No. 2018YFA0901401)，江南大学自主科研计划重点项目 (No. JUSRP51707A)，国家轻工技术与工程一流学科自主课题 (No. LITE2018-16) 资助。 |
| |
| 摘 要： | 肝素和硫酸乙酰肝素是一类应用于临床抗凝血的糖胺聚糖。肝素葡萄糖醛酸C5异构酶(Heparosan-N-sulfate-glucuronate 5-epimerase，C5，EC 5.1.3.17) 是肝素和硫酸乙酰肝素合成过程中重要的修饰酶，催化N-硫酸化肝素前体 (N-sulfoheparosan) 的D-葡萄糖醛酸 (D-GlcA) 上5号位羧基翻转生成L-艾杜糖醛酸 (L-iduronic acid，L-IdoA)。文中以大肠杆菌Escherichia coli为宿主对斑马鱼来源的肝素葡萄糖醛酸C5异构酶基因Glce进行重组表达优化与分子改造。比较了3种不同的表达载体pET20b(+)、pET28a(+) 和pCold Ⅲ对C5表达的差异情况，其中以嗜冷启动型载体pCold Ⅲ表达酶活最高，达到(1 873.61±5.42) U/L。为了进一步提高C5的可溶表达量，在N端融合促溶标签SET2后，可溶蛋白表达量比对照提高了50%，酶活达到 (2 409.25±6.43) U/L。在此基础上，通过理性设计对底物结合口袋进行定点突变，获得最优突变体 (V153R) 的酶活和比酶活分别为 (5 804.32±5.63) U/L和(145.14±2.33) U/mg，是原始酶的2.41倍和2.28倍。肝素C5异构酶改造与表达优化为酶法催化合成肝素奠定了基础。
|
| 关 键 词： | 肝素，葡萄糖醛酸-C5-异构化酶，异源表达，理性设计，底物结合口袋 |
| 收稿时间： | 2019/11/18 0:00:00 |
Expression optimization and molecular modification of heparin C5 epimerase |
| |
| Bingbing Wang,Zhengxiong Zhou,Xuerong Jin,Jianghua Li,Zhongping Shi,Zhen Kang.Expression optimization and molecular modification of heparin C5 epimerase[J].Chinese Journal of Biotechnology,2020,36(7):1450-1458. |
| |
| Authors: | Bingbing Wang Zhengxiong Zhou Xuerong Jin Jianghua Li Zhongping Shi Zhen Kang |
| |
| Institution: | 1 Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;2 Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | heparin glucuronic acid-C5-epimerase heterologous expression rational design substrate binding pocket |
|
| 点击此处可从《生物工程学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《生物工程学报》下载免费的PDF全文 |
|
