利用入境人员血清盘评价西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒

鉴于国内尚无明确的西尼罗病毒(West nile virus,WNV)感染病例报道,通过建立入境人员血清样品盘来评价自行研制西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA检测试剂盒。选择来自WNV感染区的入境人员血清286份,通过美国食品药物管理局(Food and drug administration,FDA)认证的FOCUS公司的West Nile Virus IgG Dxselect试剂盒以及Panbio公司的Dengue IgG Capture ELISA试剂盒筛选出评价用血清样品盘,平行比较评估自行研制的WNV IgG检测试剂盒结果,进一步对试剂盒的特异性,重复性和稳定性进行评价研究。结果显示,自行研制的试剂盒阳性检出率为35.6%,FOCUS West Nile Virus IgG Dxselect检测试剂盒则为32.5%,两者之间无统计学差异(χ2=3.05,P=0.0780.05),并具有良好的一致性(Kappa=0.837 2);其中两者的阳性检出符合率为91.18%,阴性符合率为95.34%,总符合率为92.66%。研制的间接ELISA方法诊断试剂盒具有良好的特异性,稳定性和敏感性,检测效果与境外权威认证的商品化试剂盒基本一致,为我国防控西尼罗病毒等外来传染病入境提供技术储备,也为尚未传入的传染病免疫试剂盒评价方法提供了参考依据。     

紫红獐牙菜7种酮类成分分离及体外抗氧化研究

本文研究紫红獐牙菜7个酮类的分离及抗氧化活性。采用大孔吸附树脂、硅胶、聚酰胺等柱色谱法、重结晶进行分离,NMR、紫外、质谱等波谱学方法进行结构鉴定;以常用抗氧化剂Vc和BHT为阳性对照,通过DPPH·法测定紫红獐牙菜口山酮成分清除自由基的能力,并计算各单体IC50。得出在一定浓度范围内,7个单体化合物的清除能力与浓度呈量效关系;由IC50得出1,3,7,8-四羟基酮、1,5,8-三羟基-3-甲氧基酮、2-D-吡喃葡萄糖基-1,3,6,7-四羟基酮对DPPH自由基清除能力强于Vc;其他单体的抗氧化能力都低于Vc和BHT。说明1,3,7,8-四羟基酮、1,5,8-三羟基-3-甲氧基酮、2-D-吡喃葡萄糖基-1,3,6,7-四羟基酮具有很强抗氧化活性,均可作为有效的天然自由基清除剂,具有很大的开发利用前景。     

流式细胞仪分选转基因斑马鱼胚胎荧光标记细胞的一种快速方法

荧光蛋白在特异组织和器官表达的转基因斑马鱼已经在发育生物学和疾病模型研究中得到了广泛的应用。这些转基因系有助于追踪和分析数量较少的细胞群。但是如果要分离得到这些细胞来定量分析mRNA或蛋白质的表达情况比较困难。利用流式细胞仪分选这些荧光标记细胞是一种解决办法。此方法在不同的实验室中被广泛地应用。也有相关流程的介绍。但是流程一般较为繁琐,操作比较困难。该文以从转基因斑马鱼Tg（Kdrl：EGFP）中分选绿色荧光蛋白阳性的血管内皮细胞为例,介绍利用流式细胞仪分选转基因斑马鱼荧光标记细胞的实验流程和技术要点。该文作者在前人工作的基础上结合大量的实验经验．发展并优化了一套操作简便、效率较高的流程来分选这些细胞,在此做详细的介绍给大家以供参考。     

盖娅假说:在争议中发展

自从1972年Lovelock提出盖娅假说已经过去了40年,但围绕它的争议却从未停止过。盖娅假说在反对者的批评中与支持者的证明中不断发展。当前,最极端形式的盖娅假说基本上已被摒弃,尤其是那种明显带有目的论的说法。弱盖娅提出的"有机体可以影响他们的环境,有机体与环境的反馈耦合可以塑造两者的进化"这两个观点也已经是普遍接受的事实。除此之外,盖娅假说提出的其他3个命题却饱受争议。(1)内在平衡的盖娅:生物调节反馈有助于环境的内在平衡。反对者认为,生物反馈稳定全球环境的说法,与冰芯记录和大量的气候反馈研究结果相矛盾的。支持者认为,地球生物-环境系统的内在平衡可以产生于正负反馈的混合。盖娅假说关心的是地球几十亿年的历史,盖娅假说在较短时间尺度内可证伪,并不意味着其在较长时间尺度内也可证伪。(2)最优的盖娅:生物调节环境,使环境更加适合生物的生存。关于有机体的繁荣主要是由于他们对环境的改变,还是由于他们对环境的适应,目前尚未有结论。但盖娅的支持者认为,当生物-环境系统受到干扰或崩溃时,主导过程将显现。拥有较强环境反馈的系统,将易于快速过渡到新的状态,而由适应主导的过程将改变得较为平缓。反对者同意生物通过生物调节作用影响环境条件以使自身受益,但是生物首先要适应环境条件通过自然选择才能得以繁荣发展的。地球形成这样的环境条件,很可能纯粹是一种运气。(3)自然选择的盖娅:生物调节反馈产生于达尔文式的自然选择。反对者认为,"自然选择支持促进生命效应"的说法并非普遍有效,只有当遗传特征赋予携带者繁殖优势时,自然选择才会支持它。自然选择是机制,而非原则。支持者认为自然选择并不是盖娅系统环境调节的必要条件;基于副产品的自然选择,可以解决许多进化论学者提出的物种合作中的欺骗问题;自然选择并不总是支持促进生命的效应,但在当遗传特征使携带者相对非携带者受益时,自然选择可以使特征携带者产生进化优势。虽然争议依然存在并将持续下去,但作为假说生产者,盖娅假说已经证明了它的价值。但是在人类活动对生物圈影响不断增强的背景下,盖娅假说必须与人类活动相结合,否则必然走向衰落,并被其他理论或假说所替代。在此基础上,未来盖娅假说的研究者们需要继续努力探索可以应用于生物圈的一般性原则,并坚持系统性的思考方法。在具体的方法方面,可以利用系统度量指标;建立新的模型,尤其是建立关于生物地球化学循环过程的机理模型;搞清楚不同尺度过程的成本与收益。     

高产γ-氨基丁酸低产桔霉素红曲霉(Monascus ruber)突变子1047筛选与发酵特性研究

以红曲米中筛选到的红色红曲霉菌株G为原始菌株,通过农杆菌介导T-DNA插入突变技术,成功构建了含有1 483株红曲霉突变子的T-DNA插入突变库。用HPLC等方法从突变库中筛选出10株γ-氨基丁酸(GABA)产量稳定高于原始菌株G的突变子,薄层层析结合HPLC技术分析了10株突变子发酵液中桔霉素的含量;其中突变子1047的GABA产量较高,为1.169g/L,是原始菌株G(GABA产量0.472g/L)的247.67%,桔霉素含量稳定低于原始菌株G。以红曲霉菌株G和突变子1047为实验材料,通过5 L发酵罐发酵并定时取样,HPLC等方法精确分析发酵液各种活性物质的含量;结果显示,突变子1047生长速度稍快于原始菌株G;GABA、莫纳可林K(Monacolin K)、红曲色素色价分别为2.201 g/L、83.892 mg/L、21.984 U/mL,是原始菌株G的279.67%、108.01%和182.35%;而桔霉素产量为1.976 mg/L,是原始菌株G的41.71%。因此,利用TDNA插入的方法对红曲霉进行育种,能产生稳定的遗传变化,在红曲霉资源的保护和利用上有一定潜力。     

H_2S与Ca~(2+)协同增强谷子对Cr~(6+)胁迫的耐受

继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后,第三种气体信号分子硫化氢(H2S)对植物体生长发育和环境胁迫应答的调控正在受到越来越多的关注。钙离子(Ca2+)是重要的第二信使,参与植物对多种胁迫的响应。该实验以谷子这种抗逆性较强的作物为材料,对其响应六价铬(Cr6+)胁迫过程中H2S和Ca2+信号的互作进行了研究。结果表明,Cr6+胁迫显著激活谷子幼苗的H2S产生系统,外源H2S预处理能明显降低Cr6+胁迫对谷子根尖细胞的损伤,而H2S的合成抑制剂羟胺(HA)预处理,使得Cr6+对谷子的毒害增强;进一步实验发现,H2S能激活Ca2+信号下游相关基因的表达,同时Ca2+能增强H2S的产生,表明在植物体内H2S和Ca2+信号存在复杂的联系。该研究也证明,H2S和Ca2+可以通过调节重金属离子转运蛋白增强谷子对Cr6+的耐受。     

慢性心力衰竭合并心房颤动发病的相关机制研究

目的：慢性心力衰竭（Chronic Heart Failure,CHF）是心血管系统常见的疾病,威胁患者的生存周期及生活质量。本研究针对慢性心力衰竭合并房颤的临床特征,进一步探讨其发病机制,为临床治疗提供依据。方法：将80例慢性心力衰竭患者平均分为两组,心律正常的为窦性心律组,伴有心房颤动的作为房颤组。观察并比较两组的左心室射血分数（LVEF）和二尖瓣1：7舒张期流速（E／A）等心脏功能指标。结果：房颤组左心室射血分数（LVEF）为（0．42±0．08）;二尖瓣口舒张期流速（E／A）为（0．65±0．22）;左心房内径（LAD）为（53．4±8．2）min。窦律组左心室射血分数（LVEF）为（0．45±0．09）;二尖瓣口舒张期流速（E／A）为（0．72±0．17）;左心房内径（LAD）为（46．7±7．9）min。房颤组患者的LVEF和E／A值均低于窦律组,而LAD则明显高于窦律组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。房颤组醛固酮、血管紧张素（AngII）、脑钠）]k（BNP）TZ超敏c反应蛋白（hs-CRP）均高于窦律组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：慢性心力衰竭合并房颤的发病与患者体内神经内分泌体液系统水平和心脏结构功能有关,具体发病机制需进一步深入研究。     

紫癜性肾炎临床表现与肾脏损伤相关性分析

目的：分析紫癜性肾炎患者的,临床及病理资料,探讨两者之间相关性,并利用临床指标评估肾脏损伤的程度。方法：收集哈尔滨医科大学附属第一医院肾内科’肾活检及临床确诊为紫癜性肾炎的101例住院病人。分别比较年龄、病程、紫癜出现的次数、血压、蛋白尿、尿红细胞数、血肌酐、血浆白蛋白及纤维蛋白原与肾脏损伤程度之间的关系。结果：紫癜性肾炎肾脏损伤程度与病程（P〈0．0001）、血压（P〈0．0001）、蛋白尿（P〈0．0001）、血肌酐（P〈0．0001）、纤维蛋白原（P=0．0189）呈正相关;与血浆白蛋白（P〈0．0001）呈负相关;与年龄（P=0．6515）、紫癜出现的次数（P=0．912）、血尿（P：0．0781）没有统计学差异。结论：紫癜性肾炎的I陆床表现及化验指标,如紫癜的病程、紫癜出现的次数、血压、蛋白尿、血肌酐、血浆白蛋白及纤维蛋白原等与肾脏损伤的严重程度密切相关,通过对临床表现及化验指标的评价分析可以对肾脏损伤程度作出初步评估,对肾活检患者的选择、治疗方案的确定及判断预后均有一定的指导意义。     

重组HSV-Ⅱ病毒疫苗的微载体悬浮培养生产工艺研究

经过重组减毒的Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒(rHSV-Ⅱ)在体外具有良好的溶瘤效果,并对小鼠体内B16R黑色素瘤内注射具有较高的疗效。重组HSV-Ⅱ病毒作为高效的新型溶瘤病毒疫苗有望用于肿瘤的临床治疗。Vero细胞是广泛应用于病毒疫苗生产的细胞基质,该细胞系对多种病毒敏感且产量高,其微载体培养安全,开发重组HSV-Ⅱ溶瘤病毒肿瘤疫苗的Vero细胞微载体反应器悬浮培养生产工艺具有重要的意义。以自主开发的低血清培养基为基础,对Vero细胞的反应器微载体球转球转移放大工艺及在位消化放大培养工艺进行了研究和比较,以新老微载体比3:1的比例成功实现了微载体球转球转移放大,建立了可实现至少四次/级连续放大的球转球转移放大培养工艺,可用于工业化生产过程。在此基础上,初步建立了以Vero细胞为基质的重组HSV-Ⅱ病毒疫苗反应器微载体无血清悬浮培养生产工艺,最大病毒滴度可达到6.62 lgTCID50/ml以上。为以Vero细胞为基质的无血清病毒疫苗规模化培养提供了一种简便、高效的工艺方法。     

萝卜种质资源耐抽薹性鉴定评价

以来源于国内外的73份代表性萝卜种质为研究对象,以4℃春化处理种子21 d,田间鉴定评价萝卜种质的耐抽薹性。结果显示,田间生长136 d时,9份国外材料仍未显蕾,表现为极耐抽薹,其中来源于韩国(6份)和日本(1份)的大萝卜资源7份,来源于日本的黑萝卜和俄罗斯的樱桃萝卜各1份。采用7个指标对显蕾开花的64份萝卜种质进行系统评价分析表明,各指标的次数分布基本符合正态分布,蕾期薹高略向低值区域偏离。方差分析结果显示,7个指标在不同材料间的差异显著。相关性分析表明,显蕾期和开花期的相关性达到极显著水平,显蕾期和开花期均可作为评价萝卜抽薹早晚的指标。抽薹速度分别与花期薹高、薹高差、抽薹天数的相关性达到极显著水平,综合了这4个指标的描述特性,较好地反映了不同萝卜种质的抽薹能力。花期薹高与薹高差、抽薹速度的相关性极显著,可用该指标评价抽薹能力,简单易行。分别用主成分分析和隶属函数法评价64份抽薹开花萝卜种质的耐抽薹性,不同耐性种质均能被很好地区分开,其中筛选出的2份耐抽薹种质的评价结果一致,主成分聚类分出1份极不耐抽薹种质。