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81.
CC to TT mutation in the mitochondrial DNA of normal skin: relationship to ultraviolet light exposure 总被引:1,自引:0,他引:1
We have previously reported that ultraviolet (UV)-specific (CC to TT) mutations in p53 gene can be detected in normal skin. This, however, cannot be used as a cumulative marker of UV exposure, since cells with the p53 mutation acquire a clonal growth advantage. Moreover, a large skin biopsy is necessary for each assay. In order to circumvent these problems, we have measured mitochondrial (Mt) DNA mutations; there are more than 1000 copies of the Mt genome per cell, and Mt genes are not directly involved in cell growth. We have established a sensitive allele-specific polymerase chain reaction (AS-PCR) assay capable of detecting one CC to TT mutation in Mt DNA among 10(7) wild-type genes using a mismatch allele-specific primer. With this assay, we found no mutation-positive samples from internal non-exposed tissue (stomach, colon, and blood) (0/50). In contrast, 17 out of 111 skin samples were positive: the mutation frequency in positive samples was around 10(7)-10(-6) (10-100 copies of mutant in 10(8) wild-type Mt DNA). In normal skin tissue, the prevalence of positive samples was higher in those from exposed sites (13/51) than in those from less-exposed sites (1/26) (p<0.05). However, a quantitative correlation between sunlight exposure and the accumulation of mutations was not found. We conclude that the UV exposure-associated CC to TT mutation in Mt DNA can be detected in normal skin, but that further studies are required to develop this as a quantitative marker for UV exposure. 相似文献
82.
To determine the role of calcium and calmodulin in mouse oocyte maturation, we examined the distribution of intracellular calcium during mouse oocyte maturation by using Mira Cal Imaging System. The calcium was present homogeneously in oocytes with intact germinal vesicle (GV) and accumulated around the nuclear region after GV breakdown(GVBD). The high level of calcium disappeared 6 hours later after GVBD. In the presence of 50 mumol/L BAPTA/AM, we failed to observe this phenomena. All eggs treated with 20 mumol/L W7, an antagonist of calmodulin, 50 mumol/L BAPTA/AM, a calcium chelator, could not develop to metaphase II (MII), although GVBD was not affected. We also detected the activity of a cytoplasmic maturation-promoting factor (MPF). W7 and BAPTA/AM had no effects on the rise of MPF activity in the course of maturation. We suggest that compartment distribution of calcium around nuclear region plays an important role in mouse oocyte maturation. 相似文献
83.
伏令夏橙与宁波金柑属间体细胞杂种变异研究 总被引:4,自引:0,他引:4
伏令夏橙(Citrussinensis(L.)Osbeck)+宁波金柑(FortunelacrasifoliaSwingle)属间体细胞杂种在田间生长6年,树势较弱,新梢经常枯死,树冠参差不齐。染色体检查发现,除了四倍体之外,还存在其它倍性的细胞,呈嵌合体状态。酯酶同工酶图谱上,多数单株出现一条双亲没有的新带。RAPD分析结果表明,部分植株丢失了亲本的标记带型,表现出遗传上的不稳定性 相似文献
84.
85.
用膨胀床金属亲和层析从淡菜匀浆液中分离纯化纤维素酶 总被引:4,自引:0,他引:4
研究了一种新的膨胀床金属亲和层析技术,即将金属亲和层析结合膨胀床层析,直接从淡菜(Blue mussel)匀浆液中纯化纤维素酶。研究了金属亲和配基种类、pH、离子强度及流速对酶吸附和解吸的影响,确定了酶洗脱条件和介质再生条件。一步可纯化纤维素酶194倍,酶收率达82%。本方法不需要预先去除细胞碎片,而且处理速率比传统层析技术高3~4倍。 相似文献
87.
将ADA-LacZ融合基因经直接注射导入小鼠皮肤组织,用注射点处的皮肤组织制作冰冻切片,经组织化学方法显示:此融合基因可在皮肤成纤维细胞中表达一种具有腺苷脱氨酶(ADA)和β-半乳糖昔酶(β-gal)双重酶活性的融合蛋白,这种直接将融合基因导入体内进行表达的方式.为在基因治疗和基因疫苗研究中探索一条新的简便可行的外源基因在体内表达的途径,提供了有益的实验依据。 相似文献
88.
天青Ⅰ显示细胞核DNA组织化学新技术及其应用田玉旺邢惠清邓永江黄晓南(北京军区总医院病理科北京100700)细胞核DNA含量的测定是直接反映肿瘤增殖能力的重要生物学指标。目前肿瘤细胞核DNA图像定量分析已成为一门新兴的检测技术并广泛应用于临床,常采用... 相似文献
89.
中国人肥胖基因真核表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
为研究肥胖(obesity)的病因及肥胖基因(ob)的表达与调控,根据文献报道的hob序列设计引物,经RT-PCR扩增中国人的ob基因(包括信号肽在内的cDNA全长540bp),PCR产物采用T-A克隆法首先连接到克隆载体pUC119,然后定向转移到经改造的真核表达载体pSV-β-lacZ,酶谱分析表达克隆基因为的人肥胖基因。 相似文献
90.