水稻Qb-SNARE蛋白OsNPSN11多克隆抗体制备、鉴定与应用

在真核生物细胞囊泡运输过程中的膜融合主要是由SNARE蛋白介导的, OsNPSN11是从水稻中克隆的Qb-SNARE家族基因, 文章将OsNPSN11构建到原核表达载体pET-30a中与6个His标签融合, 重组质粒pET-OsNPSN11转化BL21(DE3)0.5 mmol/L IPTG诱导4 h后获得了高效表达。用镍离子亲和树脂(Ni²⁺-NTA His Bind Resin) 纯化融合蛋白, 以纯化后的蛋白为抗原免疫新西兰家兔制备多克隆抗体, Western blotting结果显示, 该抗体能特异识别在原核系统表达的抗原, 以及水稻不同组织质膜组分中的OsNPSN11, 可用于转基因水稻中目标蛋白的表达分析。     

鸡miR-19a、miR-19b通过靶向抑制LIN9促进前脂肪细胞增殖

miR-17-92基因簇编码包括miR-19a、miR-19b在内的至少6个miRNA,在鸡细胞的增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中发挥重要作用,但其作用机制尚不清楚。生物信息学分析显示,细胞周期调控子LIN9是 miR-17-92 基因簇成员miR-19a和miR-19b的潜在靶点。为验证这一预测,构建含野生型LIN9 3′-UTR荧光素酶报告基因载体（psi-CHECK2-LIN9-3′-UTR-WT）及突变型报告基因载体（psi-CHECK2-LIN9-3′-UTR-MUT）,开展靶标LIN9的鉴定。复合转染结合报告基因酶活性测定结果表明,过表达miR-19a和miR-19b能显著抑制含野生型LIN9 3′-UTR的报告基因表达,而过表达miR-19a和miR-19b抑制剂显著提高野生型LIN9 3′-UTR报告基因的表达。实时定量PCR（RT-qPCR）证明,miR-19a和miR-19b 抑制剂对内源性LIN9 mRNA的表达没有影响,提示miR-19a和miR-19b可能不是通过降解mRNA调控LIN9表达。转染结合CCK-8细胞增殖分析显示,在鸡前脂肪细胞过表达LIN9 明显抑制细胞增殖。与此相一致的是,细胞增殖标志分子CyclinD1、c-Myc、PCNA、Ki67 的mRNA表达量明显降低。本研究证实,LIN9是miR-17-92 基因簇成员miR-19a和miR-19b的靶标,同时证实,LIN9抑制鸡前脂肪细胞的增殖。是否miR-17-92基因簇编码的其它mi-RNA成员也以LIN9为靶标尚不得而知,我室正在研究中。     

神农架极小种群植物庙台槭群落特征及种群动态

种群和群落特征分析是揭示物种濒危处境最有效的途径之一。庙台槭(Acermiaotaiense)是极小种群野生植物,被列为国家二级保护植物。然而,由于对神农架地区庙台槭资源状况和群落特征不清楚,严重制约该物种的保护成效。该研究对神农架地区庙台槭种群及其所在的群落开展调查,揭示群落的物种组成和群落结构;通过分析庙台槭种群的径级结构,绘制静态生命表和存活曲线,并分析种群动态变化指数,揭示庙台槭的种群动态。结果表明:(1)群落内共有木本植物33种,隶属于15科20属,群落内优势种为胡桃楸(Juglansmandshurica)、千金榆(Carpinuscordata)、金钱槭(Dipteroniasinensis)和华榛(Coryluschinensis);(2)庙台槭的相对优势度为2.23%,非群落内优势种;(3)神农架庙台槭分布范围十分狭窄(面积约1.7hm2),种群规模小(79株);(4)庙台槭种群内幼龄个体占比较高(79.75%),更新较好;(5)物种存活曲线属Deevey-II型,种群各龄级的死亡率基本相同,但在幼树阶段死亡率增高,在大树阶段(12.5cm≤胸径<17.5cm)...     

不同光照条件下4种满江红(Azolla)品系体内多酚氧化酶活性的变化

在生物学观察测定基础上,引入生化测定方法探讨不同光照条件下卡洲满江红３００１ 、小叶满江红４０１８ 、杂交萍９０４６ 和回交萍ＭＨ３１ 四个红萍品系体内多酚氧化酶（ＰＰＯ） 活性变化趋势。结果表明,光照影响各满江红品系的生长速率与抗霉腐病能力,随着光照强度减弱,各品系的生长速率和抗霉腐病能力都下降。在低光下,供试的满江红品系生物量与体内ＰＰＯ 活性的相关性显著（ｒ＝ ０ ．９５６０） 。低光下满江红各品系生长速率、抗霉腐病能力和体内ＰＰＯ 活性的从高到低依次为卡洲满江红３００１ 、杂交萍９０４６ 、小叶满江红４０１８ 和回交萍ＭＨ３１ 。从生理、生化角度讨论了满江红耐荫性与体内多酚氧化酶活性的关系。     

胰岛素减轻血管平滑肌细胞钙化但增加血管平滑肌细胞的磷转运

血管钙化是糖尿病、尿毒症和衰老等疾病共同的临床病理过程。临床资料显示,80%的血管损伤和90%的冠状动脉疾病的患者伴有血管钙化。既往认为,胰岛素通过具有维持血糖平衡、抗钙化作用的“良性”的磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinoesitol 3 kinase,PI3K)途径和促细胞有丝分裂、增     

油茶-鼠茅草复合系统细根空间分布及地下竞争

采用田间分层挖掘法和图像扫描分析法,研究油茶-鼠茅草复合系统中油茶与鼠茅草细根生物量及形态空间分布,并用Levins提出的生态位重叠公式计算了油茶与鼠茅草种间的地下竞争指数。结果表明:油茶和鼠茅草细根(≤1 mm)的平均生物量分别是0.52和0.38 mg·cm-3,油茶细根生物量是鼠茅草的1.37倍;在水平方向上,油茶细根生物量整体趋势随着距树干距离增加而下降,而油茶细根的根长密度与比根长随着距树干距离的增加而升高;鼠茅草的细根生物量整体趋势随着距树干距离增加先升高后下降,根长密度及比根长都分布比较均匀;不同水平距离鼠茅草的根长密度均大于油茶,除距树干90 cm外,油茶细根生物量与竞争指数均大于鼠茅草;在垂直方向上,油茶细根生物量是随着土层加深先升高再下降,根长密度随着土层的加深而升高,比根长分布均匀;鼠茅草的细根生物量及根长密度均随着土层的加深而下降,而比根长则随着土层深度增加而上升;除0~10 cm土层外,油茶细根生物量与竞争指数均大于鼠茅草。在油茶-鼠茅草复合系统中,油茶根系遭遇鼠茅草根系的竞争,作为生存策略,为了避开这种竞争,最大限度地获取土壤中的资源,其根系产生了各种可塑性反应。     

地榆成分3,3'-二甲氧基逆没食子酸-4-木糖苷对NIH3T3细胞促增殖作用及其机制研究

本文探讨地榆成分3,3'-二甲氧基逆没食子酸-4-木糖苷(3,3'-dimethyl ellagic acid-4-xylycoside,DEAX)促进NIH3T3细胞增殖和迁移的作用及其分子机制。实验采用UPLC-DAD-TOF-MS对受试样品DEAX进行纯度分析和结构验证,然后采用MTS法考察不同DEAX浓度和作用时间对NIH3T3细胞增殖的影响;应用划痕法检测不同浓度的DEAX对NIH3T3细胞迁移能力的影响,并分别使用ELISA和qRT-PCR检测DEAX处理NIH3T3细胞的TGF-β1和I型胶原蛋白的蛋白表达和mRNA表达水平。结果表明DEAX能显著促进NIH3T3细胞的增殖和迁移,提高TGF-β1和I型胶原蛋白mRNA表达及蛋白表达水平。提示DEAX可通过调控TGF-β1和I型胶原蛋白mRNA及蛋白表达水平,以促进NIH3T3细胞增殖和迁移,为阐明地榆促创面愈合的物质基础及其机理提供了实验依据。     

诱导间充质干细胞定向神经分化的研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有自我更新和多向分化的潜能,但分化方向缺乏引导性,受基因、细胞因子、内环境等多种因素的影响。干细胞移植是神经性疾病治疗的常用手段,本文就MSCs定向神经分化的诱导方法如神经营养因子、化学诱导剂、光生物调节、中药诱导等及其可能机制进行阐述。     

厚藤ASR基因克隆及功能初步分析

通过对厚藤(Ipomoea pes-caprae(Linn.)Sweet.)cDNA文库的筛选,获得了一个编码厚藤ASR(ABA-stress-ripening)基因的全长cDNA,命名为IpASR。研究结果显示,IpASR编码区全长648 bp,共编码215个氨基酸;蛋白质等电点为5.42,分子量为24.57 k D。通过在酵母中表达,发现IpASR能够提高转基因酵母的耐盐性及抗氧化能力。进一步以厚藤成年植株及幼苗为材料进行实时荧光定量PCR分析,结果表明,IpASR基因在厚藤成年植株各组织中广泛表达;高盐、甘露醇胁迫和ABA处理可诱导该基因在厚藤幼苗中的表达。结合GFP融合蛋白的亚细胞定位和生物信息学分析,发现IpASR蛋白为核蛋白,推测IpASR基因参与了厚藤生长发育的调控,并可响应ABA和非生物胁迫的诱导。     

镉对大型溞摄食能力和相关生理指标的影响

为了探究镉处理对大型溞(Daphnia magna)摄食能力的影响及其机制, 实验设置了3个镉浓度组(0.01、0.05和0.09 mg/L)、1个空白对照和2个处理时间(24h、48h), 研究镉处理对大型溞摄食率与滤水率、体内镉的蓄积量、总抗氧化能力(T-AOC)和脂质过氧化水平(MDA含量)以及乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响。结果显示, 摄食率和滤水率均随着镉处理浓度的增加而逐渐降低, 当镉浓度为0.09 mg/L, 处理48h时, 摄食率和滤水率均显著或极显著低于对照组(P<0.05,P<0.01), 且摄食率与对照组相比降低了43.89%; 镉在大型溞体内的积累量随镉处理浓度的增加而逐渐升高; T-AOC和MDA含量随着镉浓度的增加而增高, 镉浓度0.09 mg/L时, T-AOC和MDA含量与对照组相比有显著性差异(P<0.05), 且T-AOC与摄食率之间呈负相关性, 相关系数R2分别为0.9521、0.9389; AChE活性随着镉浓度的增加而降低, 镉浓度为0.05、0.09 mg/L时AChE活性显著低于对照组(P<0.05)。这表明镉在体内的蓄积不仅造成了大型溞的氧化损伤, 而且引起了神经系统传导功能的异常, 导致了大型溞摄食能力受到抑制。