鸡miR-19a、miR-19b通过靶向抑制LIN9促进前脂肪细胞增殖

miR-17-92基因簇编码包括miR-19a、miR-19b在内的至少6个miRNA，在鸡细胞的增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中发挥重要作用，但其作用机制尚不清楚。生物信息学分析显示，细胞周期调控子LIN9是 miR-17-92 基因簇成员miR-19a和miR-19b的潜在靶点。为验证这一预测，构建含野生型LIN9 3′-UTR荧光素酶报告基因载体（psi-CHECK2-LIN9-3′-UTR-WT）及突变型报告基因载体（psi-CHECK2-LIN9-3′-UTR-MUT），开展靶标LIN9的鉴定。复合转染结合报告基因酶活性测定结果表明，过表达miR-19a和miR-19b能显著抑制含野生型LIN9 3′-UTR的报告基因表达，而过表达miR-19a和miR-19b抑制剂显著提高野生型LIN9 3′-UTR报告基因的表达。实时定量PCR（RT-qPCR）证明，miR-19a和miR-19b 抑制剂对内源性LIN9 mRNA的表达没有影响，提示miR-19a和miR-19b可能不是通过降解mRNA调控LIN9表达。转染结合CCK-8细胞增殖分析显示，在鸡前脂肪细胞过表达LIN9 明显抑制细胞增殖。与此相一致的是，细胞增殖标志分子CyclinD1、c-Myc、PCNA、Ki67 的mRNA表达量明显降低。本研究证实，LIN9是miR-17-92 基因簇成员miR-19a和miR-19b的靶标，同时证实，LIN9抑制鸡前脂肪细胞的增殖。是否miR-17-92基因簇编码的其它mi-RNA成员也以LIN9为靶标尚不得而知，我室正在研究中。

Chick miR-19a and miR-19b Promote Chicken Preadipocyte Proliferation by Targeting LIN9